Kärnmorfologi av bröstceller i duktal lavage

VARFÖR STUDIEN GÖRS

Bröstnipplespiratvätskor (NAF) kan erhållas icke-invasivt från kvinnor, vilket gör analyser av denna vätska relevanta för studier av bröstcancerrisk. Den interindividuella variationen för lipidoxidationsprodukter (en typ av skada på fetter) i NAF är mer än 100-faldig, och dessa oxidationsprodukter kommer sannolikt att ha en toxisk effekt på bröstepitelcellerna. Under bröstkanalsköljning aspireras först NAF, och de kanaler som producerar vätska utsätts sedan för sköljning för att erhålla epitelceller. De nukleära egenskaperna (morfologin) hos dessa celler kan sedan undersökas. Kärnmorfologi är en kvantitativ metod för att observera subtila förändringar i nukleära egenskaper, och dessa mått i benigna bröstbiopsier har visat sig ha prognostiskt värde för bröstcancerrisk.

Denna explorativa studie kommer att hjälpa till att fastställa genomförbarheten av att använda dessa åtgärder som effektmått i kostinterventionsstudier. Eftersom skillnaderna i lipidoxidationsnivåer i NAF är markant stora är det rimligt att tro att det måste finnas viss påverkan på kärnmorfologin. Dessa åtgärder bör också vara tillämpliga på undersökningar som försöker undersöka effekten av vissa genetiska polymorfismer och miljöexponeringar på biomarkörer för oxidativ stress och risk för bröstcancer.

Vi kommer att studera kvinnor som tidigare har diagnostiserats med proliferativ bröstsjukdom. Dessa kvinnor kan vara goda kandidater för kostpreventionsstudier eftersom de löper något ökad risk för bröstcancer, får lite utöver operation för behandling och har visat sig ha högre nivåer av lipidoxidation i bröstet än kvinnor utan någon sådan diagnos.

VAD VI HOPPAS ATT UTFÖRA

Vi hoppas kunna fastställa genomförbarheten av att erhålla och analysera både NAF och bröstepitelceller från kvinnor med benign proliferativ bröstsjukdom. Dessa kvinnor löper ökad risk för bröstcancer och sammansättningen av NAF, som badar bröstkanalerna, kan påverka de morfologiska egenskaperna hos kärnorna i bröstepitelcellerna. Om nivåerna av lipidoxidationsprodukter är högre hos kvinnor med stora kärnor (en riskfaktor för bröstcancer), kan insatser som minskar oxidativ stress och cancerrisk planeras i framtiden.

Målen är:

1. För att avgöra om nivåer av fetter, skadade eller oxiderade fetter, oxiderade eller skadade vitaminer och vitaminer (8-isoprostan, kolesterol, fettsyror, tokoferoler, karotenoider och 2,6-cyklolykopen-4,5-diol) kan kvantifieras i bröst NAF erhållits före bröstsköljning. Nivåerna i NAF kommer att jämföras med den i blod. Dessa mått valdes utifrån deras potentiella samband med dietintag och till oxidativ stressnivåer, vilket är relevant för interventionsstudier. Tokoferoler och karotenoider är antioxidanter i kosten, och vissa fettsyror oxideras lättare än andra. Både 8-isoprostan och 2,6-cyklolykopen-4,5-diol verkar vara markörer för oxidativ stress.
2. Att erhålla bröstsköljningsvätskor från kvinnor med proliferativ bröstsjukdom och att karakterisera den nukleära morfologin hos bröstepitelceller i bröstsköljvätskan. Vi kommer att kvantifiera olika mått som vanligtvis används i biopsier, inklusive kärndiameter, omkrets, area, rundhet och förhållande mellan nukleär:cytoplasmatisk area. Dessa åtgärder har visat sig vara relaterade till bröstcancerrisk. Om det finns tillräckligt med celler kommer analys av oxidativ DNA-skada att göras med hjälp av kometanalysen.
3. Att undersöka om kärnmorfologi är associerad med nivåer av oxidativ stress i NAF. Korrelationer kommer att utvärderas med nivåer av 8-isoprostan, kolesterol, specifika fettsyror, 2,6-cyklolykopen-1,5-diol och fettlösliga mikronäringsämnen. Den potentiella inverkan av kost, demografiska faktorer och arten av tidigare biopsidiagnos på kärnmorfologi kommer också att undersökas som ett delmål i ett försök att bättre förstå skillnader mellan kvinnor i kärnmorfologin hos epitelceller från ductal lavage.

