Urothelium Tissue Engineering käyttämällä biopsioita eturauhasen transuretraalisesta resektiosta (IMOPU)
Urothelium Tissue Engineering käyttämällä virtsarakon limakalvoa eturauhasen transuretraalisesta resektiosta
Erilaiset kliiniset sairaudet voivat vaatia virtsarakon lisäämistä tai korvaamista. Kudosmuokattu rakko on kliinisesti arvioitu, mutta sitä ei suositella erilaisten sivuvaikutusten vuoksi. Siten on olemassa todellinen kiinnostus kehittää regeneratiivista lähestymistapaa innovatiivisten tukirakenteiden ja solunsiirron avulla.
Tutkijat ehdottavat eturauhasen tai virtsarakon trans-urethral-resektiolla (TURP) saatujen uroteelisolujen käyttöä kudosmuokkauksen aikaansaamiseksi eri tukirakenteiden yhteydessä.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Virtsarakon biopsiat otetaan kystoskopian aikana, säilytetään elatusaineessa (DMEM®), hajotetaan dispaasilla ja kylvetään kollageenilla päällystetylle viljelyalustalle. Keratinocyte Serum Free Medium (KSFM) -alustaa käytetään proliferaatioon. Mikroskopia, immunohistokemia, RNA-uutto, käänteistranskriptio ja kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (RT-qPCR) suoritetaan siirrosten aikana. Soluviljelyolosuhteet optimoidaan lisääntymisen parantamiseksi ja erilaistumisen menettämisen välttämiseksi. Tutkijat kehittävät natriumalginaattihydrogeeleihin perustuvia telineitä, minkä jälkeen pakastekuivataan huokoisten sienien muodostamiseksi (-20 °C ja -80 °C). Viljellyt solut liitetään näihin alkuperäisiin tukirakenteisiin ja muihin tukirakenteisiin, esimerkiksi alginaattihydrogeeleihin tai kollageenisolukantajaan (CCC), viljellään 28 päivää ja analysoidaan. Sellulaaroitujen tukirakenteiden histologista ja immunohistologista ulkonäköä verrataan kunkin rakenteen tehokkuuden arvioimiseksi kudostekniikassa uroteelissä.
Sellulaaroituja telineitä tutkitaan in vitro (Transepithelial Electrical Resistance, läpäisemättömyys, ompelemiskyky, virtsankestävyys) ja in vivo kohdunulkoisessa paikassa (subkutaaninen sijainti nude-hiirillä) tai ortotooppisessa paikassa (rakon augmentaatio pienellä eläimellä).
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Odotettu)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskeluyhteys
- Nimi: Nicolas Berte, Dr
- Puhelinnumero: 00333673004195
- Sähköposti: n.berte@chru-nancy.fr
Tutki yhteystietojen varmuuskopiointi
- Nimi: Jean-Louis Lemelle, PHD
- Puhelinnumero: 0033383154729
- Sähköposti: jl.lemelle@chru-nancy.fr
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Potilas, joka tarvitsee eturauhasen transuretraalisen resektion (TURP)
- Eturauhasen paino (ultraäänitutkimuksella arvioituna) suurempi tai yhtä suuri kuin 30 grammaa
- Sosiaaliturvajärjestelmään kuuluminen
- Potilas, joka on täysi-ikäinen
- Potilas saa täydelliset tiedot tutkimusorganisaatiosta ilman, että se vastustaa biologisen näytteen käyttöä
Poissulkemiskriteerit:
- Potilas, jolle TURP:tä ei toteuteta endoskooppisen toimenpiteen aikana
- Potilas, jonka resektiota ei tehdä virtsarakon kaulassa
- Potilas, jonka eturauhasen paino on arvioitu alle 30 grammaa
- Potilas, joka vastusti tutkimuksen toteuttamista
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Havaintomallit: Muut
- Aikanäkymät: Tulevaisuuden
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Biopsian histologinen analyysi.
Aikaikkuna: 6 kuukautta
|
Histologinen analyysi vakiovärillä arvioi uroteelin elinkelpoisuuden.
Merkkejä nekroosista (haavaumat, uroteelin rakenteen tuhoutuminen) havaitaan.
|
6 kuukautta
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Biopsian immunohistologinen analyysi.
