곤충 유래 단백질 보충제가 단백질 합성 및 mTORC1 활성화에 미치는 영향

이 연구의 목적은 근육 세포에서 mTORC1 경로 및 단백질 합성을 활성화하는 곤충 유래 단백질 보충제(IPC80 및 Whole Buffalo Powder, Ynsect®)의 능력을 결정하는 것입니다.

이 목표를 달성하기 위해 참가자는 IPC80, 전체 버팔로 분말 또는 유청 단백질의 보충 용량(0.25g/kg 체중)을 섭취합니다. 보충 전과 보충 후 15, 30, 60, 90분에 혈액 샘플을 채취합니다.

이 프로젝트는 곤충 유래 단백질 보충제(IPC80 및 Whole Buffalo Powder, Ynsect®)가 근육 세포에서 mTORC1 경로 및 단백질 합성의 활성화를 유도할 수 있는지 여부를 결정할 것으로 예상됩니다. 이 연구의 결과는 운동 후 근육 단백질 합성을 지원하기 위해 이 새로운 지속 가능한 단백질 공급원의 사용에 대한 더 깊은 통찰력을 제공할 것입니다.

18세에서 30세 사이의 남녀 참가자가 연구에 등록됩니다. 이 연구는 누가 어떤 치료(IPC80, Whole Buffalo Powder 또는 Whey)에 있는지 피험자나 연구자 모두 알지 못하는 무작위 이중 맹검 교차 디자인입니다.

I. 기준선 채혈 피험자는 하룻밤 금식 후 실험실에 도착합니다. 전주 정맥에 캐뉼러를 삽입하고 초기 5mL 기준선 혈액 샘플을 수집합니다.

II. 보충 기준선 채혈 후 피험자에게 250ml의 물에 용해된 유청 단백질, IPC80 또는 전체 버팔로 분말 0.25g/kg 체중의 보충제가 제공됩니다.

III. 식후 혈액 채취 보충제를 섭취한 후 참가자는 추가로 1.5시간 동안 실험실에 남아 시간을 보내기 위해 책이나 전자 장치를 가져올 수 있습니다. 보충 후 15, 30, 60, 90분에 각각 5mL의 혈액 샘플 4개를 추가로 채취하여 방문당 5mL씩 총 5회 채혈(방문당 25mL)하고 완료한 피험자당 총 75mL의 혈액을 채혈합니다. 전체 연구.

혈액은 5mL 혈청 분리 튜브에 수집됩니다. 모든 혈액 샘플은 10분 동안 1000 x g에서 원심분리하기 전에 1시간 동안 응고될 수 있으며 혈청은 냉동되어 처리될 때까지 -30°C에서 보관됩니다. 치료는 순서 효과를 피하기 위해 무작위화되며 이전 치료의 효과를 최소화하기 위해 시험 사이에 최소 48시간의 휴약 기간이 사용됩니다.

단백질 합성을 결정하기 위해 우리는 C2C12 근육 세포를 전체 단백질 합성을 측정하는 데 사용하는 플라스미드(pcDNA3 루시페라아제)로 안정적으로 형질감염시켰습니다. C2C12Luc 세포는 24웰 플레이트에 플레이팅되고 4일에 걸쳐 분화됩니다. 분화된 C2C12 세포는 PBS로 세척한 다음 이를 시험 배지(20% DMEM; 80% 행크 완충염 용액(HBSS))로 15분 동안 처리하여 절식시킬 것입니다. 절식한 근육 세포는 60분 동안 0, 2.5, 5 또는 10% 기준선 또는 공급된 혈청을 함유하는 시험 배지로 처리될 것입니다. 세포는 수동 용해 완충액에서 수집되고 반딧불이 루시퍼라제 활성은 이전에 설명된 대로 결정됩니다(Philp et al., 2013).

mTORC1을 활성화하는 단백질 공급원의 능력을 확인하기 위해 루시퍼라제 mRNA가 5' 말단 폴리피리미딘 트랙(TOP)을 포함하는 플라스미드(pcDNA3-TOP 루시퍼라제)로 C2C12 근육 세포를 안정적으로 형질감염시켰습니다. 5'TOP mRNA는 mTORC1 활성에 의해 특이적으로 조절됩니다(Jefferies et al., 1994). 위와 같이, 24웰 플레이트의 분화된 C2C12TOPLuc 근육 세포는 위에서 설명한 대로 기준선 또는 공급된 혈청을 사용하여 자극됩니다. mTORC1 활성화 정도는 기준선과 공급된 혈청 사이의 기울기 차이로 결정됩니다. 유장, IPC80 및 전체 버팔로 분말에 의한 mTORC1 및 단백질 합성의 유도는 개인 내에서 그리고 그룹 간에 직접 비교됩니다.