Materialet som samlas in för forskningsändamål kommer att vara:

Samtyckesformulär Hälsostatus Frågeformulär Mat Frekvens Frågeformulär Längd och kroppsvikt Bröstnipplaspiratvätska Bröstsköljvätska 10 ml Blodprovsbiopsidatum, diagnos och historia av medicinska problem från det medicinska diagrammet

PROVSTORLEK

Det var önskvärt att utrusta vår studie så att variablerna av intresse kan bestämmas inom en variationskoefficient (CV) på 25 %, med 90 % konfidens. Sextio försökspersoner skulle ge uppskattningar av medelnivån för 8 av de 9 studievariablerna inom ett CV på 25 %, med 90 % konfidens. Det enda undantaget är det mycket variabla 8-isoprostanmåttet, vars medelnivå kan uppskattas till inom ett CV på 37 %, med 90 % konfidens.

HUR STUDIEN KOMMER ATT GÖRAS

Totalt 75 kvinnor kommer att rekryteras till denna studie under ungefär 13 månader (tio månader år 1 och 3 månader år 2) av en läkare. Hon kommer från patientdiagrammet att bekräfta den tidigare diagnosen proliferativ bröstsjukdom, få fram vilken typ av bröstsjukdom som diagnostiserats, hur länge sedan den diagnostiserades till närmaste månad och eventuella bröst- eller hälsoproblem som kan påverka sköljresultaten. Försökspersonerna kommer att fylla i frågeformulär, vägas och mätas för längd, donera ett 10 ml blodprov och genomgå en bröstsköljning. Under sköljproceduren samlas bröstnippvätska och sköljvätska upp.

Bröstkanalsköljning är en viktig ny procedur som kan användas för att fastställa en kvinnas risk för bröstcancer. Det är en attraktiv diagnostisk metod eftersom den är förknippad med mycket lite obehag. För närvarande används det endast till vissa kvinnor som tros löpa mycket hög risk för bröstcancer. Under kanalsköljningsproceduren måste de vätskeproducerande kanalerna först identifieras. Detta görs genom att först frigöra kanalerna vid bröstvårtans yta av keratinpluggar, och en kvinna använder sedan massage för att producera vätska. Denna vätska, kallad nippelaspiratvätska (NAF), är det som badar bröstkanalerna och kommer att samlas in för analys i detta föreslagna projekt. När kanalerna som producerar NAF har identifierats, sköljer läkaren sedan kanalen. Sköljvätskan tvättar ut bröstceller som sedan kan utvärderas av en patolog för att avgöra om de är normala eller inte. Hela proceduren görs med anestesimedel vid bröstvårtans yta initialt och i sköljvätskan för att minimera eventuella obehag, och nivåerna av obehag är i allmänhet lägre än vid ett mammografi.

En tidig indikator på risk för bröstcancer kan vara egenskaperna hos epitelcellerna från sköljvätskan. Dessa bröstceller lossnar vid sköljning, de placeras på ett objektglas och en patolog undersöker dem för avvikelser. Utöver den patologiska diagnosen kan det finnas subtila förändringar i cellernas utseende. Förändringar i storleken och formen på cellkärnan kan mätas med hjälp av ett datordrivet mikroskop som har kvantitativ bildanalysmjukvara. Ökning av kärnarea, diameter och omkrets och mindre enhetlig rundhet av kärnor är kända för att vara associerade med bröstcancer av högre grad. Den här typen av mått har också mätts i bröstbiopsier som var antingen normala eller hyperplastiska, och de kvinnor med större kärnor i helt godartade bröstbiopsier var mer benägna att utveckla bröstcancer 1-33 år senare.

En faktor som kan påverka formen av kärnor i bröstceller är nivån av oxidativ stress i bröstet. Bröstvätskan är mycket rik på fetter, eller lipider, och vissa typer av lipider oxideras lätt. NAF innehåller även vitaminer erhållna från frukt och grönsaker som fungerar som antioxidanter för att stoppa lipidoxidation. Till exempel kan karotenoider reagera med skadliga oxidanter för att bilda oxiderade karotenoider. Vi kommer därför att mäta nivåer av en lipidperoxidationsmarkör och en oxiderad karotenoid i NAF som markörer för oxidativ stress. Vi kommer också att mäta fettsyranivåer och nivåer av ooxiderade karotenoider. Vi kommer sedan att avgöra om skillnader i sammansättningen av NAF är relaterade till måtten på kärnform gjorda på bröstceller.

Bröstets NAF och blod kommer att analyseras för kolesterol med hjälp av spektrofotometriska kit. Fettsyror kommer att analyseras med hjälp av gaskromatografi. Totalt 8-isoprostaner kommer att analyseras med immunanalyskit. Mikronäringsämnen och vitaminer kommer att analyseras med högtrycksvätskekromatografi. Nukleär morfologi kommer att analyseras med ett datordrivet mikroskop. DNA-skador i bröstceller kommer att analyseras med gelelektrofores av lyserade celler (kometanalys). Statistiska analyser kommer att göra det möjligt för oss att avgöra om NAF och blodmått är relaterade till varandra och till de nukleära åtgärderna.