Ta strona została przetłumaczona automatycznie i dokładność tłumaczenia nie jest gwarantowana. Proszę odnieść się do angielska wersja za tekst źródłowy.

Implikacja receptora 5-HT7 w mechanizmach zapalnych w stwardnieniu rozsianym (5-HTSEP)

16 lutego 2022 zaktualizowane przez: Centre Hospitalier Régional d'Orléans

5-HTSEP: Implikacja receptora serotoniny 5-HT7 w mechanizmach zapalnych w stwardnieniu rozsianym

Stwardnienie rozsiane jest przewlekłą chorobą autoimmunologiczną związaną z reakcją zapalną szkodliwą dla ośrodkowego układu nerwowego. Zaburzenie równowagi immunologicznej dotyczy komórek Th1 i Th17 w korelacji z zaburzeniem mechanizmów regulatorowych, takich jak komórki Treg. Pomimo wieloletnich badań, mechanizmy pozostają niejasne.

Serotonina (5-HT) wydaje się być celem terapeutycznym w leczeniu stwardnienia rozsianego. Rzeczywiście, kilka badań wykazało przeciwzapalny potencjał tego neuroprzekaźnika, a także jego wrażliwość w kontekście zapalnym. Co więcej, ostatnie badanie wykazało, że 5-HT może zmniejszać proliferację limfocytów T CD4 i uwalnianie prozapalnych cytokin in vitro.

Działanie ochronne 5-HT wykazano również w mysim modelu eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE) z redukcją odpowiedzi zapalnej, a także zmniejszeniem uszkodzeń rdzenia kręgowego.

Najnowszy odkryty receptor, receptor 5-HT7, został zidentyfikowany jako obiecujący cel w leczeniu zaburzeń neurologicznych związanych z kontekstem zapalnym. Obecny u ludzi i myszy receptor ten rozprzestrzenia się na powierzchni wielu komórek, takich jak limfocyty T, makrofagi, komórki dendrytyczne, a także neurony, astrocyty i mikroglej.

Biorąc pod uwagę znaczenie dodatnich komórek dla receptora 5-HT7, w kontekście zapalnym obserwowanym w stwardnieniu rozsianym, badacz proponuje zbadanie ekspresji receptora w próbkach krwi od pacjenta ze stwardnieniem rozsianym.

Przegląd badań

Status

Zakończony

Warunki

Interwencja / Leczenie

Szczegółowy opis

Modulacja ekspresji receptora 5-HT7 będzie badana w korelacji z kontekstem immunologicznym, w różnych grupach pacjentów z SM:

  • Grupa 1: Pacjenci ze stwardnieniem rozsianym z ostrym nawrotem
  • Grupa 2: stabilni pacjenci ze stwardnieniem rozsianym leczeni natalizumabem

  • Grupa 3: Zdrowi ludzie (z Etablissement Français du Sang)