Aikaikkuna: 6 kuukautta
|
Spesifisiä vasta-aineita käyttävä immunohistologinen analyysi paikantaa uroteelin (keratiini, uroplakiini), sileän lihaksen (sileälihasaktiini), eturauhasen (eturauhasspesifinen antigeeni).
|
6 kuukautta
|
|
Biopsian RT-qPCR-analyysi.
Aikaikkuna: 6 kuukautta
|
RT-qPCR-analyysi mittaa uroteelille spesifisen RNA:n (keratiini, uroplakin), sileän lihaksen (sileälihaksen aktiini), eturauhasen (eturauhasspesifisen antigeenin) ilmentymistasoa (verrattuna taloudenhoitogeeniin RPLP0).
Tätä tasoa verrataan viljeltyihin uroteelisoluihin.
|
6 kuukautta
|
|
Biopsian ja viljelmän pilkkominen mukautetulla alustalla. Viljelyolosuhteiden optimointi.
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Biopsia pilkotaan dispaasilla. Solut kylvetään kollageenilla päällystetyille alustoille ja viljellään käyttämällä Keratinocyte Serum Free Mediumia (KSFM). Trypsinaatio tehdään yhtymäkohdassa. RT-qPCR (kunkin spesifisen markkerin ilmentymistaso) toteutetaan jokaisessa siirrossa evoluution arvioimiseksi viljelyn aikana. |
12 kuukautta
|
|
Viljeltyjen solujen histologinen analyysi.
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Viljellyt solut (tulos 4) analysoidaan kontrastifaasimikroskopialla ja tavanomaisella mikroskopiavärillä niiden morfologian, solutyyppien lukumäärän ja niiden evoluution arvioimiseksi siirrosten aikana.
|
12 kuukautta
|
|
Viljeltyjen solujen immunosytologinen analyysi.
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Viljellyt solut (tulos 4) analysoidaan immunosytologiassa solutyypin (uroteeli / sileä lihas / eturauhas), ilmentymisen ja spesifisten markkerien lokalisoinnin arvioimiseksi (tulos 2)
|
12 kuukautta
|
|
Viljeltyjen solujen RT-qPCR-analyysi.
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Viljellyt solut (tulos 4) analysoidaan RT-qPCR:llä jokaisessa siirrossa evoluution arvioimiseksi viljelyn aikana.
Mitataan uroteelille spesifisen RNA:n (keratiini, uroplakin), sileän lihaksen (Smooth lihas aktiini) ja eturauhasen (eturauhasspesifisen antigeenin) ilmentymistaso (verrattuna kotipitogeeniin RPLP0).
|
12 kuukautta
|
|
Alkuperäisen pakastekuivatun alginaattitelineen kehitys
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Alkuperäisen natriumalginaattihydrogeeleihin perustuvan telineen kehittäminen, jota seuraa pakastekuivaus huokoisten sienien muodostamiseksi (-20 °C ja -80 °C). Rakenteen analyysi, läpäisemättömyys, ompelemiskyky.. |
12 kuukautta
|
|
Viljeltyjen solujen yhdistäminen erilaisiin tukirakenteisiin. Sellulaaroitujen rakennustelineiden viljely.
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Aikaisemmin viljellyt ja analysoidut solut liitetään eri tukirakenteisiin.
|
36 kuukautta
|
|
Sellulaaroitujen telineiden histologinen analyysi
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Assosioitumisen jälkeen sellularisoituja tukirakenteita (tulos 9) viljellään vähintään 28 päivää. Eloonjäämisprosentti suoritetaan MTT-määrityksen avulla. Suoritetaan histologinen analyysi, jossa käytetään vakiovärejä, jotta voidaan arvioida solujen muodostuneen telineen ulkonäkö, sijainti, ulkonäkö ja solujen järjestys. |
36 kuukautta
|
|
Sellulaaroitujen rakennustelineiden immunohistologinen analyysi
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Assosioitumisen jälkeen sellularisoituja tukirakenteita (tulos 9) viljellään vähintään 28 päivää. Immunohistologinen analyysi suoritetaan spesifisten markkerien ilmentymisen ja sijainnin arvioimiseksi (tulos 2) |
36 kuukautta
|
|
Sellulaaroitujen tukirakenteiden RT-qPCR-analyysi
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Assosioitumisen jälkeen sellularisoituja tukirakenteita (tulos 9) viljellään vähintään 28 päivää. RT-qPCR suoritetaan evoluution arvioimiseksi viljelyn aikana kolmiulotteisissa olosuhteissa. Mitataan uroteelille spesifisen RNA:n (keratiini, uroplakin), sileän lihaksen (Smooth lihas aktiini) ja eturauhasen (eturauhasspesifisen antigeenin) ilmentymistaso (verrattuna kotipitogeeniin RPLP0). |
36 kuukautta
|
|
Sellulaaroitujen rakennustelineiden biofyysinen analyysi
Aikaikkuna: 36 kuukautta
|
Assosioitumisen jälkeen sellularisoituja tukirakenteita (tulos 9) viljellään vähintään 28 päivää. Biofysikaaliset analyysit sellularisoiduille telineille tehdään:
|
36 kuukautta
|
|
Sellulaaroituneen telineen istuttaminen nude-hiiriin
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Sellulaariset tukirakenteet istutetaan ihon alle Nude-hiirille.
