5-HT7-reseptorin vaikutus multippeliskleroosin tulehdusmekanismeihin (5-HTSEP)
keskiviikko 16. helmikuuta 2022 päivittänyt: Centre Hospitalier Régional d'Orléans
5-HTSEP: Serotoniinin 5-HT7-reseptorin vaikutus multippeliskleroosin tulehdusmekanismeihin
Multippeliskleroosi on krooninen autoimmuunisairaus, johon liittyy keskushermostolle haitallinen tulehdusreaktio. Immunologinen epätasapaino liittyy Th1- ja Th17-soluihin korrelaatiossa säätelymekanismien, kuten Treg-solujen, häiriön kanssa. Vuosien tutkimuksesta huolimatta asiaan liittyvät mekanismit ovat edelleen epäselviä.
Serotoniini (5-HT) näyttää olevan terapeuttinen kohde multippeliskleroosin hoidossa. Itse asiassa useat tutkimukset ovat osoittaneet tämän välittäjäaineen anti-inflammatorisen potentiaalin ja myös sen haavoittuvuuden tulehduksellisessa yhteydessä. Lisäksi äskettäinen tutkimus on osoittanut, että 5-HT voi vähentää CD4 T-solujen proliferaatiota ja proinflammatorisia sytokiineja, jotka vapautuvat in vitro.
5-HT-suojavaikutuksia on osoitettu myös kokeellisessa autoimmuuni-enkefalomyeliittihiirimallissa (EAE), jossa on tulehdusvasteen väheneminen ja myös selkäydinvaurioiden vähentyminen.
Viimeisin löydetty reseptori, 5-HT7-reseptori, on tunnistettu lupaavaksi kohteeksi tulehdukselliseen kontekstiin liittyvien neurologisten häiriöiden hoidossa. Tämä ihmisissä ja hiirissä esiintyvä reseptori leviää useiden solujen, kuten T-lymfosyyttien, makrofagien, dendriittisolujen ja myös hermosolujen, astrosyyttien ja mikroglian pinnalle.
Ottaen huomioon positiivisten solujen tärkeyden 5-HT7-reseptorille multippeliskleroosissa havaitussa tulehduksellisessa yhteydessä, tutkija ehdottaa reseptorin ilmentymisen tutkimista multippeliskleroosipotilaiden verinäytteissä.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Valmis
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
5-HT7-reseptorin ilmentymisen modulaatiota tutkitaan korrelaatiossa immunologisen kontekstin kanssa eri MS-potilaiden ryhmissä:
- Ryhmä 1: MS-potilaat, joilla on akuutti relapsi
- Ryhmä 2: MS-potilaat, jotka ovat vakaat natalitsumabilla
Ryhmä 3: Terveet ihmiset (Etablissement Français du Sangista)
- 5-HT7-reseptorin ilmentymisen arviointi kiertävissä leukosyyttisoluissa Jokaisella ryhmällä on erilainen tulehduskonteksti. Tutkija haluaa määrittää immunologisen kontekstin vaikutuksen 5-HT7-reseptorin ilmentymiseen ja mitkä solut ekspressoivat sitä. 5-HT7:n ilmentymisen analysoimiseksi kiertävissä leukosyyttisoluissa tutkija suorittaa virtaussytometriatutkimuksia kolmen edellä mainitun ryhmän kokoverestä. Ensimmäisessä vaiheessa tutkija analysoi kiertävien positiivisten 5-HT7-solujen kokonaismäärän käyttämällä vasta-ainetta 5-HT7-reseptoria vastaan, jonka spesifisyys on validoitu tutkimusryhmässämme. Toisessa vaiheessa tutkija täsmentää, mikä solutyyppi MS-patologiaan liittyvien lymfosyyttien joukossa ekspressoi 5-HT7-reseptoria. Tutkija käyttää vasta-aineita jokaista populaation t-auttajasolua vastaan: Th1, Th2, Th17 ja Treg. Tutkija suorittaa myös immunovärjäyksen Cytospinille (ohut kerros verisoluja kansilaseilla) visualisoidakseen yhteisleimauksen ja vahvistaakseen virtaussytometrian tulokset.
