Morfologia nucleare delle cellule mammarie nel lavaggio duttale

PERCHÉ LO STUDIO VIENE FATTO

I fluidi aspirati dal capezzolo del seno (NAF) possono essere ottenuti in modo non invasivo dalle donne, rendendo le analisi di questo fluido rilevanti per gli studi sul rischio di cancro al seno. La variazione interindividuale per i prodotti di ossidazione dei lipidi (un tipo di danno ai grassi) nella NAF è più di 100 volte, e questi prodotti di ossidazione possono avere un effetto tossico sulle cellule epiteliali del seno. Durante il lavaggio duttale del seno, la NAF viene prima aspirata e i dotti che producono fluido vengono quindi sottoposti a lavaggio per ottenere cellule epiteliali. Le caratteristiche nucleari (morfologia) di queste cellule possono quindi essere esaminate. La morfologia nucleare è un metodo quantitativo per osservare sottili cambiamenti nelle caratteristiche nucleari e queste misure nelle biopsie mammarie benigne hanno dimostrato di avere un valore prognostico per il rischio di cancro al seno.

Questo studio esplorativo contribuirà a stabilire la fattibilità dell'utilizzo di queste misure come endpoint negli studi di intervento dietetico. Poiché le differenze nei livelli di ossidazione dei lipidi nella NAF sono marcatamente grandi, è ragionevole ritenere che ci debba essere una certa influenza sulla morfologia nucleare. Queste misure dovrebbero essere applicabili anche alle indagini che cercano di esaminare l'impatto di alcuni polimorfismi genetici e delle esposizioni ambientali sui biomarcatori dello stress ossidativo e del rischio di cancro al seno.

Studieremo donne a cui è stata precedentemente diagnosticata una malattia proliferativa del seno. Queste donne possono essere buone candidate per gli studi di prevenzione alimentare poiché presentano un rischio leggermente aumentato di cancro al seno, ricevono poco oltre l'intervento chirurgico per il trattamento e hanno dimostrato di avere livelli più elevati di ossidazione dei lipidi nel seno rispetto alle donne senza tale diagnosi.

QUELLO CHE SPERIAMO DI REALIZZARE

Speriamo di determinare la fattibilità di ottenere e analizzare sia la NAF che le cellule epiteliali del seno da donne con malattia mammaria proliferativa benigna. Queste donne sono ad aumentato rischio di cancro al seno e la composizione del NAF, che bagna i dotti mammari, può influenzare le caratteristiche morfologiche dei nuclei nelle cellule epiteliali del seno. Se i livelli dei prodotti di ossidazione dei lipidi sono più elevati nelle donne con grandi nuclei (un fattore di rischio per il cancro al seno), in futuro potrebbero essere pianificati interventi che riducono lo stress ossidativo e il rischio di cancro.

Gli obiettivi sono:

1. Per determinare se i livelli di grassi, grassi danneggiati o ossidati, vitamine e vitamine ossidate o danneggiate (8-isoprostano, colesterolo, acidi grassi, tocoferoli, carotenoidi e 2,6-ciclolicopene-4,5-diolo) possono essere quantificati nella NAF mammaria ottenuto prima del lavaggio del seno. I livelli di NAF saranno confrontati con quelli nel sangue. Queste misure sono state scelte in base alle loro potenziali relazioni con l'assunzione dietetica e con i livelli di stress ossidativo, che è rilevante per gli studi di intervento. I tocoferoli e i carotenoidi sono antiossidanti alimentari e alcuni acidi grassi vengono ossidati più facilmente di altri. Sia l'8-isoprostano che il 2,6-ciclolicopene-4,5-diolo sembrano essere marcatori di stress ossidativo.
2. Per ottenere fluidi di lavaggio del seno da donne con malattia mammaria proliferativa e per caratterizzare la morfologia nucleare delle cellule epiteliali del seno nel liquido di lavaggio del seno. Quantificheremo varie misure comunemente utilizzate nelle biopsie tra cui diametro nucleare, circonferenza, area, rotondità e rapporto area nucleare: citoplasmatica. Queste misure hanno dimostrato di essere correlate al rischio di cancro al seno. Se ci sono cellule sufficienti, l'analisi del danno ossidativo al DNA verrà effettuata utilizzando il comet assay.
3. Esaminare se la morfologia nucleare è associata a livelli di stress ossidativo nella NAF. Verranno valutate le correlazioni con i livelli di 8-isoprostano, colesterolo, acidi grassi specifici, 2,6-ciclolicopene-1,5-diolo e micronutrienti liposolubili. La potenziale influenza della dieta, dei fattori demografici e della natura della precedente diagnosi bioptica sulla morfologia nucleare sarà anche esaminata come obiettivo secondario nel tentativo di comprendere meglio le differenze tra le donne nella morfologia nucleare delle cellule epiteliali dal lavaggio duttale.

