유관 세척에서 유방 세포의 핵 형태

연구가 수행되는 이유

유방 유두 흡인액(NAF)은 여성에게서 비침습적으로 얻을 수 있으며, 유방암 위험 연구와 관련된 이 액체의 분석을 만듭니다. NAF의 지질 산화 생성물(지방 손상의 일종)에 대한 개인 간 편차는 100배 이상이며 이러한 산화 생성물은 유방 상피 세포에 독성 영향을 미칠 가능성이 있습니다. 유방관 세척 중에 NAF를 먼저 흡인하고 유체를 생성하는 덕트를 세척하여 상피 세포를 얻습니다. 그런 다음 이러한 세포의 핵 특징(형태)을 검사할 수 있습니다. 핵 형태는 핵 특징의 미묘한 변화를 관찰하는 정량적 방법이며 양성 유방 생검에서 이러한 측정은 유방암 위험에 대한 예후 가치가 있는 것으로 나타났습니다.

이 탐색적 연구는 식이 개입 연구에서 종점으로 이러한 측정을 사용하는 타당성을 확립하는 데 도움이 될 것입니다. NAF에서 지질 산화 수준의 차이가 현저하게 크기 때문에 핵 형태에 약간의 영향이 있어야 한다고 믿는 것이 합리적입니다. 이러한 조치는 산화 스트레스 및 유방암 위험의 바이오마커에 대한 특정 유전적 다형성 및 환경 노출의 영향을 조사하려는 조사에도 적용 가능해야 합니다.

우리는 이전에 증식성 유방 질환 진단을 받은 여성을 연구할 것입니다. 이 여성들은 유방암 위험이 다소 증가하고, 치료를 위해 수술 외에는 거의 받지 않으며, 그러한 진단을 받지 않은 여성보다 유방에서 지질 산화 수준이 더 높은 것으로 나타났기 때문에 식이 예방 연구에 적합한 후보일 수 있습니다.

우리가 성취하고자 하는 것

우리는 양성 증식성 유방 질환을 가진 여성으로부터 NAF와 유방 상피 세포를 모두 얻고 분석하는 가능성을 결정하기를 희망합니다. 이 여성들은 유방암 위험이 증가하며, 유방관을 감싸는 NAF의 구성이 유방 상피 세포 핵의 형태학적 특징에 영향을 미칠 수 있습니다. 핵이 큰 여성(유방암의 위험 요소)에서 지질 산화 제품의 수치가 더 높으면 산화 스트레스와 암 위험을 줄이는 중재가 향후 계획될 수 있습니다.

목표는 다음과 같습니다.

1. 유방 NAF에서 지방, 손상되거나 산화된 지방, 산화되거나 손상된 비타민 및 비타민(8-이소프로스탄, 콜레스테롤, 지방산, 토코페롤, 카로티노이드 및 2,6-시클로리코펜-4,5-디올)의 수치를 정량화할 수 있는지 확인하기 위해 유방 세척 전에 얻은. NAF의 수치는 혈액의 수치와 비교됩니다. 이러한 조치는 개입 연구와 관련된 식이 섭취 및 산화 스트레스 수준과의 잠재적인 관계를 기반으로 선택되었습니다. 토코페롤과 카로티노이드는 식이 항산화제이며 특정 지방산은 다른 지방산보다 더 쉽게 산화됩니다. 8-isoprostane과 2,6-cyclolycopene-4,5-diol은 모두 산화 스트레스의 지표인 것으로 보입니다.
2. 증식성 유방 질환이 있는 여성에게서 유방 세척액을 얻고 유방 세척액에서 유방 상피 세포의 핵 형태를 특성화합니다. 우리는 핵 직경, 둘레, 면적, 진원도 및 핵:세포질 면적 비율을 포함하여 생검에서 일반적으로 사용되는 다양한 척도를 정량화할 것입니다. 이러한 조치는 유방암 위험과 관련이 있는 것으로 나타났습니다. 충분한 세포가 있는 경우 혜성 분석을 사용하여 산화적 DNA 손상 분석을 수행합니다.
3. 핵 형태가 NAF의 산화 스트레스 수준과 관련이 있는지 여부를 조사합니다. 상관 관계는 8-이소프로스탄, 콜레스테롤, 특정 지방산, 2,6-시클로리코펜-1,5-디올 및 지용성 미량 영양소 수준으로 평가됩니다. 핵 형태에 대한 이전 생검 진단의 식이, 인구통계학적 요인 및 특성의 잠재적 영향은 도관 세척에서 상피 세포의 핵 형태에서 여성들 사이의 차이를 더 잘 이해하기 위한 노력의 하위 목표로 조사될 것입니다.

연구 목적으로 수집된 자료는 다음과 같습니다.