- 5-HT7-reseptorin ilmentymisen ja mRNA-määrän välinen korrelaatio Lisäksi on osoitettu korrelaatio 5-HT7-positiivisten solujen lisääntymisen ja säädellyn mRNA:n määrän välillä. Kolmen ryhmän osalta tutkija määrittää 5-HT7-mRNA-määrän kiertävissä leukosyyttisoluissa. Ensimmäisessä vaiheessa tutkija tarkistaa korrelaation 5-HT7-reseptorin ilmentymisnopeuden ja kiertävien leukosyyttisolujen mRNA-määrän välillä käyttämällä kvantitatiivista polymeraasiketjureaktiota (qPCR). Toisessa vaiheessa tutkija suorittaa solulajittelun Th1-, Th2-, Th17- ja Treg-solujen eristämiseksi ja spesifisen 5-HT7-mRNA:n erottamiseksi. Tällä tavalla tutkija voi käsitellä 5-HT7-reseptorin roolia yhdessä tai useammassa spesifisessä MS-solutyypissä.
- 5-HT7-reseptorin modulaatio immunologisen kontekstin mukaan Ymmärtääkseen 5-HT7-reseptorin mahdollisen roolin immuunivasteen hillitsemisessä tutkija tunnistaa immuunikontekstin ELISA-annoksella seeruminäytteistä. Tutkija tutkii tulehdusta edistäviä markkereita, kuten IL1b, IFNg, IL17 ja anti-inflammatorisia markkereita, kuten IL10 ja IL4. Nämä tulokset korreloidaan aikaisempien tulosten kanssa, jotka koskevat 5-HT7-reseptorin ilmentymistä/määrää kussakin potilasryhmässä.
- 5-HT7-reseptorin rooli lymfosyyttien toiminnassa in vitro Tutkija eristää kolmen edellä mainitun ryhmän verinäytteistä perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) in vitro arvioidakseen 5-HT7-reseptorin roolia niiden toiminnassa sytokiinien tuottamisessa ja vapauttamisessa. . Tutkija stimuloi PBMC:tä yhdellä tai useammalla 5-HT7-ligandilla ja suorittaa ELISA-annoksen supernatantista tulehdusta edistävillä markkereilla, kuten IL1b:llä, IFNg:llä, IL17:llä ja anti-inflammatorisilla markkereilla, kuten IL10 ja IL4. Solujen immunoleimaus suoritetaan 5-HT7-reseptorin visualisoimiseksi solun pinnalla.
- 5-HT7-reseptorin isoformien tunnistaminen 5-HT7-reseptoreita on kolme muotoa (5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d). Niiden farmakologisen toiminnan eroa ei kuitenkaan ole vielä kuvattu. Tutkija ehdottaa näiden eri isomuotojen tunnistamista qPCR:llä. Kuten aiemmin on kuvattu, ensimmäisessä vaiheessa kiertävillä leukosyyttisoluilla ja toisessa vaiheessa solulajittelun jälkeen Th1-, Th2-, Th17- ja Treg-solujen eristämiseksi.
Opintotyyppi
Havainnollistava
Ilmoittautuminen (Todellinen)
78
Yhteystiedot ja paikat
Tässä osiossa on tutkimuksen suorittajien yhteystiedot ja tiedot siitä, missä tämä tutkimus suoritetaan.
Opiskelupaikat
-
-
-
Orléans, Ranska, 45067
- CHR Orléans
-
-
Osallistumiskriteerit
Tutkijat etsivät ihmisiä, jotka sopivat tiettyyn kuvaukseen, jota kutsutaan kelpoisuuskriteereiksi. Joitakin esimerkkejä näistä kriteereistä ovat henkilön yleinen terveydentila tai aiemmat hoidot.
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
18 vuotta - 50 vuotta (AIKUINEN)
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Joo
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Kaikki
Näytteenottomenetelmä
Ei-todennäköisyysnäyte
Tutkimusväestö
Mies ja nainen 18-50 vuotta
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Mies ja nainen
- 18-50 vuotta vanha
- Multippeliskleroosi diagnosoitu Mc Donaldin kriteerien mukaan (Thompson ym. 2018)
- Akuutti relapsi (ryhmä 1)
- Stabiili natalitsumabihoidolla (ryhmä 2), vähintään 6 natalitsumabihoitoa
- Terveet vapaaehtoiset (ryhmä 3)
Poissulkemiskriteerit:
- ilman sosiaaliturvaa
- HIV-positiivinen serologia
- tartuntatila viimeisen kuukauden aikana
- kortikosteroidihoitoa viimeisen kuukauden aikana
- dementia
- raskaana oleva tai imettävä nainen
- aiempaa osallistumista tutkimukseen
- oikeussuojan alla
- yhteistyökyvytön potilas
Opintosuunnitelma
Tässä osiossa on tietoja tutkimussuunnitelmasta, mukaan lukien kuinka tutkimus on suunniteltu ja mitä tutkimuksella mitataan.
