다발성 경화증의 염증 기전에서 5-HT7 수용체의 의미 (5-HTSEP)

5-HT7 수용체의 발현 조절은 MS 환자의 다른 그룹에서 면역학적 맥락과의 상관관계에서 조사될 것입니다:

• 그룹 1: 급성 재발이 있는 MS 환자
• 그룹 2: 나탈리주맙으로 치료받은 MS 안정 환자

• 그룹 3: 건강한 사람들(Etablissement Français du Sang 출신)

  1. 순환하는 백혈구 세포에 대한 5-HT7 수용체 발현 평가 각 그룹은 서로 다른 염증 맥락을 나타냅니다. 연구자는 5-HT7 수용체 발현에 대한 면역학적 맥락 영향과 이를 발현하는 세포를 결정하고자 합니다. 순환하는 백혈구 세포에서 5-HT7 발현을 분석하기 위해 조사자는 위에서 언급한 세 그룹의 전혈에서 유세포 분석 연구를 수행할 것입니다. 첫 번째 단계에서 조사자는 우리 연구팀에서 특이성이 검증된 5-HT7 수용체에 대한 항체를 사용하여 5-HT7 순환 양성 세포의 전체 비율을 분석합니다. 두 번째 단계에서 연구자는 MS 병리와 관련된 림프구 중 어떤 세포 유형이 5-HT7 수용체를 발현하는지 정확히 파악합니다. 연구자는 Th1, Th2, Th17 및 Treg와 같은 각 모집단 t 헬퍼 세포에 대한 항체를 사용할 것입니다. 조사자는 또한 공동 라벨링을 시각화하고 유세포 분석 결과를 확인하기 위해 Cytospin(커버슬립에 있는 혈액 세포의 얇은 층)에서 면역염색을 수행합니다.
  2. 5-HT7 수용체 발현과 mRNA 양의 상관관계 또한, 5-HT7 양성 세포의 증가와 mRNA 양의 상향 조절 사이에는 상관관계가 있는 것으로 나타났다. 세 그룹에 대해 조사자는 순환하는 백혈구 세포에서 5-HT7 mRNA 양을 결정할 것입니다. 첫 번째 단계에서 조사자는 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR)을 사용하여 5-HT7 수용체 발현율과 순환하는 백혈구 세포의 mRNA 양 사이의 상관관계를 확인합니다. 두 번째 단계에서 조사자는 세포 분류를 수행하여 Th1, Th2, Th17 및 Treg 세포를 분리하고 구체적으로 5-HT7 mRNA를 추출합니다. 이러한 방식으로 연구자는 MS에서 하나 이상의 특정 세포 유형에 대한 5-HT7 수용체 역할을 해결할 수 있습니다.
  3. 면역학적 상황에 따른 5-HT7 수용체 조절 면역 반응 조절에 대한 5-HT7 수용체의 잠재적인 역할을 이해하기 위해 연구자는 혈청 샘플에서 ELISA 투여량으로 면역 상황을 식별할 것입니다. 연구자는 IL1b, IFNg, IL17과 같은 전염증성 마커와 IL10 및 IL4와 같은 항염증성 마커에 대해 조사할 것입니다. 이러한 결과는 각 환자 그룹에 대한 5-HT7 수용체 발현/양에 관한 이전 결과와 상관관계가 있을 것입니다.
  4. 시험관 내 림프구 기능에 대한 5-HT7 수용체 역할 위에서 언급한 세 그룹의 혈액 샘플에서 연구자는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 시험관 내에서 분리하여 사이토카인 생성 및 방출 기능에 대한 5-HT7 수용체 역할을 평가합니다. . 연구자는 하나 이상의 5-HT7 리간드로 PBMC를 자극하고 IL1b, IFNg, IL17과 같은 전 염증성 마커 및 IL10 및 IL4와 같은 항염증성 마커로 상청액에서 ELISA 용량을 수행합니다. 세포 면역표지는 세포 표면에 5-HT7 수용체를 시각화하기 위해 수행됩니다.
  5. 5-HT7 수용체 이소폼의 확인 5-HT7 수용체에는 세 가지 형태(5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d)가 있습니다. 그러나 이들의 약리학적 기능에 대한 차이점은 아직 설명되지 않았습니다. 조사자는 qPCR에 의해 이러한 상이한 이소형을 식별할 것을 제안합니다. 앞서 기술한 바와 같이, 첫 번째 단계에서는 순환하는 백혈구 세포에서 그리고 두 번째 단계에서는 세포 분류 후 Th1, Th2, Th17 및 Treg 세포를 분리합니다.