Morfologia jądrowa komórek piersi w płukaniu przewodowym

DLACZEGO BADANIE JEST WYKONYWANE

Płyn aspiracyjny z piersi (NAF) można uzyskać od kobiet w sposób nieinwazyjny, dzięki czemu analizy tego płynu są istotne w badaniach ryzyka raka piersi. Międzyosobnicze zróżnicowanie produktów utleniania lipidów (rodzaj uszkodzenia tłuszczów) w NAF jest ponad 100-krotne, a te produkty utleniania prawdopodobnie mają toksyczny wpływ na komórki nabłonka piersi. Podczas płukania przewodów sutka najpierw zasysa się NAF, a następnie przewody wytwarzające płyn poddaje się płukaniu w celu uzyskania komórek nabłonkowych. Następnie można zbadać cechy jądrowe (morfologię) tych komórek. Morfologia jądra to ilościowa metoda obserwacji subtelnych zmian w cechach jądra, a wykazano, że te pomiary w łagodnych biopsjach piersi mają wartość prognostyczną dla ryzyka raka piersi.

To badanie eksploracyjne pomoże ustalić wykonalność wykorzystania tych środków jako punktów końcowych w badaniach interwencji dietetycznej. Ponieważ różnice w poziomach utleniania lipidów w NAF są wyraźnie duże, uzasadnione jest przypuszczenie, że musi istnieć jakiś wpływ na morfologię jądra. Środki te powinny mieć również zastosowanie do badań, które mają na celu zbadanie wpływu niektórych polimorfizmów genetycznych i narażenia środowiskowego na biomarkery stresu oksydacyjnego i ryzyka raka piersi.

Będziemy badać kobiety, u których wcześniej zdiagnozowano proliferacyjną chorobę piersi. Te kobiety mogą być dobrymi kandydatkami do badań nad profilaktyką żywieniową, ponieważ są nieco bardziej narażone na raka piersi, otrzymują niewiele poza operacją w celu leczenia i wykazano, że mają wyższy poziom utleniania lipidów w piersiach niż kobiety bez takiej diagnozy.

CO MAMY NADZIEJĘ, ŻE ZROBIMY

Mamy nadzieję, że uda nam się określić wykonalność uzyskania i analizy zarówno NAF, jak i komórek nabłonka piersi od kobiet z łagodną proliferacyjną chorobą piersi. Kobiety te są narażone na zwiększone ryzyko raka piersi, a skład NAF, który obmywa przewody piersiowe, może wpływać na cechy morfologiczne jąder w komórkach nabłonka piersi. Jeśli poziomy produktów utleniania lipidów są wyższe u kobiet z dużymi jądrami (czynnik ryzyka raka piersi), to w przyszłości można zaplanować interwencje zmniejszające stres oksydacyjny i ryzyko raka.

Cele to:

1. Aby określić, czy poziomy tłuszczów, uszkodzonych lub utlenionych tłuszczów, utlenionych lub uszkodzonych witamin i witamin (8-izoprostanu, cholesterolu, kwasów tłuszczowych, tokoferoli, karotenoidów i 2,6-cyklolikopeno-4,5-diolu) można określić ilościowo w NAF piersi uzyskane przed płukaniem piersi. Poziomy w NAF zostaną porównane z poziomami we krwi. Środki te zostały wybrane na podstawie ich potencjalnego związku ze spożyciem w diecie i poziomami stresu oksydacyjnego, co jest istotne dla badań interwencyjnych. Tokoferole i karotenoidy są dietetycznymi przeciwutleniaczami, a niektóre kwasy tłuszczowe utleniają się łatwiej niż inne. Zarówno 8-izoprostan, jak i 2,6-cyklolikopeno-4,5-diol wydają się być markerami stresu oksydacyjnego.
2. Aby uzyskać płyny z płukania piersi od kobiet z proliferacyjną chorobą piersi i scharakteryzować morfologię jądrową komórek nabłonka piersi w płynie z płukania piersi. Ocenimy ilościowo różne miary powszechnie stosowane w biopsjach, w tym średnicę jądra, obwód, powierzchnię, okrągłość i stosunek powierzchni jądra do cytoplazmy. Wykazano, że środki te są związane z ryzykiem raka piersi. W przypadku wystarczającej liczby komórek zostanie przeprowadzona analiza uszkodzeń oksydacyjnych DNA za pomocą testu kometowego.
3. Aby zbadać, czy morfologia jądrowa jest związana z poziomami stresu oksydacyjnego w NAF. Ocenione zostaną korelacje z poziomami 8-izoprostanu, cholesterolu, specyficznych kwasów tłuszczowych, 2,6-cyklolikopeno-1,5-diolu i rozpuszczalnych w tłuszczach mikroelementów. Potencjalny wpływ diety, czynników demograficznych i natury wcześniejszej diagnozy biopsji na morfologię jądra zostanie również zbadany jako cel podrzędny w celu lepszego zrozumienia różnic między kobietami w morfologii jądrowej komórek nabłonka z popłuczyn przewodowych.