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Terveet ihmiset
|
Analyysi 5-HT7-reseptorin ilmentymisen modulaatiosta korrelaatiossa immunologisen kontekstin kanssa, 3 eri ryhmässä: 2 multippeliskleroosipotilailla, yksi terveiden vapaaehtoisten ryhmä
|
|
Multippeliskleroosipotilaat, joilla on akuutti uusiutuminen
Mc Donaldin kriteerien mukaan diagnosoitu MS-tauti, jossa on akuutti relapsi
|
Analyysi 5-HT7-reseptorin ilmentymisen modulaatiosta korrelaatiossa immunologisen kontekstin kanssa, 3 eri ryhmässä: 2 multippeliskleroosipotilailla, yksi terveiden vapaaehtoisten ryhmä
|
|
Natalitsumabilla hoidetut multippeliskleroosipotilaat
Multippeliskleroosipotilaat, jotka on diagnosoitu Mc Donaldin kriteerien mukaan ja joita on hoidettu natalitsumabilla kuuden parantumisen jälkeen
|
Analyysi 5-HT7-reseptorin ilmentymisen modulaatiosta korrelaatiossa immunologisen kontekstin kanssa, 3 eri ryhmässä: 2 multippeliskleroosipotilailla, yksi terveiden vapaaehtoisten ryhmä
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
5HT7-serotoniinireseptorin ilmentyminen kiertävissä leukosyyttisoluissa
Aikaikkuna: Perustaso
|
Analysoidaksemme 5-HT7:n ilmentymistä kiertävissä leukosyyttisoluissa suoritamme virtaussytometriatutkimuksia kolmen edellä mainitun ryhmän kokoverestä.
Ensimmäisessä vaiheessa analysoimme kiertävien positiivisten 5-HT7-solujen yleistä määrää käyttämällä 5-HT7-reseptoria vastaan suunnattua vasta-ainetta, jonka spesifisyys on validoitu tutkimusryhmässämme.
Toisessa vaiheessa tarkennamme, mikä solutyyppi MS-patologiaan liittyvien lymfosyyttien joukossa ekspressoi 5-HT7-reseptoria.
Käytämme vasta-aineita jokaista populaatiota vastaan: Thelper 1 -solu, Thelper 2 -solu, Thelper 17 -solu ja Treg.
Suoritamme myös immunovärjäyksen Cytospinille (ohut kerros verisoluja kansilasien päällä) yhteisleimauksen visualisoimiseksi ja virtaussytometrian tulosten vahvistamiseksi.
|
Perustaso
|
|
5-HT7-serotoniinireseptorin mRNA-määrä
Aikaikkuna: Perustaso
|
Kolmelle ryhmälle määritämme 5-HT7-mRNA:n määrän kiertävissä leukosyyttisoluissa.
Ensimmäisessä vaiheessa tarkistamme 5-HT7-reseptorin ilmentymisnopeuden ja kiertävien leukosyyttisolujen mRNA-määrän välisen korrelaation käyttämällä kvantitatiivista polymeraasiketjureaktiota (qPCR).
Toisessa vaiheessa suoritamme solulajittelun eristääksemme Thelper 1 -solut, Thelper 2 -solut, Thelper 17 -solut ja Treg-solut ja eristämme 5-HT7-mRNA:ta.
|
Perustaso
|
|
Immunologinen konteksti verinäytteissä
Aikaikkuna: Perustaso
|
Tunnistamme immuunikontekstin ELISA-annoksella seeruminäytteistä.
Tutkimme tulehdusta edistäviä markkereita, kuten Interleukiini 1b, IFNg, IL17 ja anti-inflammatorisia markkereita, kuten Interleukiini 10 ja Interluekiini 4.
|
Perustaso
|
|
5-HT7-reseptorin rooli lymfosyyttien toiminnassa in vitro
Aikaikkuna: Perustaso
|
Eristämme kolmen edellä mainitun ryhmän verinäytteistä perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) in vitro arvioidaksemme 5-HT7-reseptorin roolia niiden toiminnassa sytokiinien tuottamisessa ja vapauttamisessa.