동의서 건강 상태 설문지 음식 빈도 설문지 신장 및 체중 유방 유두 흡인액 유방 세척액 10ml 혈액 샘플 생검 날짜, 진단 및 의료 차트의 의료 문제 이력

표본의 크기

관심 변수가 25%의 변동 계수(CV) 내에서 90% 신뢰도로 결정될 수 있도록 본 연구를 준비하는 것이 바람직했습니다. 60명의 피험자는 90% 신뢰도에서 CV 25% 내에서 9개 연구 변수 중 8개 평균 수준의 추정치를 산출할 것입니다. 한 가지 예외는 매우 가변적인 8-isoprostane 측정이며, 평균 수준은 90% 신뢰도에서 37%의 CV 범위 내로 추정될 수 있습니다.

연구 수행 방법

총 75명의 여성이 임상의에 의해 대략 13개월(1년차 10개월 및 2년차 3개월) 동안 이 연구를 위해 모집될 것입니다. 그녀는 환자 차트에서 증식성 유방 질환의 이전 진단을 확인하고, 진단된 유방 질환의 유형, 가장 가까운 달까지 진단된 기간 및 세척 결과에 영향을 미칠 수 있는 유방 또는 건강 문제를 얻습니다. 연구 대상자는 설문지를 작성하고 체중과 신장을 측정하고 10ml 혈액 샘플을 기증하고 유방 세척 절차를 거칩니다. 세척 절차 중에 유방 유두액과 세척액이 수집됩니다.

유방관 세척은 유방암에 대한 여성의 위험을 결정하는 데 사용할 수 있는 중요한 새로운 절차입니다. 불편함이 거의 없기 때문에 매력적인 진단 방법입니다. 현재는 유방암 위험이 매우 높은 특정 여성에게만 사용됩니다. 도관 세척 절차 중에 액체를 생성하는 도관을 먼저 확인해야 합니다. 먼저 케라틴 플러그의 유두 표면에 있는 덕트를 비운 다음 여성이 마사지를 사용하여 체액을 생성합니다. NAF(젖꼭지 흡인액)라고 하는 이 액체는 유방관을 적시고 이 제안된 프로젝트에서 분석을 위해 수집됩니다. NAF를 생성하는 덕트가 식별되면 의사는 덕트를 세척합니다. 세척액은 유방 세포를 씻어내어 병리학자가 정상인지 여부를 평가할 수 있습니다. 전체 절차는 불편함을 최소화하기 위해 처음에 유두 표면과 세척액에 마취제를 사용하여 수행되며 불편함의 수준은 일반적으로 유방 X선 사진보다 적습니다.

유방암 위험의 초기 지표는 세척액의 상피 세포 특성일 수 있습니다. 이 유방 세포는 세척 시 제거되고 슬라이드에 배치되며 병리학자는 이상 여부를 검사합니다. 병리학적 진단 외에도 세포의 외관에 미묘한 변화가 있을 수 있습니다. 정량적 이미지 분석 소프트웨어가 있는 컴퓨터 구동 현미경을 사용하여 세포핵의 크기와 모양의 변화를 측정할 수 있습니다. 핵 면적, 직경 및 둘레의 증가 및 핵의 덜 균일한 진원도는 더 높은 등급의 유방암과 관련이 있는 것으로 알려져 있습니다. 이러한 종류의 조치는 정상 또는 과형성인 유방 생검에서도 측정되었으며, 완전 양성 유방 생검에서 더 큰 핵을 가진 여성은 1-33년 후에 유방암이 발병할 가능성이 더 컸습니다.

유방 세포의 핵 모양에 영향을 줄 수 있는 한 가지 요인은 유방의 산화 스트레스 수준입니다. 유방액은 지방 또는 지질이 매우 풍부하며 특정 종류의 지질은 쉽게 산화됩니다. NAF에는 지질 산화를 막는 항산화제 역할을 하는 과일과 채소에서 얻은 비타민도 포함되어 있습니다. 예를 들어, 카로티노이드는 유해한 산화제와 반응하여 산화된 카로티노이드를 형성할 수 있습니다. 따라서 우리는 산화 스트레스의 마커로서 NAF에서 하나의 지질 과산화 마커와 하나의 산화 카로티노이드의 수준을 측정할 것입니다. 또한 지방산 수준과 산화되지 않은 카로티노이드 수준을 측정합니다. 그런 다음 NAF 구성의 차이가 유방 세포의 핵 모양 측정과 관련이 있는지 확인합니다.

유방 NAF와 혈액은 분광 광도계 키트를 사용하여 콜레스테롤에 대해 분석됩니다. 지방산은 가스 크로마토그래피를 사용하여 분석됩니다. 총 8-isoprostanes는 면역 분석 키트로 분석됩니다. 미량 영양소와 비타민은 고압 액체 크로마토그래피로 분석됩니다. 핵 형태는 컴퓨터 구동 현미경으로 분석됩니다. 유방 세포의 DNA 손상은 용해된 세포의 겔 전기영동(comet assay)을 사용하여 분석됩니다. 통계 분석을 통해 NAF와 혈액 측정이 서로 관련되어 있고 핵 측정과 관련이 있는지 확인할 수 있습니다.