전립선 경요도 절제술에서 생검을 사용한 요로상피 조직 공학 (IMOPU)

생검의 조직학적 분석.

표준 착색을 사용한 조직학적 분석은 요로상피의 생존력을 평가합니다. 괴사의 징후(궤양, 요로 상피 구조의 파괴)가 기록됩니다.

생검의 면역조직학적 분석.

특정 항체를 사용한 면역조직학적 분석은 요로상피(케라틴, 유로플라킨), 평활근(평활근 액틴), 전립선(전립선 특이 항원)을 찾습니다.

생검의 RT-qPCR 분석.

RT-qPCR 분석은 요로상피(Keratin, Uroplakin), 평활근(평활근 액틴), 전립선(전립선 특이 항원)에 특이적인 RNA의 발현 수준(하우스키핑 유전자 RPLP0과 비교)을 측정합니다. 이 수준은 배양된 요로상피 세포와 비교됩니다.

적응된 배지를 사용한 생검 및 배양의 소화. 배양 조건의 최적화.

생검은 디스파제를 사용하여 소화될 것입니다. 세포는 콜라겐 코팅된 지지체에 파종되고 케라티노사이트 무혈청 배지(KSFM)를 사용하여 배양됩니다. 합류점에서 트립신 처리가 수행됩니다.

RT-qPCR(각 특정 마커의 발현 수준)은 배양 중 진화를 평가하기 위해 각 계대에서 실현됩니다.

배양된 세포의 조직학적 분석.

배양된 세포(결과 4)는 대조 위상 현미경 및 표준 현미경 착색으로 분석되어 형태, 세포 유형의 수 및 계대 전반에 걸친 진화를 평가합니다.

배양 세포의 면역 세포학적 분석.

배양 세포(결과 4)는 세포 유형(요로상피/평활근/전립선), 특정 마커의 발현 및 위치를 평가하기 위해 면역세포학에서 분석됩니다(결과 2).

배양된 세포의 RT-qPCR 분석.

배양된 세포(결과 4)는 배양 중 진화를 평가하기 위해 각 계대에서 RT-qPCR에서 분석됩니다. 요로상피(케라틴, 우로플라킨), 평활근(평활근 액틴), 전립선(전립선 특이 항원)에 특이적인 RNA의 발현 수준(하우스키핑 유전자 RPLP0과 비교)을 측정할 것입니다.

독창적인 알지네이트 동결건조 지지체 개발

알긴산나트륨 하이드로겔을 기반으로 한 독창적인 스캐폴드 개발 후 동결 건조하여 다공성 스폰지를 생성합니다(-20°C 및 -80°C에서).

구조분석, 불투수성, 봉제성..

다른 스캐폴드와 배양된 세포의 결합. 셀룰러화 스캐폴드의 배양.

이전에 배양되고 분석된 세포는 다른 스캐폴드에 연결됩니다.

• 콜라겐 스캐폴드

• 알지네이트 발판

  • 스프레이로 얻은 알기네이트 하이드로겔
  • 원래 알긴산염 동결 건조 스캐폴드(결과 4) 셀룰러화된 스캐폴드는 이전에 설명한 조건을 사용하여 최소 28일 동안 배양됩니다.

셀룰러화 스캐폴드의 조직학적 분석

연결 후, 세포화 스캐폴드(결과 9)는 최소 28일 동안 배양됩니다.

MTT assay를 이용하여 생존율을 측정합니다. 세포화된 스캐폴드의 외관, 위치, 외관 및 세포 조직을 평가하기 위해 표준 착색을 사용한 조직학적 분석을 수행할 것이다.

세포화 스캐폴드의 면역조직학적 분석

연결 후, 세포화 스캐폴드(결과 9)는 최소 28일 동안 배양됩니다.

특정 마커의 발현 및 위치를 평가하기 위해 면역조직학적 분석을 수행할 것이다(결과 2).

셀룰러화 스캐폴드의 RT-qPCR 분석

연결 후, 세포화 스캐폴드(결과 9)는 최소 28일 동안 배양됩니다.

RT-qPCR은 3차원 조건에서 배양하는 동안 진화를 평가하기 위해 수행됩니다. 요로상피(케라틴, 우로플라킨), 평활근(평활근 액틴), 전립선(전립선 특이 항원)에 특이적인 RNA의 발현 수준(하우스키핑 유전자 RPLP0과 비교)을 측정할 것입니다.

세포화 스캐폴드의 생물물리학적 분석

연결 후, 세포화 스캐폴드(결과 9)는 최소 28일 동안 배양됩니다.

셀룰러화 스캐폴드에 대한 생물물리학적 분석이 수행될 것입니다:

• 경상피 전기 저항(불침투성 장벽을 형성하는 세포 능력)
• 불투과성(세포화 스캐폴드가 방수 장벽을 형성하는 능력)
• 봉합 능력(세포화 스캐폴드를 조작하고 봉합하는 능력)
• 소변에 대한 저항성(소변의 화학적 공격에 저항하는 세포화된 스캐폴드의 능력)

누드 마우스에 세포화된 스캐폴드의 이식

세포화된 스캐폴드는 누드 마우스의 피하 위치에 이식될 것입니다. 생체내 인큐베이션은 적어도 28일 동안 수행될 것이다. 분석(조직학, 면역조직학, RT-qPCR)은 인큐베이션 28일 후에 수행되어 세포의 생존 및 세포화된 스캐폴드의 생체내 거동을 평가할 것입니다. 괴사, 신생혈관형성 및 염증의 징후가 기록될 것이다.

이식된 스캐폴드의 조직학적 분석

세포화된 스캐폴드의 외관, 위치, 외관 및 세포 조직을 평가하기 위해 이식된 스캐폴드(결과 14)에서 배양 28일 후에 조직학적 분석을 수행할 것이다.

MTT assay를 이용하여 생존율을 측정합니다. 섬유증의 징후가 나타납니다.

이식된 스캐폴드의 면역조직학적 분석

조직학적 분석은 이식된 스캐폴드에서 배양 28일 후에 수행될 것입니다(결과 14). 면역조직학적 분석은 특정 마커의 발현 및 위치를 평가하기 위해 수행될 것입니다(결과 2).

이식된 스캐폴드의 RT-qPCR 분석

RT-qPCR 분석은 생체 내 조건 동안 진화를 평가하기 위해 이식된 스캐폴드(결과 14)에서 배양 28일 후에 수행됩니다. 요로상피(케라틴, 우로플라킨), 평활근(평활근 액틴), 전립선(전립선 특이 항원)에 특이적인 RNA의 발현 수준(하우스키핑 유전자 RPLP0과 비교)을 측정할 것입니다.