Nuklear morfologi af brystceller i duktal lavage

HVORFOR UDFØRES UNDERSØGELSEN

Brystnippelaspiratvæsker (NAF) kan opnås non-invasivt fra kvinder, hvilket gør analyser af denne væske relevante for undersøgelser af risiko for brystkræft. Den interindividuelle variation for lipidoxidationsprodukter (en type skade på fedtstoffer) i NAF er mere end 100 gange, og disse oxidationsprodukter vil sandsynligvis have en toksisk effekt på brystepitelcellerne. Under brystkanalskylning aspireres NAF først, og kanalerne, der producerer væske, udsættes derefter for skylning for at opnå epitelceller. De nukleare træk (morfologi) af disse celler kan derefter undersøges. Nuklear morfologi er en kvantitativ metode til at observere subtile ændringer i nukleare funktioner, og disse målinger i benigne brystbiopsier har vist sig at have prognostisk værdi for brystkræftrisiko.

Denne eksplorative undersøgelse vil hjælpe med at fastslå gennemførligheden af ​​at bruge disse foranstaltninger som endepunkter i diætinterventionsundersøgelser. Da forskellene i lipidoxidationsniveauer i NAF er markant store, er det rimeligt at tro, at der må være en vis indflydelse på nuklear morfologi. Disse foranstaltninger bør også være anvendelige til undersøgelser, der søger at undersøge virkningen af ​​visse genetiske polymorfier og miljøeksponeringer på biomarkører for oxidativt stress og risiko for brystkræft.

Vi vil studere kvinder, der tidligere er blevet diagnosticeret med proliferativ brystsygdom. Disse kvinder kan være gode kandidater til diætforebyggende undersøgelser, da de har en noget øget risiko for brystkræft, får lidt ud over operation til behandling og har vist sig at have højere niveauer af lipidoxidation i brystet end kvinder uden en sådan diagnose.

HVAD VI HÅBER AT UDFØRE

Vi håber at bestemme gennemførligheden af ​​at opnå og analysere både NAF og brystepitelceller fra kvinder med benign proliferativ brystsygdom. Disse kvinder har øget risiko for brystkræft, og sammensætningen af ​​NAF, som bader brystkanalerne, kan påvirke de morfologiske egenskaber af kernerne i brystepitelcellerne. Hvis niveauet af lipidoxidationsprodukter er højere hos kvinder med store kerner (en risikofaktor for brystkræft), kan der i fremtiden planlægges indgreb, der reducerer oxidativt stress og kræftrisiko.

Målene er:

1. For at bestemme, om niveauer af fedtstoffer, beskadigede eller oxiderede fedtstoffer, oxiderede eller beskadigede vitaminer og vitaminer (8-isoprostan, kolesterol, fedtsyrer, tocopheroler, carotenoider og 2,6-cyclolycopen-4,5-diol) kan kvantificeres i bryst NAF opnået før brystskylning. Niveauer i NAF vil blive sammenlignet med niveauer i blod. Disse mål blev valgt ud fra deres potentielle relationer til diætindtag og til oxidativt stressniveau, hvilket er relevant for interventionsstudier. Tocopheroler og carotenoider er diætantioxidanter, og visse fedtsyrer oxideres lettere end andre. Både 8-isoprostan og 2,6-cyclolycopen-4,5-diol ser ud til at være markører for oxidativt stress.
2. At opnå brystskyllevæsker fra kvinder med proliferativ brystsygdom og at karakterisere den nukleare morfologi af brystepitelceller i brystskyllevæsken. Vi vil kvantificere forskellige mål, der almindeligvis anvendes i biopsier, herunder nuklear diameter, omkreds, areal, rundhed og nuklear:cytoplasmatisk arealforhold. Disse målinger har vist sig at være relateret til risiko for brystkræft. Hvis der er tilstrækkelige celler, vil der blive foretaget analyse af oxidativ DNA-skade ved hjælp af kometassayet.
3. At undersøge om nuklear morfologi er forbundet med niveauer af oxidativ stress i NAF. Korrelationer vil blive evalueret med niveauer af 8-isoprostan, kolesterol, specifikke fedtsyrer, 2,6-cyclolycopen-1,5-diol og fedtopløselige mikronæringsstoffer. Den potentielle indflydelse af kost, demografiske faktorer og arten af ​​tidligere biopsidiagnose på nuklear morfologi vil også blive undersøgt som et delmål i et forsøg på bedre at forstå forskelle blandt kvinder i nuklear morfologi af epitelceller fra ductal lavage.

