Ingeniería de tejidos de urotelio utilizando biopsias de resección transuretral de próstata (IMOPU)
Ingeniería de tejido de urotelio usando mucosa vesical de resección transuretral de próstata
Diferentes condiciones clínicas pueden requerir aumento o reemplazo de la vejiga urinaria. La vejiga de ingeniería tisular se ha evaluado clínicamente, pero no se recomienda debido a los diversos efectos secundarios. Por lo tanto, existe un interés real por el desarrollo de un enfoque regenerativo con andamios innovadores y trasplante de células.
Los investigadores proponen el uso de células uroteliales obtenidas mediante resección transuretral de próstata o vejiga (TURP) para obtener un urotelio de ingeniería tisular en asociación con diferentes andamios.
Descripción general del estudio
Estado
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
Se obtendrán biopsias vesicales durante la cistoscopia, conservadas en medio de cultivo (DMEM®), digeridas por dispasa y sembradas en soporte de cultivo recubierto de colágeno. Se usará medio libre de suero de queratinocitos (KSFM) para la proliferación. Durante los pases se realizarán microscopía, inmunohistoquímica, extracción de ARN, transcripción inversa y reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (RT-qPCR). Las condiciones de cultivo celular se optimizarán para mejorar la proliferación y evitar la pérdida de diferenciación. Los investigadores desarrollarán andamios basados en hidrogeles de alginato de sodio, seguidos de liofilización para generar esponjas porosas (a -20 °C y -80 °C). Las células cultivadas se asociarán a estos andamios originales ya otros andamios, por ejemplo hidrogeles de alginato o Collagen Cell Carrier (CCC), se cultivarán durante 28 días y se analizarán. Se comparará la apariencia histológica e inmunohistológica de andamios celularizados para evaluar la eficacia de cada andamio para la ingeniería de tejidos en urotelio.
Los andamios celularizados se estudiarán in vitro (resistencia eléctrica transepitelial, impermeabilidad, capacidad de sutura, resistencia a la orina) e in vivo en ubicación ectópica (ubicación subcutánea en ratones desnudos) o en ubicación ortotópica (aumento de vejiga en animales pequeños).
Tipo de estudio
Inscripción (Anticipado)
Contactos y Ubicaciones
Estudio Contacto
- Nombre: Nicolas Berte, Dr
- Número de teléfono: 00333673004195
- Correo electrónico: n.berte@chru-nancy.fr
Copia de seguridad de contactos de estudio
- Nombre: Jean-Louis Lemelle, PHD
- Número de teléfono: 0033383154729
- Correo electrónico: jl.lemelle@chru-nancy.fr
Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión:
- Paciente que necesita una resección transuretral de próstata (RTUP)
- Peso de la próstata (evaluado por ultrasonografía) mayor o igual a 30 gramos
- Afiliación a un sistema de seguridad social
- Paciente mayor de edad
- Paciente que recibe información completa sobre la organización de la investigación sin oposición al uso de muestras biológicas
Criterio de exclusión:
- Paciente para quien no se realiza RTUP durante el procedimiento endoscópico
- Paciente en quien no se realiza resección en el cuello vesical
- Paciente con peso prostático estimado inferior a 30 gramos
- Paciente que se opuso a la realización del estudio
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
- Modelos observacionales: Otro
- Perspectivas temporales: Futuro
¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Análisis histológico de la biopsia.
Periodo de tiempo: 6 meses
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El análisis histológico con coloración estándar evaluará la viabilidad del urotelio.
Se observarán signos de necrosis (ulceraciones, destrucciones de la estructura del urotelio).
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6 meses
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Análisis inmunohistológico de la biopsia.
Periodo de tiempo: 6 meses
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El análisis inmunohistológico mediante anticuerpos específicos localizará el urotelio (queratina, uroplaquina), el músculo liso (actina del músculo liso), la glándula prostática (antígeno prostático específico).
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6 meses
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Análisis RT-qPCR de biopsia.