    1. Ocena ekspresji receptora 5-HT7 na krążących komórkach leukocytów Każda grupa przedstawia inny kontekst zapalny. Badacze chcą określić wpływ kontekstu immunologicznego na ekspresję receptora 5-HT7 i które komórki go wyrażają. Aby przeanalizować ekspresję 5-HT7 na krążących komórkach leukocytów, badacz przeprowadzi badania metodą cytometrii przepływowej z krwi pełnej trzech grup wymienionych powyżej. W pierwszym etapie badacz przeanalizuje ogólny wskaźnik krążących komórek dodatnich pod względem 5-HT7, stosując przeciwciało przeciwko receptorowi 5-HT7, którego specyficzność została potwierdzona w naszym zespole badawczym. W drugim etapie badacz określi, który typ komórek spośród limfocytów biorących udział w patologii SM wykazuje ekspresję receptora 5-HT7. Badacz użyje przeciwciał przeciwko każdej populacji komórek pomocniczych t: Th1, Th2, Th17 i Treg. Badacz przeprowadzi również barwienie immunologiczne na Cytospinie (cienka warstwa komórek krwi na szkiełkach nakrywkowych) w celu wizualizacji wspólnego znakowania i potwierdzenia wyników cytometrii przepływowej.
    2. Korelacja między ekspresją receptora 5-HT7 a ilością mRNA Ponadto wykazano korelację między wzrostem liczby komórek 5-HT7-dodatnich a ilością mRNA regulowaną w górę. Dla trzech grup badacz określi ilość mRNA 5-HT7 na krążących komórkach leukocytów. W pierwszym etapie badacz sprawdzi korelację między szybkością ekspresji receptora 5-HT7 a ilością mRNA w krążących komórkach leukocytów, stosując ilościową reakcję łańcuchową polimerazy (qPCR). W drugim etapie badacz przeprowadzi sortowanie komórek w celu wyizolowania komórek Th1, Th2, Th17 i Treg, a konkretnie wyekstrahuje mRNA 5-HT7. W ten sposób badacz może zająć się rolą receptora 5-HT7 w jednym lub większej liczbie określonych typów komórek w SM.
    3. Modulacja receptora 5-HT7 zgodnie z kontekstem immunologicznym Aby zrozumieć potencjalną rolę receptora 5-HT7 w moderowaniu odpowiedzi immunologicznej, badacz zidentyfikuje kontekst immunologiczny za pomocą testu ELISA dawkowania z próbek surowicy. Badacz będzie badał markery prozapalne, takie jak IL1b, IFNg, IL17 i markery przeciwzapalne, takie jak IL10 i IL4. Wyniki te zostaną skorelowane z poprzednimi wynikami dotyczącymi ekspresji/ilości receptora 5-HT7 dla każdej grupy pacjentów.
    4. Rola receptora 5-HT7 na funkcje limfocytów in vitro Z próbek krwi trzech wyżej wymienionych grup badacz wyizoluje komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) in vitro, aby ocenić rolę receptora 5-HT7 w ich funkcji wytwarzania i uwalniania cytokin . Badacz będzie stymulował PBMC jednym lub więcej ligandami 5-HT7 i przeprowadzi dawkowanie ELISA z supernatantu z markerami prozapalnymi, takimi jak IL1b, IFNg, IL17 i markerami przeciwzapalnymi, takimi jak IL10 i IL4. Zostanie przeprowadzone immunoznakowanie komórek w celu uwidocznienia receptora 5-HT7 na powierzchni komórki.
    5. Identyfikacja izoform receptora 5-HT7 Istnieją trzy formy receptora 5-HT7 (5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d). Jednak nie opisano jeszcze żadnej różnicy pod względem ich funkcji farmakologicznej. Badacz proponuje zidentyfikować te różne izoformy za pomocą qPCR. Jak opisano wcześniej, w pierwszym etapie na krążących komórkach leukocytów iw drugim etapie po sortowaniu komórek w celu wyizolowania komórek Th1, Th2, Th17 i Treg.

Typ studiów

Obserwacyjny

Zapisy (Rzeczywisty)

78

Kontakty i lokalizacje

Ta sekcja zawiera dane kontaktowe osób prowadzących badanie oraz informacje o tym, gdzie badanie jest przeprowadzane.

Lokalizacje studiów

  • Francja
      • Orléans, Francja, 45067
        • CHR Orléans

Kryteria uczestnictwa

Badacze szukają osób, które pasują do określonego opisu, zwanego kryteriami kwalifikacyjnymi. Niektóre przykłady tych kryteriów to ogólny stan zdrowia danej osoby lub wcześniejsze leczenie.

