Engenharia de tecidos de urotélio usando biópsias de ressecção transuretral da próstata (IMOPU)
Engenharia de tecidos de urotélio usando a mucosa da bexiga a partir da ressecção transuretral da próstata
Diferentes condições clínicas podem exigir aumento ou substituição da bexiga urinária. A bexiga engenheirada foi avaliada clinicamente, mas não é recomendada devido a diversos efeitos colaterais. Assim, há um interesse real no desenvolvimento de abordagens regenerativas com scaffolds inovadores e transplante de células.
Os pesquisadores propõem o uso de células uroteliais obtidas por Ressecção Transuretral da Próstata ou bexiga (TURP) para obter um urotélio de engenharia de tecido em associação com diferentes andaimes.
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Biópsias de bexiga serão obtidas durante a cistoscopia, conservadas em meio de cultura (DMEM®), digeridas por dispase e semeadas em suporte de cultura revestido com colágeno. Keratinocyte Serum Free Medium (KSFM) será usado para proliferação. Microscopia, imuno-histoquímica, extração de RNA, Transcrição Reversa e Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (RT-qPCR) serão realizados durante as passagens. As condições de cultura celular serão otimizadas para melhorar a proliferação e evitar a perda de diferenciação. Os investigadores desenvolverão scaffolds baseados em hidrogéis de alginato de sódio, seguidos de liofilização para gerar esponjas porosas (a -20°C e -80°C). Células cultivadas serão associadas a estes scaffolds originais e a outros scaffolds, por exemplo hidrogéis de alginato ou Collagen Cell Carrier (CCC), cultivadas por 28 dias e analisadas. A aparência histológica e imuno-histológica de scaffolds celularizados será comparada para avaliar a eficácia de cada scaffold para engenharia de tecidos em urotélio.
Estruturas celularizadas serão estudadas in vitro (resistência elétrica transepitelial, impermeabilidade, capacidade de sutura, resistência à urina) e in vivo em localização ectópica (localização subcutânea em camundongos Nude) ou em localização ortotópica (aumento da bexiga em pequenos animais).
Tipo de estudo
Inscrição (Antecipado)
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Nicolas Berte, Dr
- Número de telefone: 00333673004195
- E-mail: n.berte@chru-nancy.fr
Estude backup de contato
- Nome: Jean-Louis Lemelle, PHD
- Número de telefone: 0033383154729
- E-mail: jl.lemelle@chru-nancy.fr
Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- Paciente que necessita de Ressecção Transuretral da Próstata (RTU)
- Peso da próstata (avaliado por ultrassonografia) maior ou igual a 30 gramas
- Filiação a um sistema de segurança social
- Paciente maior de idade
- Paciente recebendo informações completas sobre a organização da pesquisa sem oposição ao uso de espécime biológico
Critério de exclusão:
- Paciente para quem nenhuma RTU é realizada durante o procedimento endoscópico
- Paciente para quem não é realizada ressecção no colo vesical
- Paciente com peso da próstata estimado abaixo de 30 gramas
- Paciente que se opôs à realização do estudo
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Modelos de observação: Outro
- Perspectivas de Tempo: Prospectivo
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Análise histológica da biópsia.
Prazo: 6 meses
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A análise histológica com coloração padrão avaliará a viabilidade do urotélio.
Sinais de necrose (ulcerações, destruição da estrutura do urotélio) serão notados.
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6 meses
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Análise imunohistológica de biópsia.
Prazo: 6 meses
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A análise imunohistológica com anticorpos específicos localizará o urotélio (Queratina, Uroplakin), o músculo liso (Actina do músculo liso), a glândula prostática (Antígeno prostático específico).
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6 meses
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Análise RT-qPCR da biópsia.
Prazo: 6 meses
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A análise RT-qPCR medirá o nível de expressão (em comparação com o gene de limpeza RPLP0) de RNA específico para urotélio (queratina, uroplaquina), músculo liso (actina do músculo liso), glândula prostática (antígeno específico da próstata).
Este nível será comparado com células uroteliais cultivadas.
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6 meses
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Digestão da biópsia e cultura com meio adaptado. Optimização das condições de cultura.
Prazo: 12 meses
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A biópsia será digerida usando dispase. As células serão semeadas em suportes revestidos de colágeno e cultivadas usando Keratinocyte Serum Free Medium (KSFM). A tripsinação será feita na confluência. RT-qPCR (nível de expressão de cada marcador específico) será realizado a cada passagem para avaliar a evolução durante o cultivo. |
12 meses
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Análise histológica das células cultivadas.