Periodo de tiempo: 6 meses
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El análisis RT-qPCR medirá el nivel de expresión (en comparación con el gen de limpieza RPLP0) del ARN específico del urotelio (queratina, uroplaquina), el músculo liso (actina del músculo liso), la glándula prostática (antígeno prostático específico).
Este nivel se comparará con células uroteliales cultivadas.
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6 meses
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Digestión de la biopsia y cultivo con medio adaptado. Optimización de las condiciones de cultivo.
Periodo de tiempo: 12 meses
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La biopsia se digerirá usando dispase. Las células se sembrarán en soportes recubiertos de colágeno y se cultivarán utilizando medio libre de suero de queratinocitos (KSFM). La tripsinación se realizará en la confluencia. Se realizará RT-qPCR (nivel de expresión de cada marcador específico) en cada pase para evaluar la evolución durante el cultivo. |
12 meses
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Análisis histológico de las células cultivadas.
Periodo de tiempo: 12 meses
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Las células cultivadas (Resultado 4) se analizarán en microscopía de fase de contraste y con coloración de microscopía estándar para evaluar su morfología, el número de tipos celulares y su evolución a lo largo de los pases.
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12 meses
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Análisis inmunocitológico de las células cultivadas.
Periodo de tiempo: 12 meses
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Las células cultivadas (Resultado 4) se analizarán en inmunocitología para evaluar el tipo de células (uroteliales/músculo liso/prostáticas), la expresión y la localización de marcadores específicos (Resultado 2)
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12 meses
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Análisis RT-qPCR de las células cultivadas.
Periodo de tiempo: 12 meses
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Las células cultivadas (Resultado 4) se analizarán en RT-qPCR en cada paso para evaluar la evolución durante el cultivo.
Se medirá el nivel de expresión (en comparación con el gen de limpieza RPLP0) de ARN específico del urotelio (queratina, uroplaquina), el músculo liso (actina del músculo liso), la glándula prostática (antígeno prostático específico).
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12 meses
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Desarrollo del andamio original liofilizado de alginato
Periodo de tiempo: 12 meses
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Desarrollo de un andamio original a base de hidrogeles de alginato de sodio, seguido de liofilización para generar esponjas porosas (a -20°C y -80°C). Análisis de estructura, impermeabilidad, capacidad de ser cosido.. |
12 meses
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Asociación de las células cultivadas con diferentes andamios. Cultivo de andamios celularizados.
Periodo de tiempo: 36 meses
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Las células previamente cultivadas y analizadas se asociarán a diferentes andamios.
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36 meses
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Análisis histológico de andamios celularizados
Periodo de tiempo: 36 meses
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Después de la asociación, los andamios celularizados (Resultado 9) se cultivarán durante al menos 28 días. Se realizará la tasa de supervivencia utilizando el ensayo MTT. Se realizará un análisis histológico utilizando coloraciones estándar para evaluar la apariencia del andamio celularizado, la ubicación, la apariencia y la organización de las células. |
36 meses
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Análisis inmunohistológico de andamios celularizados
Periodo de tiempo: 36 meses
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Después de la asociación, los andamios celularizados (Resultado 9) se cultivarán durante al menos 28 días. Se realizará análisis inmunohistológico para evaluar la expresión y localización de marcadores específicos (Resultado 2) |
36 meses
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Análisis RT-qPCR de andamios celularizados
Periodo de tiempo: 36 meses
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Después de la asociación, los andamios celularizados (Resultado 9) se cultivarán durante al menos 28 días. Se realizará RT-qPCR para evaluar la evolución durante el cultivo en condiciones tridimensionales. Se medirá el nivel de expresión (en comparación con el gen de limpieza RPLP0) de ARN específico del urotelio (queratina, uroplaquina), el músculo liso (actina del músculo liso), la glándula prostática (antígeno prostático específico). |
36 meses
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Análisis biofísico de andamios celularizados
Periodo de tiempo: 36 meses
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Después de la asociación, los andamios celularizados (Resultado 9) se cultivarán durante al menos 28 días. Se realizarán análisis biofísicos sobre andamios celularizados:
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36 meses
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Implantación del andamio celularizado en ratones desnudos
Periodo de tiempo: 12 meses
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Los andamios celularizados se implantarán en una ubicación subcutánea en ratones desnudos.
La incubación in vivo se realizará durante al menos 28 días.
Los análisis (histología, inmunohistología, RT-qPCR) se realizarán después de 28 días de incubación para evaluar la supervivencia de las células y el comportamiento del andamio celularizado in vivo.
Se observarán signos de necrosis, neoangiogénesis e inflamación.
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12 meses
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Análisis histológico de andamios implantados
Periodo de tiempo: 12 meses
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El análisis histológico se realizará después de 28 días de incubación en andamios implantados (Resultado 14) para evaluar la apariencia del andamio celularizado, la ubicación, el aspecto y la organización de las células. Se realizará la tasa de supervivencia utilizando el ensayo MTT. Se observarán signos de fibrosis. |
12 meses
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Análisis inmunohistológico de andamios implantados
Periodo de tiempo: 12 meses
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Se realizará un análisis histológico después de 28 días de incubación en armazones implantados (Resultado 14) para evaluar Se realizará un análisis inmunohistológico para evaluar la expresión y ubicación de marcadores específicos (Resultado 2)
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12 meses
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Análisis RT-qPCR de andamios implantados
Periodo de tiempo: 12 meses
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El análisis de RT-qPCR se realizará después de 28 días de incubación en andamios implantados (Resultado 14) para evaluar la evolución durante las condiciones in vivo.
Se medirá el nivel de expresión (en comparación con el gen de limpieza RPLP0) de ARN específico del urotelio (queratina, uroplaquina), el músculo liso (actina del músculo liso), la glándula prostática (antígeno prostático específico).
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12 meses
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Colaboradores e Investigadores
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Publicaciones y enlaces útiles
Publicaciones Generales
- Adamowicz J, Kowalczyk T, Drewa T. Tissue engineering of urinary bladder - current state of art and future perspectives. Cent European J Urol. 2013;66(2):202-6. doi: 10.5173/ceju.2013.02.art23. Epub 2013 Aug 13.
- Lam Van Ba O, Aharony S, Loutochin O, Corcos J. Bladder tissue engineering: a literature review. Adv Drug Deliv Rev. 2015 Mar;82-83:31-7. doi: 10.1016/j.addr.2014.11.013. Epub 2014 Nov 14.
- Garthwaite M, Hinley J, Cross W, Warwick RM, Ambrose A, Hardaker H, Eardley I, Southgate J. Use of donor bladder tissues for in vitro research. BJU Int. 2014 Jan;113(1):160-6. doi: 10.1111/bju.12285.
- Baker SC, Shabir S, Southgate J. Biomimetic urothelial tissue models for the in vitro evaluation of barrier physiology and bladder drug efficacy. Mol Pharm. 2014 Jul 7;11(7):1964-70. doi: 10.1021/mp500065m. Epub 2014 Apr 17.
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Más información
Términos relacionados con este estudio
Términos MeSH relevantes adicionales
- Enfermedades del Sistema Nervioso
- Enfermedades urológicas
- Enfermedades de la vejiga urinaria
- Manifestaciones neurológicas
- Anomalías urogenitales
- Anomalías congénitas
- Malformaciones del Sistema Nervioso
- Enfermedades del pene
- Defectos del tubo neural
- Vejiga Urinaria Neurogénica
- Hipospadias
- Disrafismo Espinal
- Extrofia vesical
Otros números de identificación del estudio
- PSS2017/IMOPU-BERTE/MS
Plan de datos de participantes individuales (IPD)
¿Planea compartir datos de participantes individuales (IPD)?
Descripción del plan IPD
Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
producto fabricado y exportado desde los EE. UU.
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