5-HT7-receptorimplikation i inflammatoriske mekanismer ved multipel sklerose (5-HTSEP)

Ekspressionsmodulationen af ​​5-HT7-receptoren vil blive undersøgt i sammenhæng med den immunologiske kontekst i forskellige grupper af MS-patienter:

• Gruppe 1: MS-patienter med akut tilbagefald
• Gruppe 2: MS stabile patienter behandlet med Natalizumab

• Gruppe 3: Sunde mennesker (fra Etablissement Français du Sang)

  1. 5-HT7-receptorekspressionsevaluering på cirkulerende leukocytceller. Hver gruppe præsenterer en anden inflammatorisk kontekst. Forskeren ønsker at bestemme den immunologiske konteksts indflydelse på 5-HT7-receptorekspressionen, og hvilke celler der udtrykker det. For at analysere 5-HT7-ekspressionen på cirkulerende leukocytceller, vil undersøgeren udføre flowcytometriundersøgelser fra fuldblodet fra de tre grupper nævnt ovenfor. I et første trin vil efterforskeren analysere den samlede hastighed af 5-HT7 cirkulerende positive celler ved brug af et antistof mod 5-HT7 receptor, hvis specificitet blev valideret i vores forskerhold. I et andet trin vil efterforskeren præcisere, hvilken celletype blandt de lymfocytter, der er impliceret i MS-patologien, udtrykker 5-HT7-receptoren. Efterforskeren vil bruge antistoffer mod hver population t-hjælpercelle: Th1, Th2, Th17 og Treg. Efterforskeren vil også udføre immunfarvning på Cytospin (tyndt lag af blodceller på dækglas) for at visualisere co-mærkning og bekræfte resultaterne af flowcytometri.
  2. Korrelation mellem 5-HT7-receptorekspression og mRNA-mængde. Derudover er der vist en sammenhæng mellem en stigning i 5-HT7-positive celler og en opreguleret mRNA-mængde. For de tre grupper vil efterforskeren bestemme 5-HT7-mRNA-mængden på cirkulerende leukocytceller. I et første trin vil efterforskeren kontrollere korrelationen mellem 5-HT7-receptorekspressionshastigheden og mRNA-mængden på cirkulerende leukocytceller ved hjælp af kvantitativ polymerasekædereaktion (qPCR). I et andet trin vil efterforskeren udføre cellesortering for at isolere Th1-, Th2-, Th17- og Treg-celler og specifikt ekstrahere 5-HT7-mRNA. På denne måde kan efterforskeren adressere 5-HT7-receptorrollen på en eller flere specifikke celletyper på MS.
  3. 5-HT7-receptormodulering i henhold til den immunologiske kontekst For at forstå 5-HT7-receptorens potentielle rolle på immunresponsmoderering, vil investigator identificere immunkonteksten ved hjælp af ELISA-dosering fra serumprøver. Undersøgeren vil undersøge pro-inflammatoriske markører som IL1b, IFNg, IL17 og antiinflammatoriske markører som IL10 og IL4. Disse resultater vil blive korreleret med de tidligere resultater vedrørende 5-HT7-receptorekspression/mængde for hver patientgruppe.
  4. 5-HT7-receptorens rolle på lymfocytfunktioner in vitro Fra blodprøver fra de tre ovenfor nævnte grupper vil efterforskeren isolere mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) in vitro for at evaluere 5-HT7-receptorens rolle på deres funktion til at producere og frigive cytokiner . Undersøgeren vil stimulere PBMC med en eller flere 5-HT7-ligander og vil udføre ELISA-dosering fra supernatant med pro-inflammatoriske markører som IL1b, IFNg, IL17 og anti-inflammatoriske markører som IL10 og IL4. Celleimmunmærkningen vil blive udført for at visualisere 5-HT7-receptoren på celleoverfladen.
  5. Identifikation af 5-HT7-receptorisoformer Der er tre former for 5-HT7-receptorer (5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d). Der er dog endnu ikke beskrevet nogen forskel for deres farmakologiske funktion. Efterforskeren foreslår at identificere disse forskellige isoformer ved qPCR. Som tidligere beskrevet i et første trin på cirkulerende leukocytceller og i et andet trin efter cellesortering for at isolere Th1-, Th2-, Th17- og Treg-celler.