Nucleaire morfologie van borstcellen in ductale lavage

WAAROM DE STUDIE WORDT GEDAAN

Borsttepel-aspiraatvloeistoffen (NAF) kunnen niet-invasief van vrouwen worden verkregen, waardoor analyses van deze vloeistof relevant zijn voor onderzoeken naar het risico op borstkanker. De interindividuele variatie voor lipide-oxidatieproducten (een soort schade aan vetten) in NAF is meer dan 100-voudig, en deze oxidatieproducten hebben waarschijnlijk een toxisch effect op de borstepitheelcellen. Tijdens borstkanaalspoeling wordt eerst NAF opgezogen en de kanalen die vloeistof produceren, worden vervolgens onderworpen aan spoeling om epitheelcellen te verkrijgen. De nucleaire kenmerken (morfologie) van deze cellen kunnen dan worden onderzocht. Nucleaire morfologie is een kwantitatieve methode om subtiele veranderingen in nucleaire kenmerken waar te nemen, en deze maatregelen in goedaardige borstbiopten hebben een voorspellende waarde voor het risico op borstkanker.

Deze verkennende studie zal helpen bij het vaststellen van de haalbaarheid van het gebruik van deze maatregelen als eindpunten in voedingsinterventiestudies. Aangezien de verschillen in lipide-oxidatieniveaus in NAF opmerkelijk groot zijn, is het redelijk om aan te nemen dat er enige invloed moet zijn op de nucleaire morfologie. Deze maatregelen zouden ook van toepassing moeten zijn op onderzoeken die gericht zijn op het onderzoeken van de impact van bepaalde genetische polymorfismen en omgevingsblootstellingen op biomarkers van oxidatieve stress en het risico op borstkanker.

We zullen vrouwen bestuderen bij wie eerder de diagnose proliferatieve borstziekte is gesteld. Deze vrouwen kunnen goede kandidaten zijn voor voedingspreventiestudies, aangezien ze een enigszins verhoogd risico op borstkanker hebben, weinig meer dan een operatie ondergaan voor behandeling en er is aangetoond dat ze hogere niveaus van lipidenoxidatie in de borst hebben dan vrouwen zonder een dergelijke diagnose.

WAT WE HOPEN TE BEREIKEN

We hopen de haalbaarheid te bepalen van het verkrijgen en analyseren van zowel NAF- als borstepitheelcellen van vrouwen met goedaardige proliferatieve borstziekte. Deze vrouwen lopen een verhoogd risico op borstkanker, en de samenstelling van de NAF, die de borstkanalen baadt, kan de morfologische kenmerken van de kernen in de borstepitheelcellen beïnvloeden. Als de niveaus van lipidenoxidatieproducten hoger zijn bij vrouwen met grote kernen (een risicofactor voor borstkanker), kunnen in de toekomst interventies worden gepland die oxidatieve stress en het risico op kanker verminderen.

De doelstellingen zijn:

1. Om te bepalen of niveaus van vetten, beschadigde of geoxideerde vetten, geoxideerde of beschadigde vitamines en vitamines (8-isoprostaan, cholesterol, vetzuren, tocoferolen, carotenoïden en 2,6-cyclolycopeen-4,5-diol) kunnen worden gekwantificeerd in NAF in de borst verkregen vóór borstspoeling. Niveaus in NAF zullen worden vergeleken met die in bloed. Deze maatregelen werden gekozen op basis van hun potentiële relaties met de inname via de voeding en met oxidatieve stressniveaus, wat relevant is voor interventiestudies. Tocoferolen en carotenoïden zijn antioxidanten in de voeding en bepaalde vetzuren worden gemakkelijker geoxideerd dan andere. Zowel 8-isoprostaan ​​als 2,6-cyclolycopeen-4,5-diol blijken markers te zijn van oxidatieve stress.
2. Om borstspoelingsvloeistoffen te verkrijgen van vrouwen met proliferatieve borstziekte en om de nucleaire morfologie van borstepitheelcellen in de borstspoelingsvloeistof te karakteriseren. We zullen verschillende maatstaven kwantificeren die vaak worden gebruikt in biopsieën, waaronder nucleaire diameter, omtrek, oppervlakte, ronding en nucleaire: cytoplasmatische oppervlakteverhouding. Van deze maatregelen is aangetoond dat ze verband houden met het risico op borstkanker. Als er voldoende cellen zijn, wordt de oxidatieve DNA-schade geanalyseerd met behulp van de komeettest.
3. Om te onderzoeken of nucleaire morfologie geassocieerd is met niveaus van oxidatieve stress in de NAF. Correlaties zullen worden geëvalueerd met niveaus van 8-isoprostane, cholesterol, specifieke vetzuren, 2,6-cyclolycopeen-1,5-diol en in vet oplosbare micronutriënten. De mogelijke invloed van voeding, demografische factoren en aard van eerdere biopsiediagnose op nucleaire morfologie zal ook worden onderzocht als een subdoel in een poging om de verschillen tussen vrouwen in de nucleaire morfologie van epitheelcellen van ductale lavage beter te begrijpen.