Kryteria kwalifikacji

Wiek uprawniający do nauki

18 lat do 50 lat (DOROSŁY)

Akceptuje zdrowych ochotników

Tak

Płeć kwalifikująca się do nauki

Wszystko

Metoda próbkowania

Próbka bez prawdopodobieństwa

Badana populacja

Mężczyzna i kobieta w wieku od 18 do 50 lat

Opis

Kryteria przyjęcia:

  • Mężczyzna i kobieta
  • od 18 do 50 lat
  • Stwardnienie rozsiane zdiagnozowane według kryteriów Mc Donalda (Thompson et al. 2018)
  • Z ostrym nawrotem (grupa 1)
  • Stabilny z leczeniem Natalizumabem (grupa 2), minimum 6 kuracji Natalizumabem
  • Zdrowi ochotnicy (grupa 3)

Kryteria wyłączenia:

  • bez zabezpieczenia społecznego
  • Serologia HIV-pozytywna
  • stan zakaźny w ciągu ostatniego miesiąca
  • leczenie kortykosteroidami w ciągu ostatniego miesiąca
  • demencja
  • kobieta w ciąży lub karmiąca piersią
  • poprzedni udział w badaniu
  • pod ochroną sądową
  • niewspółpracujący pacjent

Plan studiów

Ta sekcja zawiera szczegółowe informacje na temat planu badania, w tym sposób zaprojektowania badania i jego pomiary.

Jak projektuje się badanie?

Szczegóły projektu

Kohorty i interwencje

Grupa / Kohorta
Interwencja / Leczenie
Zdrowi ludzie
Inny: pobieranie próbek krwi
Analiza modulacji ekspresji receptora 5-HT7 w korelacji z kontekstem immunologicznym, w 3 różnych grupach: 2 pacjentów ze stwardnieniem rozsianym, jedna grupa zdrowych ochotników
Pacjenci ze stwardnieniem rozsianym z ostrym nawrotem
Stwardnienie rozsiane rozpoznane według kryteriów Mc Donalda z ostrym nawrotem
Inny: pobieranie próbek krwi
Analiza modulacji ekspresji receptora 5-HT7 w korelacji z kontekstem immunologicznym, w 3 różnych grupach: 2 pacjentów ze stwardnieniem rozsianym, jedna grupa zdrowych ochotników
Pacjenci ze stwardnieniem rozsianym leczeni natalizumabem
Pacjenci ze stwardnieniem rozsianym zdiagnozowanym zgodnie z kryteriami Mc Donalda i leczeni natalizumabem od 6 wyleczeń
Inny: pobieranie próbek krwi
Analiza modulacji ekspresji receptora 5-HT7 w korelacji z kontekstem immunologicznym, w 3 różnych grupach: 2 pacjentów ze stwardnieniem rozsianym, jedna grupa zdrowych ochotników

Co mierzy badanie?