Stimuloimme PBMC:tä yhdellä tai useammalla 5-HT7-ligandilla ja suoritamme ELISA-annostuksen supernatantista proinflammatorisilla markkereilla, kuten IL1b, IFNg, IL17 ja anti-inflammatorisilla markkereilla, kuten IL10 ja IL4.
Solujen immunoleimaus suoritetaan 5-HT7-reseptorin visualisoimiseksi solun pinnalla.
|
Perustaso
|
|
5-HT7-reseptorin isomuodot 5-HT7-reseptorin isomuodot
Aikaikkuna: Perustaso
|
5-HT7-reseptoreita on kolmea muotoa (5-HT7a, 5-HT7b, 5-HT7d).
Ehdotamme näiden eri isomuotojen tunnistamista qPCR:llä.
Kuten aiemmin on kuvattu, ensimmäisessä vaiheessa kiertävillä leukosyyttisoluilla ja toisessa vaiheessa solulajittelun jälkeen Th1-, Th2-, Th17- ja Treg-solujen eristämiseksi.
|
Perustaso
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Täältä löydät tähän tutkimukseen osallistuvat ihmiset ja organisaatiot.
Yhteistyökumppanit
Tutkijat
- Päätutkija: Maud PALLIX, MD, CHR Orléans
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Tutkimusta koskevien tietojen syöttämisestä vastaava henkilö toimittaa nämä julkaisut vapaaehtoisesti. Nämä voivat koskea mitä tahansa tutkimukseen liittyvää.
Yleiset julkaisut
- Thompson AJ, Banwell BL, Barkhof F, Carroll WM, Coetzee T, Comi G, Correale J, Fazekas F, Filippi M, Freedman MS, Fujihara K, Galetta SL, Hartung HP, Kappos L, Lublin FD, Marrie RA, Miller AE, Miller DH, Montalban X, Mowry EM, Sorensen PS, Tintore M, Traboulsee AL, Trojano M, Uitdehaag BMJ, Vukusic S, Waubant E, Weinshenker BG, Reingold SC, Cohen JA. Diagnosis of multiple sclerosis: 2017 revisions of the McDonald criteria. Lancet Neurol. 2018 Feb;17(2):162-173. doi: 10.1016/S1474-4422(17)30470-2. Epub 2017 Dec 21.
- Sacramento PM, Monteiro C, Dias ASO, Kasahara TM, Ferreira TB, Hygino J, Wing AC, Andrade RM, Rueda F, Sales MC, Vasconcelos CC, Bento CAM. Serotonin decreases the production of Th1/Th17 cytokines and elevates the frequency of regulatory CD4+ T-cell subsets in multiple sclerosis patients. Eur J Immunol. 2018 Aug;48(8):1376-1388. doi: 10.1002/eji.201847525. Epub 2018 Jun 6.
- Yuan XQ, Qiu G, Liu XJ, Liu S, Wu Y, Wang X, Lu T. Fluoxetine promotes remission in acute experimental autoimmune encephalomyelitis in rats. Neuroimmunomodulation. 2012;19(4):201-8. doi: 10.1159/000334095. Epub 2012 Mar 21.
- Quintero-Villegas A, Valdes-Ferrer SI. Role of 5-HT7 receptors in the immune system in health and disease. Mol Med. 2019 Dec 31;26(1):2. doi: 10.1186/s10020-019-0126-x.
Opintojen ennätyspäivät
Nämä päivämäärät seuraavat ClinicalTrials.gov-sivustolle lähetettyjen tutkimustietueiden ja yhteenvetojen edistymistä. National Library of Medicine (NLM) tarkistaa tutkimustiedot ja raportoidut tulokset varmistaakseen, että ne täyttävät tietyt laadunvalvontastandardit, ennen kuin ne julkaistaan julkisella verkkosivustolla.
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (TODELLINEN)
Maanantai 7. syyskuuta 2020
Ensisijainen valmistuminen (TODELLINEN)
Maanantai 19. heinäkuuta 2021
Opintojen valmistuminen (TODELLINEN)
Maanantai 19. heinäkuuta 2021
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Maanantai 31. elokuuta 2020
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Perjantai 11. syyskuuta 2020
Ensimmäinen Lähetetty (TODELLINEN)
Maanantai 14. syyskuuta 2020
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (TODELLINEN)
Torstai 17. helmikuuta 2022
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Keskiviikko 16. helmikuuta 2022
Viimeksi vahvistettu
Tiistai 1. helmikuuta 2022
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- CHRO-2020-01
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
EI
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Ei
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Ei
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .