导管灌洗中乳腺细胞的核形态学

为什么要进行这项研究

乳房乳头抽吸液 (NAF) 可以非侵入性地从女性身上获得，使这种液体的分析与乳腺癌风险的研究相关。 NAF中脂质氧化产物（一种对脂肪的破坏）的个体差异超过100倍，这些氧化产物很可能对乳腺上皮细胞产生毒性作用。 在乳腺导管灌洗过程中，首先吸出 NAF，然后对产生液体的导管进行灌洗以获得上皮细胞。 然后可以检查这些细胞的核特征（形态）。 核形态学是一种观察核特征细微变化的定量方法，这些在良性乳腺活检中的测量已被证明对乳腺癌风险具有预后价值。

这项探索性研究将有助于确定将这些措施用作饮食干预研究终点的可行性。 由于 NAF 中脂质氧化水平的差异非常大，因此有理由相信一定对核形态有一些影响。 这些措施也应适用于旨在检查某些遗传多态性和环境暴露对氧化应激和乳腺癌风险生物标志物的影响的调查。

我们将研究之前被诊断患有增生性乳腺疾病的女性。 这些女性可能是饮食预防研究的良好候选者，因为她们患乳腺癌的风险有所增加，除了手术治疗外几乎没有接受治疗，而且研究表明，与没有此类诊断的女性相比，她们的乳房脂质氧化水平更高。

我们希望完成什么

我们希望确定从患有良性增殖性乳腺疾病的女性中获取和分析 NAF 和乳腺上皮细胞的可行性。 这些女性患乳腺癌的风险增加，而覆盖乳腺导管的 NAF 的成分可能会影响乳腺上皮细胞核的形态特征。 如果具有大细胞核（乳腺癌的危险因素）的女性的脂质氧化产物水平较高，那么未来可能会计划采取减少氧化应激和癌症风险的干预措施。

目标是：

1. 确定是否可以量化乳腺 NAF 中的脂肪、受损或氧化脂肪、氧化或受损维生素和维生素（8-异前列腺素、胆固醇、脂肪酸、生育酚、类胡萝卜素和 2,6-环番茄红素-4,5-二醇）的水平在乳房灌洗前获得。 NAF 中的水平将与血液中的水平进行比较。 这些措施是根据它们与饮食摄入量和氧化应激水平的潜在关系而选择的，这与干预研究有关。 生育酚和类胡萝卜素是膳食抗氧化剂，某些脂肪酸比其他脂肪酸更容易被氧化。 8-异前列烷和 2,6-环番茄红素-4,5-二醇似乎都是氧化应激的标志物。
2. 从患有增殖性乳腺疾病的女性中获取乳腺灌洗液，并表征乳腺灌洗液中乳腺上皮细胞的核形态。 我们将量化活检中常用的各种指标，包括核直径、周长、面积、圆度和核：细胞质面积比。 这些措施已被证明与乳腺癌风险有关。 如果有足够的细胞，将使用彗星试验对氧化 DNA 损伤进行分析。
3. 检查核形态是否与 NAF 中的氧化应激水平相关。 将评估与 8-异前列烷、胆固醇、特定脂肪酸、2,6-环番茄红素-1,5-二醇和脂溶性微量营养素水平的相关性。 饮食、人口统计因素和先前活检诊断的性质对核形态的潜在影响也将作为一个子目标进行检查，以努力更好地了解女性在导管灌洗的上皮细胞核形态方面的差异。

为研究目的收集的材料将是：

同意书 健康状况问卷 食物频率问卷 身高和体重 乳房乳头抽吸液 乳房灌洗液 10-ml 血样 活检日期、诊断和病历中的医疗问题史

样本大小

我们希望装备我们的研究，以便可以在 25% 的变异系数 (CV) 内以 90% 的置信度确定感兴趣的变量。 60 名受试者对 9 个研究变量中 8 个的平均水平的估计值在 25% 的 CV 范围内，置信度为 90%。 一个例外是高度可变的 8-异前列腺素测量值，其平均水平可以估计在 37% 的 CV 范围内，置信度为 90%。

研究将如何进行

临床医生将在大约 13 个月（第 1 年的 10 个月和第 2 年的 3 个月）内招募 75 名女性参加这项研究。 她将从患者病历中确认先前对增生性乳腺疾病的诊断，获得诊断出的乳腺疾病类型、诊断到最近一个月的时间以及可能影响灌洗结果的任何乳房或健康问题。 研究对象将填写问卷、称重和测量身高、捐献 10 毫升血液样本并进行乳房灌洗程序。 在灌洗过程中，将收集乳房乳头液和灌洗液。

乳腺导管灌洗是一项重要的新程序，可用于帮助确定女性患乳腺癌的风险。 这是一种有吸引力的诊断方法，因为它几乎不会带来不适。 目前，它仅用于某些被认为患乳腺癌风险极高的女性。 在导管灌洗过程中，必须首先确定产液导管。 这是通过首先释放角蛋白塞乳头表面的导管来完成的，然后女性使用按摩来产生液体。 这种液体称为乳头抽吸液 (NAF)，是浸润乳腺导管的液体，将被收集起来用于本拟议项目的分析。 一旦确定了产生 NAF 的导管，医生就会对该导管进行灌洗。 灌洗液洗出乳腺细胞，然后病理学家可以对其进行评估以确定它们是否正常。 整个过程最初是在乳头表面和灌洗液中使用麻醉剂来完成的，以尽量减少任何不适，并且不适的程度通常低于乳房 X 光检查。

乳腺癌风险的早期指标可能是来自灌洗液的上皮细胞的特征。 这些乳腺细胞在灌洗时被去除，它们被放置在载玻片上，病理学家检查它们是否有异常。 除了病理诊断，细胞的外观可能会有细微的变化。 可以使用具有定量图像分析软件的计算机驱动显微镜测量细胞核大小和形状的变化。 已知核面积、直径和周长的增加以及核圆度的不均匀与更高级别的乳腺癌有关。 在正常或增生的乳腺活检中也测量了这些类型的措施，那些在完全良性乳腺活检中具有较大细胞核的女性在 1-33 年后更有可能患上乳腺癌。

可能影响乳腺细胞核形状的一个因素是乳腺中的氧化应激水平。 乳腺液中含有非常丰富的脂肪或脂类，而某些种类的脂类很容易被氧化。 NAF 还含有从水果和蔬菜中提取的维生素，可作为抗氧化剂阻止脂质氧化。 例如，类胡萝卜素可以与有害氧化剂反应形成氧化类胡萝卜素。 因此，我们将测量 NAF 中一种脂质过氧化标记物和一种氧化类胡萝卜素的水平作为氧化应激的标记物。 我们还将测量脂肪酸水平和未氧化类胡萝卜素的水平。 然后我们将确定 NAF 组成的差异是否与乳腺细胞核形状的测量有关。

乳腺 NAF 和血液将使用分光光度试剂盒分析胆固醇。 脂肪酸将使用气相色谱法进行分析。 将通过免疫测定试剂盒分析总的 8-异前列烷。 微量营养素和维生素将通过高压液相色谱法进行分析。 核形态将通过计算机驱动的显微镜进行分析。 使用裂解细胞的凝胶电泳（彗星试验）分析乳腺细胞中的 DNA 损伤。 统计分析将使我们能够确定 NAF 和血液措施是否相互关联以及是否与核措施相关。