In vivo -inkubointi suoritetaan vähintään 28 päivän ajan.
Analyysi (histologia, immunohistologia, RT-qPCR) suoritetaan 28 päivän inkubaation jälkeen solujen eloonjäämisen ja sellulaarisen tukirakenteen käyttäytymisen arvioimiseksi in vivo.
Merkkejä nekroosista, neoangiogeneesistä ja tulehduksesta havaitaan.
|
12 kuukautta
|
|
Implantoitujen telineiden histologinen analyysi
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Histologinen analyysi suoritetaan 28 päivän inkuboinnin jälkeen implantoiduilla telineillä (tulos 14) solujen ulkonäön, solujen sijainnin, ulkonäön ja järjestyksen arvioimiseksi. Eloonjäämisprosentti suoritetaan MTT-määrityksen avulla. Fibroosin merkit havaitaan. |
12 kuukautta
|
|
Implantoitujen telineiden immunohistologinen analyysi
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Histologinen analyysi suoritetaan 28 päivän inkuboinnin jälkeen implantoiduilla telineillä (tulos 14) arvioimiseksi. Immunohistologinen analyysi suoritetaan spesifisten merkkiaineiden ilmentymisen ja sijainnin arvioimiseksi (tulos 2).
|
12 kuukautta
|
|
Implantoitujen telineiden RT-qPCR-analyysi
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
RT-qPCR-analyysi suoritetaan 28 päivän inkuboinnin jälkeen implantoiduilla telineillä (tulos 14) evoluution arvioimiseksi in vivo -olosuhteissa.
Mitataan uroteelille spesifisen RNA:n (keratiini, uroplakin), sileän lihaksen (Smooth lihas aktiini) ja eturauhasen (eturauhasspesifisen antigeenin) ilmentymistaso (verrattuna kotipitogeeniin RPLP0).
|
12 kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Yleiset julkaisut
- Adamowicz J, Kowalczyk T, Drewa T. Tissue engineering of urinary bladder - current state of art and future perspectives. Cent European J Urol. 2013;66(2):202-6. doi: 10.5173/ceju.2013.02.art23. Epub 2013 Aug 13.
- Lam Van Ba O, Aharony S, Loutochin O, Corcos J. Bladder tissue engineering: a literature review. Adv Drug Deliv Rev. 2015 Mar;82-83:31-7. doi: 10.1016/j.addr.2014.11.013. Epub 2014 Nov 14.
- Garthwaite M, Hinley J, Cross W, Warwick RM, Ambrose A, Hardaker H, Eardley I, Southgate J. Use of donor bladder tissues for in vitro research. BJU Int. 2014 Jan;113(1):160-6. doi: 10.1111/bju.12285.
- Baker SC, Shabir S, Southgate J. Biomimetic urothelial tissue models for the in vitro evaluation of barrier physiology and bladder drug efficacy. Mol Pharm. 2014 Jul 7;11(7):1964-70. doi: 10.1021/mp500065m. Epub 2014 Apr 17.
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Odotettu)
Ensisijainen valmistuminen (Odotettu)
Opintojen valmistuminen (Odotettu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- PSS2017/IMOPU-BERTE/MS
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
IPD-suunnitelman kuvaus
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Yhdysvalloissa valmistettu ja sieltä viety tuote
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .