乳管洗浄液中の乳房細胞の核形態

研究が行われている理由

乳頭吸引液 (NAF) は女性から非侵襲的に採取できるため、この液の分析は乳癌リスクの研究に関連しています。 NAF における脂質酸化生成物 (脂肪への損傷の一種) の個人差は 100 倍以上であり、これらの酸化生成物は乳房上皮細胞に毒性の影響を与える可能性があります。 乳管洗浄中、NAFは最初に吸引され、次に液体を生成する乳管が洗浄されて上皮細胞が得られます。 次に、これらの細胞の核の特徴 (形態) を調べることができます。 核の形態は、核の特徴の微妙な変化を観察する定量的な方法であり、良性の乳房生検におけるこれらの測定値は、乳がんリスクの予後的価値があることが示されています。

この探索的研究は、これらの測定値を食事介入研究のエンドポイントとして使用する可能性を確立するのに役立ちます. NAF における脂質酸化レベルの差は著しく大きいため、核の形態に何らかの影響があるに違いないと考えるのは妥当です。 これらの措置は、特定の遺伝子多型と環境への曝露が酸化ストレスと乳がんリスクのバイオマーカーに与える影響を調べる調査にも適用できるはずです。

以前に増殖性乳房疾患と診断された女性を研究します。 これらの女性は、乳がんのリスクがやや高く、手術以外の治療はほとんど受けておらず、そのような診断を受けていない女性よりも乳房の脂質酸化レベルが高いことが示されているため、食事予防研究の良い候補となる可能性があります.

私たちが達成したいこと

良性増殖性乳房疾患の女性からNAFと乳房上皮細胞の両方を取得して分析する可能性を判断したいと考えています。 これらの女性は乳がんのリスクが高く、乳管を浸すNAFの組成は、乳房上皮細胞の核の形態学的特徴に影響を与える可能性があります. 脂質酸化生成物のレベルが大きな核 (乳癌の危険因子) を持つ女性で高い場合、酸化ストレスと癌のリスクを軽減する介入が将来計画される可能性があります。

目的は次のとおりです。

1. 脂肪、損傷または酸化脂肪、酸化または損傷ビタミンおよびビタミン (8-イソプロスタン、コレステロール、脂肪酸、トコフェロール、カロテノイド、および 2,6-シクロリコペン-4,5-ジオール) のレベルを乳房 NAF で定量化できるかどうかを判断する乳房洗浄前に取得。 NAF のレベルは、血中のレベルと比較されます。 これらの対策は、介入研究に関連する食事摂取量および酸化ストレスレベルとの潜在的な関係に基づいて選択されました。 トコフェロールとカロテノイドは食事の抗酸化物質であり、特定の脂肪酸は他の脂肪酸よりも容易に酸化されます. 8-イソプロスタンと 2,6-シクロリコペン-4,5-ジオールの両方が酸化ストレスのマーカーのようです。
2. 増殖性乳房疾患の女性から乳房洗浄液を取得し、乳房洗浄液中の乳房上皮細胞の核形態を特徴付ける。 核の直径、円周、面積、真円度、核と細胞質の面積比など、生検で一般的に使用されるさまざまな尺度を定量化します。 これらの測定値は、乳がんのリスクに関連していることが示されています。 十分な数の細胞があれば、酸化的 DNA 損傷の分析はコメット アッセイを使用して行われます。
3. 核の形態がNAFの酸化ストレスのレベルと関連しているかどうかを調べる。 相関関係は、8-イソプロスタン、コレステロール、特定の脂肪酸、2,6-シクロリコペン-1,5-ジオール、および脂溶性微量栄養素のレベルで評価されます。 食事、人口統計学的要因、および核形態に対する以前の生検診断の性質の潜在的な影響も、管洗浄液からの上皮細胞の核形態における女性間の違いをよりよく理解するためのサブ目的として検討されます。