Materiały gromadzone do celów badawczych będą:

Formularz zgody Kwestionariusz stanu zdrowia Kwestionariusz częstotliwości spożywania pokarmów Wzrost i masa ciała Płyn aspirowany z sutka piersi Płyn do płukania piersi 10 ml Próbka krwi Data biopsji, diagnoza i historia problemów medycznych z karty medycznej

WIELKOŚĆ PRÓBKI

Pożądane było wyposażenie naszego badania w taki sposób, aby interesujące zmienne można było określić przy współczynniku zmienności (CV) 25%, z 90% pewnością. Sześćdziesięciu badanych dałoby oszacowania średniego poziomu 8 z 9 badanych zmiennych z CV w granicach 25%, z 90% pewnością. Jedynym wyjątkiem jest wysoce zmienna miara 8-izoprostanu, której średni poziom można oszacować z CV na poziomie 37%, z 90% pewnością.

JAK BĘDZIE PRZEPROWADZANE BADANIE

Łącznie 75 kobiet zostanie zwerbowanych do tego badania przez około 13 miesięcy (dziesięć miesięcy w roku 1 i 3 miesiące w roku 2) przez klinicystę. Potwierdzi z karty pacjenta wcześniejsze rozpoznanie choroby rozrostowej piersi, uzyska rodzaj zdiagnozowanej choroby piersi, jak dawno została zdiagnozowana z dokładnością do miesiąca oraz wszelkie problemy piersi lub problemy zdrowotne, które mogłyby wpłynąć na wyniki płukania. Badane osoby wypełnią kwestionariusze, zostaną zważone i zmierzone pod kątem wzrostu, oddadzą 10 ml krwi i przejdą procedurę płukania piersi. Podczas procedury płukania zostanie pobrany płyn z brodawki sutkowej i płyn z płukania.

Płukanie przewodowe piersi jest ważną nową procedurą, która może pomóc w określeniu ryzyka zachorowania na raka piersi u kobiety. Jest atrakcyjną metodą diagnostyczną, ponieważ wiąże się z bardzo niewielkim dyskomfortem. Obecnie stosuje się go tylko u niektórych kobiet, u których uważa się, że ryzyko raka piersi jest bardzo wysokie. Podczas procedury płukania przewodów należy najpierw zidentyfikować przewody wytwarzające płyn. Odbywa się to poprzez najpierw uwolnienie kanałów na powierzchni sutków zatyczek keratynowych, a następnie kobieta używa masażu do wytworzenia płynu. Ten płyn, zwany płynem z aspiratu brodawki sutkowej (NAF), kąpie przewody piersiowe i zostanie zebrany do analizy w ramach tego proponowanego projektu. Po zidentyfikowaniu przewodów, które wytwarzają NAF, lekarz przepłukuje przewód. Płyn płuczący wypłukuje komórki piersi, które następnie patolog może ocenić, czy są normalne. Cała procedura jest wykonywana przy użyciu środka znieczulającego na powierzchni brodawki sutkowej oraz w płynie do płukania, aby zminimalizować dyskomfort, a poziom dyskomfortu jest na ogół mniejszy niż w przypadku mammografii.

Wczesnym wskaźnikiem ryzyka raka piersi może być charakterystyka komórek nabłonka z płynu popłucznego. Te komórki piersi są usuwane podczas płukania, umieszczane na szkiełku i patolog bada je pod kątem nieprawidłowości. Poza patologiczną diagnozą mogą występować subtelne zmiany w wyglądzie komórek. Zmiany wielkości i kształtu jądra komórkowego można mierzyć za pomocą sterowanego komputerowo mikroskopu z oprogramowaniem do ilościowej analizy obrazu. Wiadomo, że zwiększenie powierzchni jądra, średnicy i obwodu oraz mniej jednolita okrągłość jąder są związane z rakiem piersi o wyższym stopniu złośliwości. Tego rodzaju pomiary mierzono również w biopsjach piersi, które były albo normalne, albo hiperplastyczne, a kobiety z większymi jądrami w całkowicie łagodnych biopsjach piersi były bardziej narażone na rozwój raka piersi 1-33 lata później.

Jednym z czynników, który może wpływać na kształt jąder w komórkach piersi, jest poziom stresu oksydacyjnego w piersiach. Płyn piersiowy jest bardzo bogaty w tłuszcze lub lipidy, a niektóre rodzaje lipidów łatwo ulegają utlenieniu. NAF zawiera również witaminy pozyskiwane z owoców i warzyw, które działają jako przeciwutleniacze, zatrzymując utlenianie lipidów. Na przykład karotenoidy mogą reagować ze szkodliwymi utleniaczami, tworząc utlenione karotenoidy. Dlatego będziemy mierzyć poziomy jednego markera peroksydacji lipidów i jednego utlenionego karotenoidu w NAF jako markerów stresu oksydacyjnego. Zmierzymy również poziom kwasów tłuszczowych i poziom nieutlenionych karotenoidów. Następnie ustalimy, czy różnice w składzie NAF są związane z pomiarami kształtu jądra wykonanego na komórkach piersi.

NAF piersi i krew będą analizowane pod kątem cholesterolu za pomocą zestawów spektrofotometrycznych. Kwasy tłuszczowe będą analizowane metodą chromatografii gazowej. Całkowite 8-izoprostany będą analizowane za pomocą zestawów do testów immunologicznych. Mikroelementy i witaminy będą analizowane metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej. Morfologia jądra będzie analizowana za pomocą sterowanego komputerowo mikroskopu. Uszkodzenia DNA w komórkach piersi będą analizowane za pomocą elektroforezy żelowej zlizowanych komórek (test kometowy). Analizy statystyczne pozwolą nam określić, czy środki NAF i środki dotyczące krwi są ze sobą powiązane oraz ze środkami nuklearnymi.