De materialen die voor onderzoeksdoeleinden worden verzameld, zijn:

Toestemmingsformulier Gezondheidsstatusvragenlijst Voedselfrequentievragenlijst Lengte en lichaamsgewicht Aspiratievloeistof uit de tepel Borstspoelvloeistof 10 ml Bloedmonster Biopsiedatum, diagnose en geschiedenis van medische problemen uit de medische kaart

STEEKPROEFGROOTTE

Het was gewenst om onze studie zo uit te rusten dat de variabelen van belang kunnen worden bepaald binnen een variatiecoëfficiënt (CV) van 25%, met een betrouwbaarheid van 90%. Zestig proefpersonen zouden schattingen opleveren van het gemiddelde niveau van 8 van de 9 studievariabelen tot binnen een CV van 25%, met een betrouwbaarheid van 90%. De enige uitzondering is de zeer variabele 8-isoprostaanmaat, waarvan het gemiddelde niveau kan worden geschat binnen een CV van 37%, met een betrouwbaarheid van 90%.

HOE DE STUDIE ZAL WORDEN UITGEVOERD

Een totaal van 75 vrouwen zal gedurende ongeveer 13 maanden (tien maanden van jaar 1 en 3 maanden van jaar 2) door een clinicus worden aangeworven voor deze studie. Ze zal aan de hand van de patiëntenkaart de eerdere diagnose van proliferatieve borstaandoening bevestigen, het type gediagnosticeerde borstaandoening verkrijgen, hoe lang geleden de diagnose is gesteld tot op de dichtstbijzijnde maand, en eventuele borst- of gezondheidsproblemen die de resultaten van de lavage kunnen beïnvloeden. De proefpersonen vullen vragenlijsten in, worden gewogen en gemeten op lengte, doneren een bloedmonster van 10 ml en ondergaan een borstspoelingsprocedure. Tijdens de lavageprocedure wordt het tepelvocht en het lavagevocht opgevangen.

Borstkanaalspoeling is een belangrijke nieuwe procedure die kan worden gebruikt om het risico van een vrouw op borstkanker te helpen bepalen. Het is een aantrekkelijke diagnostische methode omdat het gepaard gaat met zeer weinig ongemak. Momenteel wordt het alleen gebruikt bij bepaalde vrouwen van wie wordt aangenomen dat ze een zeer hoog risico lopen op borstkanker. Tijdens de ductale lavageprocedure moeten eerst de vloeistofproducerende kanalen worden geïdentificeerd. Dit wordt gedaan door eerst de kanalen aan het tepeloppervlak van keratinepluggen vrij te maken en een vrouw gebruikt vervolgens massage om vloeistof te produceren. Deze vloeistof, tepelaspiraatvloeistof (NAF) genoemd, is wat de borstkanalen baadt en zal worden verzameld voor analyse in dit voorgestelde project. Zodra de kanalen die NAF produceren zijn geïdentificeerd, spoelt de arts het kanaal. De spoelvloeistof spoelt borstcellen uit die vervolgens door een patholoog kunnen worden beoordeeld om te bepalen of ze normaal zijn. De hele procedure wordt aanvankelijk uitgevoerd met behulp van verdoving aan het tepeloppervlak en in de lavagevloeistof om enig ongemak te minimaliseren, en de mate van ongemak is over het algemeen minder dan bij een mammogram.

Een vroege indicator van het risico op borstkanker kunnen de kenmerken van de epitheelcellen van de lavagevloeistof zijn. Deze borstcellen worden bij lavage losgemaakt, ze worden op een glaasje geplaatst en een patholoog onderzoekt ze op afwijkingen. Naast de pathologische diagnose kunnen er subtiele veranderingen zijn in het uiterlijk van de cellen. Veranderingen in de grootte en vorm van de celkern kunnen worden gemeten met behulp van een computergestuurde microscoop met software voor kwantitatieve beeldanalyse. Het is bekend dat toename van het nucleair gebied, de diameter en omtrek en de minder gelijkmatige ronding van de kernen verband houden met borstkanker van hogere graad. Dit soort maatregelen zijn ook gemeten bij borstbiopten die normaal of hyperplastisch waren, en die vrouwen met grotere kernen in volledig goedaardige borstbiopten hadden een grotere kans om 1-33 jaar later borstkanker te krijgen.

Een factor die de vorm van kernen in borstcellen kan beïnvloeden, is het niveau van oxidatieve stress in de borst. Het borstvocht is erg rijk aan vetten, of lipiden, en bepaalde soorten lipiden worden gemakkelijk geoxideerd. NAF bevat ook vitaminen verkregen uit groenten en fruit die functioneren als antioxidanten om de oxidatie van lipiden te stoppen. Carotenoïden kunnen bijvoorbeeld reageren met schadelijke oxidanten om geoxideerde carotenoïden te vormen. We zullen daarom de niveaus van één lipideperoxidatiemarker en één geoxideerde carotenoïde in NAF meten als markers van oxidatieve stress. We zullen ook het vetzuurgehalte en het gehalte aan niet-geoxideerde carotenoïden meten. Vervolgens zullen we bepalen of verschillen in de samenstelling van de NAF verband houden met de metingen van de nucleaire vorm op borstcellen.

De borst-NAF en het bloed worden geanalyseerd op cholesterol met behulp van spectrofotometrische kits. Vetzuren worden geanalyseerd met behulp van gaschromatografie. Totaal 8-isoprostanen zullen worden geanalyseerd door middel van immunoassaykits. Micronutriënten en vitamines zullen worden geanalyseerd door middel van hogedrukvloeistofchromatografie. Nucleaire morfologie zal geanalyseerd worden door een computergestuurde microscoop. DNA-schade in borstcellen zal worden geanalyseerd met behulp van gelelektroforese van gelyseerde cellen (comet-assay). Met statistische analyses kunnen we bepalen of de NAF- en bloedmetingen verband houden met elkaar en met de nucleaire maatregelen.