Podstawowe miary wyniku

Miara wyniku
Opis środka
Ramy czasowe
Ekspresja receptora serotoniny 5HT7 na krążących komórkach leukocytów
Ramy czasowe: Linia bazowa
Aby przeanalizować ekspresję 5-HT7 na krążących komórkach leukocytów, wykonamy badania cytometrii przepływowej z pełnej krwi trzech wymienionych powyżej grup. W pierwszym etapie przeanalizujemy ogólny wskaźnik krążących komórek dodatnich pod względem 5-HT7 za pomocą przeciwciała przeciwko receptorowi 5-HT7, którego specyficzność została potwierdzona w naszym zespole badawczym. W drugim etapie określimy, który typ komórek spośród limfocytów biorących udział w patologii SM wykazuje ekspresję receptora 5-HT7. Użyjemy przeciwciał przeciwko każdej populacji: komórka Thelper 1, komórka Thelper 2, komórka Thelper 17 i Treg. Wykonamy również barwienie immunologiczne na Cytospinie (cienka warstwa komórek krwi na szkiełkach nakrywkowych) w celu wizualizacji wspólnego znakowania i potwierdzenia wyników cytometrii przepływowej.
Linia bazowa
Ilość mRNA receptora serotoniny 5-HT7
Ramy czasowe: Linia bazowa
Dla trzech grup określimy ilość mRNA 5-HT7 na krążących komórkach leukocytów. W pierwszym kroku sprawdzimy korelację między szybkością ekspresji receptora 5-HT7 a ilością mRNA na krążących komórkach leukocytów, stosując ilościową reakcję łańcuchową polimerazy (qPCR). W drugim etapie przeprowadzimy sortowanie komórek w celu wyizolowania komórki Thelper 1, komórki Thelper 2, komórki Thelper 17 i komórek Treg, a konkretnie wyekstrahujemy mRNA 5-HT7.
Linia bazowa
Kontekst immunologiczny na próbkach krwi
Ramy czasowe: Linia bazowa
Zidentyfikujemy kontekst immunologiczny przez dawkowanie ELISA z próbek surowicy. Będziemy badać markery prozapalne, takie jak interleukina 1b, IFNg, IL17 i markery przeciwzapalne, takie jak interleukina 10 i interluekina 4.
Linia bazowa
Rola receptora 5-HT7 na funkcje limfocytów in vitro
Ramy czasowe: Linia bazowa
Z próbek krwi trzech wspomnianych powyżej grup wyizolujemy komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) in vitro, aby ocenić rolę receptora 5-HT7 w ich funkcji wytwarzania i uwalniania cytokin. Będziemy stymulować PBMC jednym lub więcej ligandami 5-HT7 i wykonamy dawkowanie ELISA z supernatantu z markerami prozapalnymi, takimi jak IL1b, IFNg, IL17 i markerami przeciwzapalnymi, takimi jak IL10 i IL4. Zostanie przeprowadzone immunoznakowanie komórek w celu uwidocznienia receptora 5-HT7 na powierzchni komórki.
Linia bazowa
Izoformy receptora 5-HT7 Izoformy receptora 5-HT7
Ramy czasowe: Linia bazowa
Istnieją trzy formy receptora 5-HT7 (5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d). Proponujemy zidentyfikować te różne izoformy za pomocą qPCR. Jak opisano wcześniej, w pierwszym etapie na krążących komórkach leukocytów iw drugim etapie po sortowaniu komórek w celu wyizolowania komórek Th1, Th2, Th17 i Treg.
Linia bazowa

Współpracownicy i badacze

Tutaj znajdziesz osoby i organizacje zaangażowane w to badanie.

Sponsor

Centre Hospitalier Régional d'Orléans

Współpracownicy

National Scientific Research Centre

Śledczy

  • Główny śledczy: Maud PALLIX, MD, CHR Orléans

Publikacje i pomocne linki

Osoba odpowiedzialna za wprowadzenie informacji o badaniu dobrowolnie udostępnia te publikacje. Mogą one dotyczyć wszystkiego, co jest związane z badaniem.

Publikacje ogólne

Daty zapisu na studia

Daty te śledzą postęp w przesyłaniu rekordów badań i podsumowań wyników do ClinicalTrials.gov. Zapisy badań i zgłoszone wyniki są przeglądane przez National Library of Medicine (NLM), aby upewnić się, że spełniają określone standardy kontroli jakości, zanim zostaną opublikowane na publicznej stronie internetowej.

Główne daty studiów

Rozpoczęcie studiów (RZECZYWISTY)

7 września 2020

Zakończenie podstawowe (RZECZYWISTY)

19 lipca 2021

Ukończenie studiów (RZECZYWISTY)

19 lipca 2021

Daty rejestracji na studia

Pierwszy przesłany

31 sierpnia 2020

Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości

11 września 2020

Pierwszy wysłany (RZECZYWISTY)

14 września 2020

Aktualizacje rekordów badań

Ostatnia wysłana aktualizacja (RZECZYWISTY)

17 lutego 2022

Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości

16 lutego 2022

Ostatnia weryfikacja

1 lutego 2022

Więcej informacji

Terminy związane z tym badaniem

Słowa kluczowe

Dodatkowe istotne warunki MeSH

Inne numery identyfikacyjne badania

  • CHRO-2020-01

Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)

Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?

NIE

Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze

Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA

Nie

Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA

Nie

Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .

Subskrybuj