Morfologia Nuclear de Células Mamárias em Lavagem Ductal

POR QUE O ESTUDO ESTÁ SENDO REALIZADO

Os fluidos de aspiração do mamilo (NAF) podem ser obtidos de mulheres de forma não invasiva, tornando as análises desse fluido relevantes para estudos de risco de câncer de mama. A variação interindividual para produtos de oxidação lipídica (um tipo de dano às gorduras) em NAF é mais de 100 vezes, e esses produtos de oxidação provavelmente têm um efeito tóxico nas células epiteliais da mama. Durante a lavagem ductal da mama, o NAF é primeiro aspirado e os ductos produtores de fluido são então submetidos a lavagem para obtenção de células epiteliais. As características nucleares (morfologia) dessas células podem então ser examinadas. A morfologia nuclear é um método quantitativo para observar mudanças sutis nas características nucleares, e essas medidas em biópsias de mama benignas demonstraram ter valor prognóstico para o risco de câncer de mama.

Este estudo exploratório ajudará a estabelecer a viabilidade de usar essas medidas como parâmetros em estudos de intervenção dietética. Como as diferenças nos níveis de oxidação lipídica no NAF são marcadamente grandes, é razoável acreditar que deve haver alguma influência na morfologia nuclear. Essas medidas também devem ser aplicáveis ​​a investigações que buscam examinar o impacto de certos polimorfismos genéticos e exposições ambientais em biomarcadores de estresse oxidativo e risco de câncer de mama.

Estudaremos mulheres que foram previamente diagnosticadas com doença proliferativa da mama. Essas mulheres podem ser boas candidatas para estudos de prevenção dietética, pois têm um risco um pouco maior de câncer de mama, recebem pouco além da cirurgia para tratamento e demonstraram ter níveis mais altos de oxidação lipídica na mama do que mulheres sem esse diagnóstico.

O QUE ESPERAMOS REALIZAR

Esperamos determinar a viabilidade de obter e analisar NAF e células epiteliais da mama de mulheres com doença proliferativa benigna da mama. Essas mulheres têm maior risco de câncer de mama, e a composição do NAF, que banha os ductos mamários, pode afetar as características morfológicas dos núcleos das células epiteliais da mama. Se os níveis de produtos da oxidação lipídica forem maiores em mulheres com núcleos grandes (um fator de risco para câncer de mama), intervenções que reduzam o estresse oxidativo e o risco de câncer podem ser planejadas no futuro.

Os objetivos são:

1. Determinar se os níveis de gorduras, gorduras danificadas ou oxidadas, vitaminas e vitaminas oxidadas ou danificadas (8-isoprostano, colesterol, ácidos graxos, tocoferóis, carotenóides e 2,6-ciclolicopeno-4,5-diol) podem ser quantificados em NAF de mama obtido antes da lavagem das mamas. Os níveis de NAF serão comparados aos do sangue. Essas medidas foram escolhidas com base em suas possíveis relações com a ingestão alimentar e com os níveis de estresse oxidativo, o que é relevante para estudos de intervenção. Tocoferóis e carotenóides são antioxidantes dietéticos, e certos ácidos graxos são oxidados mais facilmente do que outros. Tanto o 8-isoprostano quanto o 2,6-ciclolicopeno-4,5-diol parecem ser marcadores de estresse oxidativo.
2. Obter fluidos de lavagem da mama de mulheres com doença proliferativa da mama e caracterizar a morfologia nuclear das células epiteliais da mama no fluido de lavagem da mama. Vamos quantificar várias medidas comumente usadas em biópsias, incluindo diâmetro nuclear, circunferência, área, arredondamento e razão nuclear:área citoplasmática. Essas medidas demonstraram estar relacionadas ao risco de câncer de mama. Se houver células suficientes, a análise do dano oxidativo do DNA será feita usando o ensaio do cometa.
3. Examinar se a morfologia nuclear está associada a níveis de estresse oxidativo no NAF. Serão avaliadas as correlações com os níveis de 8-isoprostano, colesterol, ácidos graxos específicos, 2,6-ciclolicopeno-1,5-diol e micronutrientes lipossolúveis. A influência potencial da dieta, fatores demográficos e natureza do diagnóstico de biópsia anterior na morfologia nuclear também será examinada como um sub-objetivo em um esforço para entender melhor as diferenças entre as mulheres na morfologia nuclear das células epiteliais da lavagem ductal.

