5-HT7-Rezeptor-Beteiligung an Entzündungsmechanismen bei Multipler Sklerose (5-HTSEP)

Die Expressionsmodulation des 5-HT7-Rezeptors wird in Korrelation mit dem immunologischen Kontext bei verschiedenen Gruppen von MS-Patienten untersucht:

• Gruppe 1: MS-Patienten mit akutem Schub
• Gruppe 2: Patienten mit stabiler MS, die mit Natalizumab behandelt wurden

• Gruppe 3: Gesunde Menschen (von Etablissement Français du Sang)

  1. Auswertung der 5-HT7-Rezeptorexpression an zirkulierenden Leukozytenzellen Jede Gruppe weist einen anderen Entzündungskontext auf. Der Forscher möchte den immunologischen Kontexteinfluss auf die 5-HT7-Rezeptorexpression bestimmen und welche Zellen ihn exprimieren. Um die 5-HT7-Expression auf zirkulierenden Leukozytenzellen zu analysieren, führt der Prüfarzt durchflusszytometrische Studien mit dem Vollblut der drei oben genannten Gruppen durch. In einem ersten Schritt wird der Forscher die Gesamtrate der zirkulierenden 5-HT7-positiven Zellen durch die Verwendung eines Antikörpers gegen den 5-HT7-Rezeptor analysieren, dessen Spezifität in unserem Forschungsteam validiert wurde. In einem zweiten Schritt wird der Forscher präzisieren, welcher Zelltyp unter den an der MS-Pathologie beteiligten Lymphozyten den 5-HT7-Rezeptor exprimiert. Der Forscher verwendet Antikörper gegen jede Population von T-Helferzellen: Th1, Th2, Th17 und Treg. Der Prüfarzt führt auch eine Immunfärbung auf Cytospin (dünne Schicht aus Blutzellen auf Deckgläsern) durch, um die Co-Markierung zu visualisieren und die Ergebnisse der Durchflusszytometrie zu bestätigen.
  2. Korrelation zwischen 5-HT7-Rezeptorexpression und mRNA-Menge Außerdem wurde eine Korrelation zwischen einer Zunahme von 5-HT7-positiven Zellen und einer hochregulierten mRNA-Menge gezeigt. Für die drei Gruppen wird der Forscher die 5-HT7-mRNA-Menge auf zirkulierenden Leukozytenzellen bestimmen. In einem ersten Schritt überprüft der Prüfarzt die Korrelation zwischen der 5-HT7-Rezeptor-Expressionsrate und der mRNA-Menge auf zirkulierenden Leukozytenzellen mittels quantitativer Polymerase-Kettenreaktion (qPCR). In einem zweiten Schritt führt der Forscher eine Zellsortierung durch, um Th1-, Th2-, Th17- und Treg-Zellen zu isolieren und spezifisch 5-HT7-mRNA zu extrahieren. Auf diese Weise kann der Forscher die Rolle des 5-HT7-Rezeptors bei einem oder mehreren spezifischen Zelltypen bei der MS untersuchen.
  3. Modulation des 5-HT7-Rezeptors gemäß dem immunologischen Kontext Um die potenzielle Rolle des 5-HT7-Rezeptors bei der Mäßigung der Immunantwort zu verstehen, identifiziert der Prüfarzt den Immunkontext anhand der ELISA-Dosierung aus Serumproben. Der Prüfarzt untersucht entzündungsfördernde Marker wie IL1b, IFNg, IL17 und entzündungshemmende Marker wie IL10 und IL4. Diese Ergebnisse werden mit den vorherigen Ergebnissen bezüglich der 5-HT7-Rezeptorexpression/-menge für jede Patientengruppe korreliert.
  4. Rolle des 5-HT7-Rezeptors bei Lymphozytenfunktionen in vitro Aus Blutproben der drei oben genannten Gruppen isoliert der Prüfarzt periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) in vitro, um die Rolle des 5-HT7-Rezeptors bei ihrer Funktion zur Produktion und Freisetzung von Zytokinen zu bewerten . Der Prüfarzt stimuliert PBMC mit einem oder mehreren 5-HT7-Liganden und führt eine ELISA-Dosierung aus dem Überstand mit entzündungsfördernden Markern wie IL1b, IFNg, IL17 und entzündungshemmenden Markern wie IL10 und IL4 durch. Die Zellimmunmarkierung wird durchgeführt, um den 5-HT7-Rezeptor auf der Zelloberfläche sichtbar zu machen.
  5. Identifizierung von 5-HT7-Rezeptor-Isoformen Es gibt drei Formen von 5-HT7-Rezeptoren (5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d). Für ihre pharmakologische Funktion wurde jedoch noch kein Unterschied beschrieben. Der Forscher schlägt vor, diese verschiedenen Isoformen durch qPCR zu identifizieren. Wie zuvor beschrieben, in einem ersten Schritt auf zirkulierenden Leukozytenzellen und in einem zweiten Schritt nach Zellsortierung, um Th1-, Th2-, Th17- und Treg-Zellen zu isolieren.