ECMO에서 신생아의 항체 분비 세포 및 사이토카인 프로필

특정 목표 기본 목표

1. ECMO를 사용하는 영아의 말초 혈액 샘플에서 면역글로불린 이소타입 특이적 ASC 및 면역활성 단백질(사이토카인 및 케모카인)의 상승, 정점 및 하락을 결정합니다.

보조 목표:

1. ASC 진단 분석을 위해 패혈증이 의심되는 영아의 혈액을 샘플링하는 가장 적절한 시간을 결정합니다.
2. ECMO로 이어지는 배양 음성 패혈증의 발병률을 특성화합니다.
3. 감염이 있거나 없는 영아에서 ASC의 면역글로불린 이소타입 특이적 수준을 결정합니다.
4. 병원체 특이적 ASC 분석 개발에 사용할 단핵 세포 및 혈장 아카이브를 구축합니다.

가설 ECMO를 사용하는 유아는 잠재적인 감염 가능성과 많은 외부 항원(혈액 제품, ECMO 회로)에 대한 노출로 인해 높은 ASC 반응과 고유한 사이토카인/케모카인 패턴을 가질 것입니다. 이들 중 상당 부분은 일상적인 혈액 배양으로 검출되지 않는 신생아 패혈증의 일반적인 원인에 대한 특이성을 가진 ASC를 가질 것입니다.

절차:

잔류 샘플은 ECMO에 대한 유아의 일상적인 절차에 사용되는 샘플에서 수집됩니다. 대략적인 부피/샘플은 0.5-0.8ml입니다. 표본은 실험실에서 잘 확립된 방법을 사용하여 처리됩니다. 간단히 말해서, PBMC는 Ficoll 구배를 통해 분리되고 -80C의 액체 질소에 보관됩니다. 충분한 수의 표본이 축적되면 ASC 수준 및 림프구 증식 활성의 일괄 분석이 수행됩니다. 면역 세포의 상세한 프로필 및 정량화는 CD3, CD4, CD8, CD27, CD38, CD45 및 HLA-DR에 대한 FACS(Fluorescent Activated Cell Sorter) 염색에 의해 결정됩니다. 비드 마이크로 어레이는 FACS에서도 수행되는 면역 활성 분자의 수준을 감지하는 데 사용됩니다. 검출된 단백질은 IL1β, IL2, IL4, IL5, IL6, IL7, IL8, IL10, IL12p70, IL13, IL17, GCSF, GMCSF, IFN-γ, MCP-1, MIP-1β, TNFα. ASC 절차는 한천 대신 막 표면 미세배양 플레이트를 사용하도록 변형된 Van de Verg에 의해 확립되었으며 결과는 수동 계산 대신 CTL 분석기로 판독되었습니다. LPA 분석은 오랫동안 확립된 기술을 사용합니다.