ECMO 新生儿的抗体分泌细胞和细胞因子谱

具体目标 主要目标

1. 确定 ECMO 婴儿外周血连续样本中免疫球蛋白同种型特异性 ASC 和免疫活性蛋白（细胞因子和趋化因子）的上升、峰值和下降。

次要目标：

1. 确定从疑似败血症婴儿中采集血液用于 ASC 诊断测定的最合适时间。
2. 表征导致 ECMO 的培养阴性败血症的发生率。
3. 确定感染和未感染婴儿的免疫球蛋白同种型特异性 ASC 水平。
4. 建立单核细胞和血浆档案，用于开发病原体特异性 ASC 检测。

由于潜在感染和暴露于许多外来抗原（血液制品、ECMO 回路），使用 ECMO 的婴儿将具有高 ASC 反应和独特的细胞因子/趋化因子模式。 其中很大一部分将具有 ASC，这些 ASC 对常规血培养无法检测到的新生儿败血症的常见原因具有特异性。

手续：

将从 ECMO 婴儿常规程序中使用的样本中收集残留样本。 大约体积/样本将为 0.5-0.8ml。 标本将使用我们实验室完善的方法进行处理。 简言之，PBMC's将通过Ficoll梯度分离并在-80℃的液氮中存档。 当积累足够数量的标本时，将进行 ASC 水平和淋巴细胞增殖活性的批量分析。 免疫细胞的详细概况和定量将通过 CD3、CD4、CD8、CD27、CD38、CD45 和 HLA-DR 的荧光激活细胞分选仪 (FACS) 染色来确定。 珠子微阵列将用于检测免疫活性分子的水平，这也是在 FACS 上完成的。 检测的蛋白质将包括但可能不限于以下：IL1β、IL2、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL10、IL12p70、IL13、IL17、GCSF、GMCSF、IFN-γ、MCP-1、 MIP-1β、TNFα。 ASC 程序是由 Van de Verg 建立的，修改为使用膜表面微培养板代替琼脂，结果由 CTL 分析仪读取而不是手​​动计数。 LPA 检测将使用长期建立的技术。