Kernmorphologie von Brustzellen in duktaler Lavage

WARUM DIE STUDIE DURCHGEFÜHRT WIRD

Brustwarzenaspirationsflüssigkeiten (NAF) können Frauen nicht-invasiv entnommen werden, wodurch Analysen dieser Flüssigkeit für Studien zum Brustkrebsrisiko relevant werden. Die interindividuelle Variation für Lipidoxidationsprodukte (eine Art von Fettschädigung) bei NAF ist mehr als 100-fach, und diese Oxidationsprodukte haben wahrscheinlich eine toxische Wirkung auf die Brustepithelzellen. Während der Brustgangspülung wird zuerst NAF abgesaugt, und die Gänge, die Flüssigkeit produzieren, werden dann einer Spülung unterzogen, um Epithelzellen zu erhalten. Die Kernmerkmale (Morphologie) dieser Zellen können dann untersucht werden. Die Kernmorphologie ist eine quantitative Methode zur Beobachtung subtiler Veränderungen der Kernmerkmale, und diese Messungen bei gutartigen Brustbiopsien haben nachweislich einen prognostischen Wert für das Brustkrebsrisiko.

Diese explorative Studie wird dazu beitragen, die Durchführbarkeit der Verwendung dieser Maßnahmen als Endpunkte in Ernährungsinterventionsstudien festzustellen. Da die Unterschiede in den Lipidoxidationsniveaus in NAF bemerkenswert groß sind, ist es vernünftig anzunehmen, dass es einen gewissen Einfluss auf die Kernmorphologie geben muss. Diese Maßnahmen sollten auch auf Untersuchungen anwendbar sein, die darauf abzielen, die Auswirkungen bestimmter genetischer Polymorphismen und Umweltbelastungen auf Biomarker für oxidativen Stress und das Brustkrebsrisiko zu untersuchen.

Wir werden Frauen untersuchen, bei denen zuvor eine proliferative Brusterkrankung diagnostiziert wurde. Diese Frauen könnten gute Kandidaten für diätetische Präventionsstudien sein, da sie ein etwas erhöhtes Brustkrebsrisiko haben, wenig über eine Operation hinaus zur Behandlung erhalten und nachweislich eine höhere Lipidoxidation in der Brust aufweisen als Frauen ohne eine solche Diagnose.

WAS WIR HOFFEN ZU ERREICHEN

Wir hoffen, die Machbarkeit der Gewinnung und Analyse von NAF- und Brustepithelzellen von Frauen mit gutartiger proliferativer Brusterkrankung zu bestimmen. Diese Frauen haben ein erhöhtes Brustkrebsrisiko, und die Zusammensetzung des NAF, das die Brustgänge umspült, kann die morphologischen Merkmale der Kerne in den Brustepithelzellen beeinflussen. Wenn die Werte der Lipidoxidationsprodukte bei Frauen mit großen Kernen (einem Risikofaktor für Brustkrebs) höher sind, können in Zukunft Interventionen geplant werden, die oxidativen Stress und das Krebsrisiko reduzieren.

Die Ziele sind:

1. Bestimmung, ob der Gehalt an Fetten, beschädigten oder oxidierten Fetten, oxidierten oder beschädigten Vitaminen und Vitaminen (8-Isoprostan, Cholesterin, Fettsäuren, Tocopherole, Carotinoide und 2,6-Cyclolycopin-4,5-diol) in Brust-NAF quantifiziert werden kann vor der Brustspülung erhalten. Die NAF-Spiegel werden mit denen im Blut verglichen. Diese Maßnahmen wurden auf der Grundlage ihrer potenziellen Beziehungen zur Nahrungsaufnahme und zum oxidativen Stressniveau ausgewählt, was für Interventionsstudien relevant ist. Tocopherole und Carotinoide sind diätetische Antioxidantien, und bestimmte Fettsäuren werden leichter oxidiert als andere. Sowohl 8-Isoprostan als auch 2,6-Cyclolycopin-4,5-diol scheinen Marker für oxidativen Stress zu sein.
2. Um Brustspülflüssigkeiten von Frauen mit proliferativer Brusterkrankung zu erhalten und die Kernmorphologie von Brustepithelzellen in der Brustspülflüssigkeit zu charakterisieren. Wir werden verschiedene Maße quantifizieren, die üblicherweise bei Biopsien verwendet werden, einschließlich Kerndurchmesser, Umfang, Fläche, Rundheit und Kern: Zytoplasma-Flächenverhältnis. Es wurde gezeigt, dass diese Maßnahmen mit dem Brustkrebsrisiko zusammenhängen. Bei ausreichender Zellzahl erfolgt die Analyse auf oxidative DNA-Schäden mit dem Comet-Assay.
3. Es sollte untersucht werden, ob die Kernmorphologie mit dem Grad an oxidativem Stress in der NAF assoziiert ist. Korrelationen werden mit Gehalten von 8-Isoprostan, Cholesterin, spezifischen Fettsäuren, 2,6-Cyclolycopin-1,5-diol und fettlöslichen Mikronährstoffen bewertet. Der potenzielle Einfluss von Ernährung, demografischen Faktoren und der Art früherer Biopsiediagnosen auf die Kernmorphologie wird ebenfalls als Teilziel untersucht, um Unterschiede zwischen Frauen in der Kernmorphologie von Epithelzellen aus duktaler Lavage besser zu verstehen.

Die zu Forschungszwecken gesammelten Materialien sind:

Einverständniserklärung Fragebogen zum Gesundheitszustand Fragebogen zur Ernährungshäufigkeit Größe und Körpergewicht Brustwarzenabsaugflüssigkeit Brustspülflüssigkeit 10 ml Blutentnahme Biopsiedatum, Diagnose und Vorgeschichte medizinischer Probleme aus der Krankenakte

PROBENGRÖSSE

Es war erwünscht, unsere Studie so auszustatten, dass die interessierenden Variablen innerhalb eines Variationskoeffizienten (CV) von 25 % mit 90 %iger Sicherheit bestimmt werden können. 60 Probanden würden Schätzungen des mittleren Niveaus von 8 der 9 Studienvariablen innerhalb eines CV von 25 % mit 90 % Konfidenz ergeben. Die einzige Ausnahme ist das sehr variable 8-Isoprostan-Maß, dessen mittlerer Wert mit 90 %iger Sicherheit auf einen CV von 37 % geschätzt werden konnte.

WIE DIE STUDIE DURCHFÜHRT WIRD

Insgesamt 75 Frauen werden für diese Studie über etwa 13 Monate (zehn Monate in Jahr 1 und 3 Monate in Jahr 2) von einem Kliniker rekrutiert. Sie wird anhand der Patientenakte die frühere Diagnose einer proliferativen Brusterkrankung bestätigen, die Art der diagnostizierten Brusterkrankung erhalten, wie lange die Diagnose zurückliegt, auf den nächsten Monat genau, und alle Brust- oder Gesundheitsprobleme, die die Lavage-Ergebnisse beeinflussen könnten. Die Studienteilnehmerinnen werden Fragebögen ausfüllen, gewogen und ihre Größe gemessen werden, eine 10-ml-Blutprobe spenden und sich einer Brustspülung unterziehen. Während des Lavage-Verfahrens werden Brustwarzenflüssigkeit und die Lavage-Flüssigkeit gesammelt.

Die Brustgangspülung ist ein wichtiges neues Verfahren, das zur Bestimmung des Brustkrebsrisikos einer Frau beitragen kann. Sie ist eine attraktive diagnostische Methode, da sie mit sehr geringen Beschwerden verbunden ist. Derzeit wird es nur bei bestimmten Frauen angewendet, von denen angenommen wird, dass sie ein sehr hohes Risiko für Brustkrebs haben. Bei der duktalen Lavage müssen zunächst die flüssigkeitsproduzierenden Gänge identifiziert werden. Dies geschieht, indem zuerst die Kanäle an der Brustwarzenoberfläche von Keratinpfropfen befreit werden und eine Frau dann eine Massage verwendet, um Flüssigkeit zu produzieren. Diese Flüssigkeit, Nippelaspiratflüssigkeit (NAF) genannt, umspült die Milchgänge der Brust und wird für die Analyse in diesem vorgeschlagenen Projekt gesammelt. Sobald die Gänge, die NAF produzieren, identifiziert sind, spült der Arzt dann den Gang. Die Spülflüssigkeit wäscht Brustzellen aus, die dann von einem Pathologen untersucht werden können, um festzustellen, ob sie normal sind oder nicht. Das gesamte Verfahren wird zunächst mit Anästhetikum an der Brustwarzenoberfläche und in der Spülflüssigkeit durchgeführt, um jegliches Unbehagen zu minimieren, und das Ausmaß des Unbehagens ist im Allgemeinen geringer als bei einer Mammographie.

Ein früher Indikator für das Brustkrebsrisiko können die Eigenschaften der Epithelzellen aus der Spülflüssigkeit sein. Diese Brustzellen werden bei der Spülung entfernt, auf einen Objektträger gelegt und von einem Pathologen auf Anomalien untersucht. Über die pathologische Diagnose hinaus kann es subtile Veränderungen im Aussehen der Zellen geben. Veränderungen in der Größe und Form des Zellkerns können mit einem computergesteuerten Mikroskop gemessen werden, das über eine Software zur quantitativen Bildanalyse verfügt. Es ist bekannt, dass Vergrößerungen der Kernfläche, des Durchmessers und des Umfangs und eine weniger gleichmäßige Rundheit der Kerne mit Brustkrebs höheren Grades assoziiert sind. Diese Art von Messungen wurden auch bei Brustbiopsien gemessen, die entweder normal oder hyperplastisch waren, und Frauen mit größeren Kernen in vollständig gutartigen Brustbiopsien entwickelten 1-33 Jahre später mit größerer Wahrscheinlichkeit Brustkrebs.

Ein Faktor, der die Kernform in Brustzellen beeinflussen kann, ist der Grad an oxidativem Stress in der Brust. Die Brustflüssigkeit ist sehr reich an Fetten oder Lipiden, und bestimmte Arten von Lipiden werden leicht oxidiert. NAF enthält auch Vitamine aus Obst und Gemüse, die als Antioxidantien wirken, um die Lipidoxidation zu stoppen. Beispielsweise können Carotinoide mit schädlichen Oxidationsmitteln reagieren, um oxidierte Carotinoide zu bilden. Wir werden daher die Konzentrationen eines Lipidperoxidationsmarkers und eines oxidierten Carotinoids in NAF als Marker für oxidativen Stress messen. Wir werden auch den Fettsäurespiegel und den Gehalt an nicht oxidierten Carotinoiden messen. Wir werden dann bestimmen, ob Unterschiede in der Zusammensetzung des NAF mit den an Brustzellen vorgenommenen Messungen der Kernform zusammenhängen.

Der Brust-NAF und das Blut werden mit spektrophotometrischen Kits auf Cholesterin analysiert. Fettsäuren werden mittels Gaschromatographie analysiert. Die gesamten 8-Isoprostane werden mit Immunoassay-Kits analysiert. Mikronährstoffe und Vitamine werden mittels Hochdruckflüssigkeitschromatographie analysiert. Die Kernmorphologie wird durch ein computergesteuertes Mikroskop analysiert. DNA-Schäden in Brustzellen werden mittels Gelelektrophorese von lysierten Zellen (Comet Assay) analysiert. Anhand statistischer Analysen können wir feststellen, ob die NAF- und Blutmessungen miteinander und mit den nuklearen Messungen zusammenhängen.