研究目的で収集される資料は次のとおりです。

同意書 健康状態アンケート 食事頻度アンケート 身長と体重 乳房乳頭吸引液 乳房洗浄液 10ml 血液サンプルの生検日、カルテからの診断と病歴

サンプルサイズ

関心のある変数が 25% の変動係数 (CV) 内で 90% の信頼度で決定できるように、我々の研究を装備することが望まれました。 60 人の被験者は、90% の信頼度で 25% の CV 以内に 9 つの研究変数のうち 8 つの平均レベルの推定値をもたらします。 1 つの例外は、ばらつきの大きい 8-イソプロスタン測定値であり、その平均レベルは 90% の信頼度で 37% の CV 内に推定できます。

調査の実施方法

合計 75 人の女性がこの研究のために臨床医によって約 13 か月 (1 年目の 10 か月と 2 年目の 3 か月) にわたって募集されます。 彼女は患者カルテから増殖性乳房疾患の以前の診断を確認し、診断された乳房疾患の種類、診断された月からどれくらい前に診断されたか、および洗浄結果に影響を与える可能性のある乳房または健康上の問題を取得します。 研究対象者はアンケートに記入し、体重と身長を測定し、10 ml の血液サンプルを提供し、乳房洗浄手順を受けます。 洗浄手順中に、乳房乳頭液と洗浄液が収集されます。

乳管洗浄は、女性の乳がんリスクを判断するのに役立つ重要な新しい手順です。 不快感がほとんどないため、魅力的な診断方法です。 現在、乳がんのリスクが非常に高いと考えられている特定の女性にのみ使用されています。 管洗浄手順中に、液体を生成する管を最初に特定する必要があります。 これは、まず角栓の乳頭表面にあるダクトを解放することによって行われ、次に女性がマッサージを使用して液体を生成します. 乳頭吸引液 (NAF) と呼ばれるこの液体は、乳管を浸すものであり、この提案されたプロジェクトで分析のために収集されます。 NAF を生成する管が特定されると、医師は管を洗浄します。 洗浄液は乳房細胞を洗い流し、病理学者が評価して正常かどうかを判断します。 全体の手順は、最初に乳頭表面と洗浄液に麻酔を使用して行われ、不快感を最小限に抑えます。不快感のレベルは、一般的にマンモグラムの場合よりも少なくなります。

乳癌リスクの早期指標は、洗浄液からの上皮細胞の特徴である可能性があります。 これらの乳腺細胞は洗浄時に剥がれ、スライド上に置かれ、病理学者がそれらに異常がないか調べます。 病理診断を超えて、細胞の外観に微妙な変化があるかもしれません。 細胞核のサイズと形状の変化は、定量的画像解析ソフトウェアを備えたコンピューター駆動の顕微鏡を使用して測定できます。 核の面積、直径、周囲の増加、および核の円形度の均一性の低下は、より高度な乳癌に関連することが知られています。 これらの種類の措置は、正常または過形成の乳房生検でも測定されており、完全に良性の乳房生検でより大きな核を持つ女性は、1〜33年後に乳癌を発症する可能性が高くなりました.

乳房細胞の核の形状に影響を与える要因の 1 つは、乳房の酸化ストレスのレベルです。 乳房液は脂肪または脂質が非常に豊富で、特定の種類の脂質は容易に酸化されます。 NAFには、脂質の酸化を止める抗酸化物質として機能する果物や野菜から得られるビタミンも含まれています. たとえば、カロテノイドは有害な酸化剤と反応して酸化カロテノイドを形成することがあります。 したがって、酸化ストレスのマーカーとして、NAF の 1 つの脂質過酸化マーカーと 1 つの酸化カロテノイドのレベルを測定します。 また、脂肪酸レベルと非酸化カロテノイドのレベルも測定します。 次に、NAF の組成の違いが乳房細胞の核形状の尺度に関連しているかどうかを判断します。

吸光光度キットを使用して、乳房 NAF と血液のコレステロールを分析します。 脂肪酸は、ガスクロマトグラフィーを使用して分析されます。 合計 8-イソプロスタンは、イムノアッセイ キットによって分析されます。 微量栄養素とビタミンは、高圧液体クロマトグラフィーによって分析されます。 核の形態は、コンピューター駆動の顕微鏡によって分析されます。 乳房細胞のDNA損傷は、溶解細胞のゲル電気泳動（コメットアッセイ）を使用して分析されます。 統計分析により、NAFと血液の測定値が互いに関連しているかどうか、および核の測定値に関連しているかどうかを判断できます。