多発性硬化症の炎症メカニズムにおける 5-HT7 受容体の関与 (5-HTSEP)

5-HT7 受容体の発現調節は、MS 患者のさまざまなグループで、免疫学的状況と相関して調査されます。

• グループ 1: 急性再発の MS 患者
• グループ 2: ナタリズマブで治療された MS 安定患者

• グループ 3: 健康な人 (Etablissement Français du Sang より)

  1. 循環白血球細胞での 5-HT7 受容体発現評価 各グループは、異なる炎症状況を示します。 研究者は、5-HT7 受容体の発現に対する免疫学的状況の影響と、それを発現する細胞を特定したいと考えています。 循環白血球細胞の 5-HT7 発現を分析するために、研究者は上記の 3 つのグループの全血からフローサイトメトリー研究を行います。 最初のステップでは、研究者は、研究チームで特異性が検証された 5-HT7 受容体に対する抗体を使用して、5-HT7 循環陽性細胞の全体的な割合を分析します。 2 番目のステップでは、研究者は、MS の病状に関与しているリンパ球の中で、どの細胞型が 5-HT7 受容体を発現しているかを正確に特定します。 研究者は、ヘルパー細胞の各集団に対する抗体を使用します: Th1、Th2、Th17、および Treg。 研究者は、共標識を視覚化し、フローサイトメトリーの結果を確認するために、Cytospin (カバースリップ上の血液細胞の薄層) で免疫染色も行います。
  2. 5-HT7受容体発現とmRNA量の相関 また、5-HT7陽性細胞の増加とアップレギュレートされたmRNA量との間に相関関係が示されています。 3 つのグループについて、研究者は循環白血球細胞の 5-HT7 mRNA 量を決定します。 最初のステップでは、研究者は、定量的ポリメラーゼ連鎖反応 (qPCR) を使用して、循環白血球細胞の 5-HT7 受容体発現率と mRNA 量との相関関係を確認します。 2 番目のステップでは、研究者はセルソーティングを実行して、Th1、Th2、Th17、および Treg 細胞を分離し、5-HT7 mRNA を特異的に抽出します。 このようにして、研究者は、MS 上の 1 つまたは複数の特定の細胞型に対する 5-HT7 受容体の役割に対処できます。
  3. 免疫学的状況に応じた 5-HT7 受容体の調節 免疫応答の緩和における 5-HT7 受容体の潜在的な役割を理解するために、研究者は血清サンプルからの ELISA 投与によって免疫状況を特定します。 研究者は、IL1b、IFNg、IL17 などの炎症誘発性マーカー、および IL10 や IL4 などの抗炎症性マーカーについて調査します。 これらの結果は、各患者グループの 5-HT7 受容体の発現/量に関する以前の結果と相関します。
  4. in vitro でのリンパ球機能における 5-HT7 受容体の役割 上記の 3 つのグループの血液サンプルから、研究者は in vitro で末梢血単核細胞 (PBMC) を分離し、サイトカインを産生および放出する機能における 5-HT7 受容体の役割を評価します。 . 研究者は 1 つまたは複数の 5-HT7 リガンドで PBMC を刺激し、IL1b、IFNg、IL17 などの炎症誘発性マーカー、および IL10 や IL4 などの抗炎症性マーカーを使用して上清から ELISA 投与を行います。 細胞免疫標識は、細胞表面の 5-HT7 受容体を可視化するために実行されます。
  5. 5-HT7 受容体アイソフォームの同定 5-HT7 受容体には 3 つの形態 (5-HT7a、5-HT7b、5-HT7d) があります。 しかし、それらの薬理学的機能の違いはまだ説明されていません。 研究者は、qPCR によってこれらの異なるアイソ フォームを識別することを提案します。 前述のように、第 1 段階では循環白血球細胞について、第 2 段階では細胞選別後に Th1、Th2、Th17、および Treg 細胞を分離します。