Materialerne indsamlet til forskningsformål vil være:

Samtykkeskema Sundhedsstatus Spørgeskema Madhyppighed Spørgeskema Højde og kropsvægt Brystnippelaspiratvæske Brystskyllevæske 10 ml Blodprøvebiopsidato, diagnose og historie med medicinske problemer fra det medicinske skema

PRØVE STØRRELSE

Det var ønsket at udstyre vores undersøgelse således, at variablerne af interesse kan bestemmes inden for en variationskoefficient (CV) på 25%, med 90% konfidens. Tres forsøgspersoner ville give estimater af gennemsnitsniveauet for 8 af de 9 undersøgelsesvariable til inden for et CV på 25 %, med 90 % sikkerhed. Den ene undtagelse er det meget variable 8-isoprostan-mål, hvis gennemsnitsniveau kunne estimeres til inden for en CV på 37%, med 90% konfidens.

HVORDAN UNDERSØGELSEN VIL FORETAGES

I alt 75 kvinder vil blive rekrutteret til denne undersøgelse over ca. 13 måneder (ti måneder af år 1 og 3 måneder af år 2) af en kliniker. Hun vil fra patientskemaet bekræfte den tidligere diagnose af proliferativ brystsygdom, få den diagnosticerede type brystsygdom, hvor lang tid siden den blev diagnosticeret til nærmeste måned, og eventuelle bryst- eller helbredsproblemer, der kunne påvirke skylleresultaterne. Forsøgspersonerne vil udfylde spørgeskemaer, blive vejet og målt for højde, donere en 10 ml blodprøve og gennemgå en brystskylningsprocedure. Under skylleproceduren vil brystvortens væske og skyllevæsken blive opsamlet.

Brystkanalskylning er en vigtig ny procedure, der kan bruges til at bestemme en kvindes risiko for brystkræft. Det er en attraktiv diagnostisk metode, da den er forbundet med meget lidt ubehag. På nuværende tidspunkt bruges det kun til visse kvinder, som menes at være i meget høj risiko for brystkræft. Under ductal lavage-proceduren skal de væskeproducerende kanaler først identificeres. Dette gøres ved først at frigøre kanalerne ved brystvortens overflade af keratinpropper, og en kvinde bruger derefter massage til at producere væske. Denne væske, kaldet nippelaspiratvæske (NAF), er det, der bader brystkanalerne og vil blive indsamlet til analyse i dette foreslåede projekt. Når kanalerne, der producerer NAF, er identificeret, laver lægen derefter kanalen. Lavagevæsken udvasker brystceller, som derefter kan evalueres af en patolog for at afgøre, om de er normale eller ej. Hele proceduren udføres ved hjælp af bedøvelse ved brystvortens overflade indledningsvis og i skyllevæsken for at minimere ubehag, og niveauet af ubehag er generelt mindre end ved et mammografi.

En tidlig indikator for brystkræftrisiko kan være karakteristika for epitelcellerne fra skyllevæsken. Disse brystceller løsnes ved skylning, de placeres på et objektglas, og en patolog undersøger dem for abnormiteter. Ud over den patologiske diagnose kan der være subtile ændringer i cellernes udseende. Ændringer i størrelsen og formen af ​​cellekernen kan måles ved hjælp af et computerdrevet mikroskop, der har kvantitativ billedanalysesoftware. Forøgelser i nukleare areal, diameter og omkreds og mindre ensartet rundhed af kerner vides at være forbundet med brystkræft af højere grad. Den slags mål er også blevet målt i brystbiopsier, der enten var normale eller hyperplastiske, og de kvinder med større kerner i fuldstændigt godartede brystbiopsier var mere tilbøjelige til at udvikle brystkræft 1-33 år senere.

En faktor, der kan påvirke formen af ​​kerner i brystceller, er niveauet af oxidativ stress i brystet. Brystvæsken er meget rig på fedtstoffer eller lipider, og visse former for lipider oxideres let. NAF indeholder også vitaminer opnået fra frugt og grøntsager, der fungerer som antioxidanter for at stoppe lipidoxidation. For eksempel kan carotenoider reagere med skadelige oxidanter og danne oxiderede carotenoider. Vi vil derfor måle niveauer af én lipidperoxidationsmarkør og én oxideret carotenoid i NAF som markører for oxidativt stress. Vi vil også måle fedtsyreniveauer og niveauer af uoxiderede carotenoider. Vi vil derefter afgøre, om forskelle i sammensætningen af ​​NAF er relateret til målene for nuklear form lavet på brystceller.

NAF i brystet og blodet vil blive analyseret for kolesterol ved hjælp af spektrofotometriske kits. Fedtsyrer vil blive analyseret ved hjælp af gaskromatografi. I alt 8-isoprostaner vil blive analyseret med immunoassay-kits. Mikronæringsstoffer og vitaminer vil blive analyseret ved højtryksvæskekromatografi. Nuklear morfologi vil blive analyseret med et computerdrevet mikroskop. DNA-skader i brystceller vil blive analyseret ved hjælp af gelelektroforese af lyserede celler (comet assay). Statistiske analyser vil give os mulighed for at afgøre, om NAF og blodmålinger er relateret til hinanden og til de nukleare foranstaltninger.