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Ingegneria dei tessuti dell'urotelio utilizzando biopsie dalla resezione transuretrale della prostata (IMOPU)

4 ottobre 2018 aggiornato da: Central Hospital, Nancy, France

Ingegneria dei tessuti dell'urotelio utilizzando la mucosa della vescica dalla resezione transuretrale della prostata

Diverse condizioni cliniche possono richiedere l'aumento o la sostituzione della vescica urinaria. La vescica di ingegneria tissutale è stata valutata clinicamente ma non è raccomandata a causa di diversi effetti collaterali. Pertanto, esiste un reale interesse per lo sviluppo di un approccio rigenerativo con scaffold innovativi e trapianto di cellule.

I ricercatori propongono l'uso di cellule uroteliali ottenute mediante resezione trans-uretrale della prostata o della vescica (TURP) per ottenere un urotelio di ingegneria tissutale in associazione con diversi scaffold.

Panoramica dello studio

Stato

Non ancora reclutamento

Condizioni

Intervento / Trattamento

Procedura: Resezione transuretrale della prostata

Descrizione dettagliata

Le biopsie vescicali saranno ottenute durante la cistoscopia, conservate in terreno di coltura (DMEM®), digerite mediante dispasi e seminate su un supporto di coltura rivestito di collagene. Per la proliferazione verrà utilizzato il terreno privo di siero di cheratinociti (KSFM). Durante i passaggi verranno eseguite microscopia, immunoistochimica, estrazione dell'RNA, trascrizione inversa e reazione quantitativa a catena della polimerasi (RT-qPCR). Le condizioni di coltura cellulare saranno ottimizzate per migliorare la proliferazione ed evitare la perdita di differenziamento. I ricercatori svilupperanno scaffold basati su idrogel di alginato di sodio, seguiti da liofilizzazione per generare spugne porose (a -20°C e -80°C). Le cellule in coltura saranno associate a questi scaffold originali e ad altri scaffold, ad esempio idrogeli di alginato o collagene cellulare carrier (CCC), coltivati per 28 giorni e analizzati. L'aspetto istologico e immunoistologico degli scaffold cellularizzati sarà confrontato per valutare l'efficacia di ciascuno scaffold per l'ingegneria tissutale nell'urotelio.

Gli scaffold cellulari saranno studiati in vitro (resistenza elettrica transepiteliale, impermeabilità, capacità di essere cuciti, resistenza all'urina) e in vivo in localizzazione ectopica (localizzazione sottocutanea nei topi nudi) o in localizzazione ortotopica (aumento della vescica nei piccoli animali).

Tipo di studio

Osservativo

Iscrizione (Anticipato)

365

Contatti e Sedi

Questa sezione fornisce i recapiti di coloro che conducono lo studio e informazioni su dove viene condotto lo studio.

Contatto studio

Nome: Nicolas Berte, Dr
Numero di telefono: 00333673004195
Email: n.berte@chru-nancy.fr

Backup dei contatti dello studio

Nome: Jean-Louis Lemelle, PHD
Numero di telefono: 0033383154729
Email: jl.lemelle@chru-nancy.fr

Criteri di partecipazione

I ricercatori cercano persone che corrispondano a una certa descrizione, chiamata criteri di ammissibilità. Alcuni esempi di questi criteri sono le condizioni generali di salute di una persona o trattamenti precedenti.

Criteri di ammissibilità

Età idonea allo studio

18 anni e precedenti (Adulto, Adulto più anziano)

Accetta volontari sani

Sessi ammissibili allo studio

Maschio

Metodo di campionamento

Campione non probabilistico

Popolazione di studio

Paziente maschio che necessita di TURP per iperplasia prostatica benigna con peso prostatico valutato prima dell'intervento maggiore o uguale a 30 grammi

Descrizione

Criterio di inclusione:

Paziente che necessita di resezione transuretrale della prostata (TURP)
Peso della prostata (valutato mediante ecografia) maggiore o uguale a 30 grammi
Affiliazione ad un sistema previdenziale
Paziente maggiorenne
Paziente che riceve informazioni complete sull'organizzazione della ricerca senza opposizione all'uso di campioni biologici

Criteri di esclusione:

Paziente per il quale non viene realizzata TURP durante la procedura endoscopica
Paziente per il quale non viene eseguita alcuna resezione del collo vescicale
Paziente con peso prostatico stimato inferiore a 30 grammi
Paziente che si è opposto alla realizzazione dello studio

Piano di studio

Questa sezione fornisce i dettagli del piano di studio, compreso il modo in cui lo studio è progettato e ciò che lo studio sta misurando.

Come è strutturato lo studio?