I materiali raccolti per scopi di ricerca saranno:

Modulo di consenso Questionario sullo stato di salute Questionario sulla frequenza degli alimenti Altezza e peso corporeo Liquido aspirato dal capezzolo del seno Liquido del lavaggio del seno 10 ml Data della biopsia del campione di sangue, diagnosi e anamnesi dei problemi medici dalla cartella clinica

MISURA DI PROVA

Si è voluto attrezzare il nostro studio in modo che le variabili di interesse possano essere determinate entro un coefficiente di variazione (CV) del 25%, con una confidenza del 90%. Sessanta soggetti fornirebbero stime del livello medio di 8 delle 9 variabili dello studio entro un CV del 25%, con una confidenza del 90%. L'unica eccezione è la misura altamente variabile dell'8-isoprostano, il cui livello medio potrebbe essere stimato entro un CV del 37%, con una confidenza del 90%.

COME SARÀ CONDOTTO LO STUDIO

Un totale di 75 donne sarà reclutato per questo studio per circa 13 mesi (dieci mesi dell'anno 1 e 3 mesi dell'anno 2) da un medico. Confermerà dalla cartella clinica della paziente la precedente diagnosi di malattia proliferativa del seno, otterrà il tipo di malattia al seno diagnosticata, da quanto tempo è stata diagnosticata al mese più vicino e qualsiasi problema al seno o di salute che potrebbe influenzare i risultati del lavaggio. I soggetti dello studio compileranno questionari, saranno pesati e misurati per l'altezza, doneranno un campione di sangue da 10 ml e subiranno una procedura di lavaggio del seno. Durante la procedura di lavaggio, verranno raccolti il ​​fluido del capezzolo e il fluido di lavaggio.

Il lavaggio duttale del seno è una nuova importante procedura che può essere utilizzata per aiutare a determinare il rischio di cancro al seno di una donna. È un metodo diagnostico attraente poiché è associato a un disagio minimo. Al momento, viene utilizzato solo in alcune donne che si ritiene siano ad alto rischio di cancro al seno. Durante la procedura di lavaggio duttale, i dotti che producono fluido devono essere prima identificati. Questo viene fatto liberando prima i dotti sulla superficie del capezzolo dai tappi di cheratina, quindi una donna usa il massaggio per produrre fluido. Questo fluido, chiamato fluido aspirato dal capezzolo (NAF), è ciò che bagna i dotti mammari e sarà raccolto per l'analisi in questo progetto proposto. Una volta identificati i dotti che producono NAF, il medico lava il dotto. Il fluido di lavaggio lava via le cellule del seno che possono quindi essere valutate da un patologo per determinare se sono normali o meno. L'intera procedura viene eseguita utilizzando inizialmente un anestetico sulla superficie del capezzolo e nel fluido di lavaggio per ridurre al minimo qualsiasi disagio, e i livelli di disagio sono generalmente inferiori a quelli con una mammografia.

Un indicatore precoce del rischio di cancro al seno possono essere le caratteristiche delle cellule epiteliali del fluido di lavaggio. Queste cellule del seno vengono rimosse durante il lavaggio, vengono poste su un vetrino e un patologo le esamina per rilevare eventuali anomalie. Al di là della diagnosi patologica, potrebbero esserci sottili cambiamenti nell'aspetto delle cellule. I cambiamenti nelle dimensioni e nella forma del nucleo cellulare possono essere misurati utilizzando un microscopio computerizzato dotato di un software di analisi quantitativa delle immagini. È noto che aumenti dell'area nucleare, del diametro e del perimetro e una rotondità meno uniforme dei nuclei sono associati a tumori al seno di grado superiore. Questi tipi di misure sono stati misurati anche in biopsie mammarie normali o iperplastiche e quelle donne con nuclei più grandi in biopsie mammarie completamente benigne avevano maggiori probabilità di sviluppare il cancro al seno 1-33 anni dopo.

Un fattore che può influenzare la forma dei nuclei nelle cellule del seno è il livello di stress ossidativo nel seno. Il fluido mammario è molto ricco di grassi, o lipidi, e alcuni tipi di lipidi si ossidano facilmente. NAF contiene anche vitamine ottenute da frutta e verdura che funzionano come antiossidanti per fermare l'ossidazione dei lipidi. Ad esempio, i carotenoidi possono reagire con ossidanti nocivi per formare carotenoidi ossidati. Misureremo quindi i livelli di un marcatore di perossidazione lipidica e di un carotenoide ossidato in NAF come marcatori di stress ossidativo. Misureremo anche i livelli di acidi grassi ei livelli di carotenoidi non ossidati. Successivamente determineremo se le differenze nella composizione del NAF sono correlate alle misure di forma nucleare effettuate sulle cellule mammarie.

La NAF mammaria e il sangue saranno analizzati per il colesterolo utilizzando kit spettrofotometrici. Gli acidi grassi saranno analizzati mediante gascromatografia. Gli 8-isoprostani totali saranno analizzati mediante kit di immunodosaggio. Micronutrienti e vitamine saranno analizzati mediante cromatografia liquida ad alta pressione. La morfologia nucleare sarà analizzata mediante un microscopio computerizzato. Il danno al DNA nelle cellule mammarie sarà analizzato mediante elettroforesi su gel di cellule lisate (comet assay). Le analisi statistiche ci permetteranno di determinare se le misure del NAF e del sangue sono correlate tra loro e con le misure nucleari.