Os materiais coletados para fins de pesquisa serão:

Formulário de Consentimento Questionário de Estado de Saúde Questionário de Frequência Alimentar Altura e peso corporal Líquido aspirado do mamilo Líquido de lavagem mamária 10 ml Data da biópsia da amostra de sangue, diagnóstico e histórico de problemas médicos do prontuário médico

TAMANHO DA AMOSTRA

Desejava-se equipar nosso estudo para que as variáveis ​​de interesse pudessem ser determinadas dentro de um coeficiente de variação (CV) de 25%, com 90% de confiança. Sessenta indivíduos produziriam estimativas do nível médio de 8 das 9 variáveis ​​do estudo dentro de um CV de 25%, com 90% de confiança. A única exceção é a medida altamente variável de 8-isoprostano, cujo nível médio pode ser estimado dentro de um CV de 37%, com 90% de confiança.

COMO O ESTUDO SERÁ CONDUZIDO

Um total de 75 mulheres serão recrutadas para este estudo ao longo de aproximadamente 13 meses (dez meses do primeiro ano e três meses do segundo ano) por um clínico. Ela confirmará no prontuário do paciente o diagnóstico anterior de doença proliferativa da mama, obterá o tipo de doença mamária diagnosticada, há quanto tempo foi diagnosticada com precisão de mês e quaisquer problemas mamários ou de saúde que possam afetar os resultados da lavagem. Os participantes do estudo preencherão questionários, serão pesados ​​e medidos quanto à altura, doarão uma amostra de 10 ml de sangue e passarão por um procedimento de lavagem das mamas. Durante o procedimento de lavagem, o fluido do mamilo e o fluido de lavagem serão coletados.

A lavagem ductal da mama é um novo procedimento importante que pode ser usado para ajudar a determinar o risco de uma mulher ter câncer de mama. É um método diagnóstico atraente, pois está associado a muito pouco desconforto. No momento, ele é usado apenas em certas mulheres que são consideradas de alto risco para câncer de mama. Durante o procedimento de lavagem ductal, os dutos produtores de fluido devem primeiro ser identificados. Isso é feito primeiro liberando os dutos na superfície do mamilo dos plugues de queratina e, em seguida, a mulher usa a massagem para produzir fluido. Esse fluido, denominado fluido aspirado do mamilo (NAF), é o que banha os ductos mamários e será coletado para análise nesta proposta de projeto. Uma vez identificados os dutos que produzem NAF, o médico lava o duto. O fluido de lavagem lava as células da mama que podem ser avaliadas por um patologista para determinar se são normais ou não. Todo o procedimento é feito inicialmente com anestesia na superfície do mamilo e no fluido de lavagem para minimizar qualquer desconforto, e os níveis de desconforto geralmente são menores do que com uma mamografia.

Um indicador precoce do risco de câncer de mama pode ser as características das células epiteliais do fluido de lavagem. Essas células da mama são desalojadas após a lavagem, são colocadas em uma lâmina e um patologista as examina em busca de anormalidades. Além do diagnóstico patológico, pode haver mudanças sutis no aspecto das células. As alterações no tamanho e na forma do núcleo da célula podem ser medidas usando um microscópio controlado por computador com software de análise quantitativa de imagens. Sabe-se que aumentos na área nuclear, diâmetro e perímetro e arredondamento menos uniforme dos núcleos estão associados a cânceres de mama de grau superior. Esses tipos de medidas também foram medidos em biópsias de mama normais ou hiperplásicas, e aquelas mulheres com núcleos maiores em biópsias de mama completamente benignas tinham maior probabilidade de desenvolver câncer de mama 1 a 33 anos depois.

Um fator que pode afetar a forma dos núcleos nas células da mama é o nível de estresse oxidativo na mama. O fluido mamário é muito rico em gorduras, ou lipídios, e certos tipos de lipídios são facilmente oxidados. O NAF também contém vitaminas obtidas de frutas e vegetais que funcionam como antioxidantes para interromper a oxidação lipídica. Por exemplo, os carotenóides podem reagir com oxidantes nocivos para formar carotenóides oxidados. Portanto, mediremos os níveis de um marcador de peroxidação lipídica e um carotenóide oxidado em NAF como marcadores de estresse oxidativo. Também mediremos os níveis de ácidos graxos e os níveis de carotenóides não oxidados. Em seguida, determinaremos se as diferenças na composição do NAF estão relacionadas às medidas de formato nuclear feitas nas células da mama.

O NAF da mama e o sangue serão analisados ​​para colesterol usando kits espectrofotométricos. Os ácidos graxos serão analisados ​​por cromatografia gasosa. Os 8-isoprostanos totais serão analisados ​​por kits de imunoensaio. Micronutrientes e vitaminas serão analisados ​​por cromatografia líquida de alta pressão. A morfologia nuclear será analisada por um microscópio computadorizado. Danos no DNA em células mamárias serão analisados ​​por eletroforese em gel de células lisadas (ensaio do cometa). As análises estatísticas permitirão determinar se as medidas de NAF e de sangue estão relacionadas entre si e com as medidas nucleares.