Dettagli di progettazione

Modelli osservazionali: Altro
Prospettive temporali: Prospettiva

Cosa sta misurando lo studio?

Misure di risultato primarie

Misura del risultato	Misura Descrizione	Lasso di tempo
Analisi istologica della biopsia. Lasso di tempo: 6 mesi	L'analisi istologica con colorazione standard valuterà la vitalità dell'urotelio. Si noteranno segni di necrosi (ulcerazioni, distruzioni della struttura dell'urotelio).	6 mesi

Misure di risultato secondarie

Misura del risultato	Misura Descrizione	Lasso di tempo
Analisi immunoistologica della biopsia. Lasso di tempo: 6 mesi	L'analisi immunoistologica utilizzando anticorpi specifici localizzerà l'urotelio (cheratina, uroplakin), la muscolatura liscia (actina del muscolo liscio), la ghiandola prostatica (antigene prostatico specifico).	6 mesi
Analisi RT-qPCR della biopsia. Lasso di tempo: 6 mesi	L'analisi RT-qPCR misurerà il livello di espressione (rispetto al gene housekeeping RPLP0) dell'RNA specifico dell'urotelio (cheratina, uroplakin), della muscolatura liscia (actina del muscolo liscio), della ghiandola prostatica (antigene prostatico specifico). Questo livello sarà confrontato con cellule uroteliali in coltura.	6 mesi
Digestione della biopsia e coltura con terreno adattato. Ottimizzazione delle condizioni di coltura. Lasso di tempo: 12 mesi	La biopsia sarà digerita usando dispase. Le cellule saranno seminate su supporti ricoperti di collagene e coltivate usando Keratinocyte Serum Free Medium (KSFM). La tripsinazione sarà effettuata alla confluenza. RT-qPCR (livello di espressione di ogni marcatore specifico) sarà realizzato ad ogni passaggio per valutare l'evoluzione durante la coltura.	12 mesi
Analisi istologica delle cellule in coltura. Lasso di tempo: 12 mesi	Le cellule in coltura (Risultato 4) saranno analizzate in microscopia in fase di contrasto e con colorazione microscopica standard per valutarne la morfologia, il numero di tipi cellulari e la loro evoluzione durante i passaggi.	12 mesi
Analisi immunocitologica delle cellule in coltura. Lasso di tempo: 12 mesi	Le cellule in coltura (Risultato 4) saranno analizzate in immunocitologia per valutare il tipo di cellule (uroteliali / muscolo liscio / prostatico), l'espressione e la localizzazione di marcatori specifici (Risultato 2)	12 mesi
Analisi RT-qPCR delle cellule in coltura. Lasso di tempo: 12 mesi	Le cellule in coltura (Risultato 4) saranno analizzate in RT-qPCR ad ogni passaggio per valutare l'evoluzione durante la coltura. Verrà misurato il livello di espressione (rispetto al gene housekeeping RPLP0) dell'RNA specifico dell'urotelio (cheratina, uroplakin), della muscolatura liscia (actina del muscolo liscio), della ghiandola prostatica (antigene prostatico specifico).	12 mesi
Sviluppo di impalcature liofilizzate originali in alginato Lasso di tempo: 12 mesi	Sviluppo di un originale scaffold basato su idrogel di alginato di sodio, seguito da liofilizzazione per generare spugne porose (a -20°C e -80°C). Analisi della struttura, impermeabilità, possibilità di essere cucito..	12 mesi
Associazione delle cellule in coltura con diversi scaffold. Cultura di scaffold cellularizzati. Lasso di tempo: 36 mesi	Cellule precedentemente coltivate ed analizzate saranno associate a diversi scaffold. Impalcature di collagene Scaffold in alginato Idrogeli di alginato ottenuti a spruzzo Scaffold di alginato originale liofilizzato (Risultato 4) Gli scaffold cellularizzati saranno coltivati per almeno 28 giorni utilizzando le condizioni precedentemente descritte.	36 mesi
Analisi istologica di scaffold cellularizzati Lasso di tempo: 36 mesi	Dopo l'associazione, gli scaffold cellularizzati (Risultato 9) saranno coltivati per almeno 28 giorni. Verrà eseguito il tasso di sopravvivenza utilizzando il test MTT. Verrà eseguita un'analisi istologica utilizzando colorazioni standard per valutare l'aspetto dello scaffold cellularizzato, la localizzazione, l'aspetto e l'organizzazione delle cellule.	36 mesi
Analisi immunoistologica di scaffold cellularizzati Lasso di tempo: 36 mesi	Dopo l'associazione, gli scaffold cellularizzati (Risultato 9) saranno coltivati per almeno 28 giorni. Verrà eseguita un'analisi immunoistologica per valutare l'espressione e la localizzazione di marcatori specifici (Risultato 2)	36 mesi
Analisi RT-qPCR di scaffold cellularizzati Lasso di tempo: 36 mesi	Dopo l'associazione, gli scaffold cellularizzati (Risultato 9) saranno coltivati per almeno 28 giorni. RT-qPCR sarà eseguita per valutare l'evoluzione durante la coltura in condizioni tridimensionali. Verrà misurato il livello di espressione (rispetto al gene housekeeping RPLP0) dell'RNA specifico dell'urotelio (cheratina, uroplakin), della muscolatura liscia (actina del muscolo liscio), della ghiandola prostatica (antigene prostatico specifico).	36 mesi
Analisi biofisica di scaffold cellularizzati Lasso di tempo: 36 mesi	Dopo l'associazione, gli scaffold cellularizzati (Risultato 9) saranno coltivati per almeno 28 giorni. Verranno effettuate analisi biofisiche su scaffold cellularizzati: Resistenza elettrica transepiteliale (capacità cellulare di formare una barriera impermeabile) Impermeabilità (capacità dello scaffold cellularizzato di formare una barriera resistente all'acqua) Capacità di essere cucito (capacità dello scaffold cellularizzato di essere manipolato e cucito) Resistenza all'urina (capacità dello scaffold cellularizzato di resistere all'aggressione chimica dell'urina)	36 mesi
Impianto dell'impalcatura cellularizzata nei topi nudi Lasso di tempo: 12 mesi	Scaffold cellularizzati saranno impiantati in posizione sottocutanea in topi nudi. L'incubazione in vivo sarà effettuata per almeno 28 giorni. Le analisi (istologia, immunoistologia, RT-qPCR) saranno eseguite dopo 28 giorni di incubazione per valutare la sopravvivenza delle cellule e il comportamento dello scaffold cellularizzato in vivo. Si noteranno segni di necrosi, neoangiogenesi e infiammazione.	12 mesi
Analisi istologica di scaffold impiantati Lasso di tempo: 12 mesi	L'analisi istologica verrà eseguita dopo 28 giorni di incubazione su scaffold impiantati (Risultato 14) per valutare l'aspetto dello scaffold cellularizzato, la localizzazione, l'aspetto e l'organizzazione delle cellule. Verrà eseguito il tasso di sopravvivenza utilizzando il test MTT. Si noteranno segni di fibrosi.	12 mesi
Analisi immunoistologica di scaffold impiantati Lasso di tempo: 12 mesi	L'analisi istologica verrà eseguita dopo 28 giorni di incubazione su scaffold impiantati (Risultato 14) per valutare L'analisi immunoistologica verrà eseguita per valutare l'espressione e la posizione di marcatori specifici (Risultato 2)	12 mesi
Analisi RT-qPCR di scaffold impiantati Lasso di tempo: 12 mesi	L'analisi RT-qPCR verrà eseguita dopo 28 giorni di incubazione su scaffold impiantati (Risultato 14) per valutare l'evoluzione in condizioni in vivo. Verrà misurato il livello di espressione (rispetto al gene housekeeping RPLP0) dell'RNA specifico dell'urotelio (cheratina, uroplakin), della muscolatura liscia (actina del muscolo liscio), della ghiandola prostatica (antigene prostatico specifico).	12 mesi

Collaboratori e investigatori

Qui è dove troverai le persone e le organizzazioni coinvolte in questo studio.

Sponsor

Central Hospital, Nancy, France

Pubblicazioni e link utili

La persona responsabile dell'inserimento delle informazioni sullo studio fornisce volontariamente queste pubblicazioni. Questi possono riguardare qualsiasi cosa relativa allo studio.

Pubblicazioni generali

Studiare le date dei record

Queste date tengono traccia dell'avanzamento della registrazione dello studio e dell'invio dei risultati di sintesi a ClinicalTrials.gov. I record degli studi e i risultati riportati vengono esaminati dalla National Library of Medicine (NLM) per assicurarsi che soddisfino specifici standard di controllo della qualità prima di essere pubblicati sul sito Web pubblico.

Studia le date principali

Inizio studio (Anticipato)

1 ottobre 2018

Completamento primario (Anticipato)

1 ottobre 2024

Completamento dello studio (Anticipato)

1 ottobre 2026

Date di iscrizione allo studio

Primo inviato

17 settembre 2018

Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità

4 ottobre 2018

Primo Inserito (Effettivo)

9 ottobre 2018

Aggiornamenti dei record di studio

Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)