Prazo: 12 meses
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As células cultivadas (resultado 4) serão analisadas em microscopia de fase de contraste e com coloração microscópica padrão para avaliar sua morfologia, o número de tipos celulares e sua evolução ao longo das passagens.
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12 meses
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Análise imunocitológica das células cultivadas.
Prazo: 12 meses
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As células cultivadas (Resultado 4) serão analisadas em imunocitologia para avaliar o tipo de células (uroteliais/músculo liso/próstatas), a expressão e a localização de marcadores específicos (Resultado 2)
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12 meses
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Análise RT-qPCR das células cultivadas.
Prazo: 12 meses
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As células cultivadas (resultado 4) serão analisadas em RT-qPCR a cada passagem para avaliar a evolução durante a cultura.
Será medido o nível de expressão (em comparação com o gene housekeeping RPLP0) do RNA específico do urotélio (Queratina, Uroplakin), do músculo liso (Actina do músculo liso), da glândula prostática (Antígeno específico da próstata).
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12 meses
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Desenvolvimento de andaime liofilizado de alginato original
Prazo: 12 meses
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Desenvolvimento de um scaffold original baseado em hidrogéis de alginato de sódio, seguido de liofilização para gerar esponjas porosas (a -20°C e -80°C). Análise de estrutura, impermeabilidade, capacidade de ser costurado.. |
12 meses
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Associação das células cultivadas com diferentes scaffolds. Cultura de scaffolds celularizados.
Prazo: 36 meses
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Células previamente cultivadas e analisadas serão associadas a diferentes scaffolds.
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36 meses
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Análise histológica de scaffolds celularizados
Prazo: 36 meses
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Após a associação, scaffolds celularizados (resultado 9) serão cultivados por pelo menos 28 dias. A taxa de sobrevivência usando o ensaio MTT será realizada. A análise histológica usando colorações padrão será realizada para avaliar a aparência do scaffold celularizado, a localização, a aparência e a organização das células. |
36 meses
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Análise imunohistológica de scaffolds celularizados
Prazo: 36 meses
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Após a associação, scaffolds celularizados (resultado 9) serão cultivados por pelo menos 28 dias. A análise imunohistológica será realizada para avaliar a expressão e localização de marcadores específicos (Resultado 2) |
36 meses
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Análise RT-qPCR de andaimes celularizados
Prazo: 36 meses
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Após a associação, scaffolds celularizados (resultado 9) serão cultivados por pelo menos 28 dias. RT-qPCR será realizado para avaliar a evolução durante a cultura em condições tridimensionais. Será medido o nível de expressão (em comparação com o gene housekeeping RPLP0) do RNA específico do urotélio (Queratina, Uroplakin), do músculo liso (Actina do músculo liso), da glândula prostática (Antígeno específico da próstata). |
36 meses
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Análise biofísica de scaffolds celularizados
Prazo: 36 meses
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Após a associação, scaffolds celularizados (resultado 9) serão cultivados por pelo menos 28 dias. A análise biofísica em scaffolds celularizados será feita:
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36 meses
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Implantação do andaime celularizado em camundongos nus
Prazo: 12 meses
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Scaffolds celularizados serão implantados em localização subcutânea em camundongos Nude.
A incubação in vivo será feita durante pelo menos 28 dias.
Análises (histologia, imuno-histologia, RT-qPCR) serão realizadas após 28 dias de incubação para avaliar a sobrevivência das células e o comportamento do scaffold celularizado in vivo.
Sinais de necrose, neoangiogênese e inflamação serão notados.
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12 meses
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Análise histológica de scaffolds implantados
Prazo: 12 meses
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A análise histológica será realizada após 28 dias de incubação nos scaffolds implantados (Outcome 14) para avaliar o aspecto do scaffold celularizado, a localização, o aspecto e a organização das células. A taxa de sobrevivência usando o ensaio MTT será realizada. Sinais de fibrose serão notados. |
12 meses
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Análise imunohistológica de scaffolds implantados
Prazo: 12 meses
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A análise histológica será realizada após 28 dias de incubação em scaffolds implantados (Resultado 14) para avaliar A análise imuno-histológica será realizada para avaliar a expressão e localização de marcadores específicos (Resultado 2)
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12 meses
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Análise RT-qPCR de andaimes implantados
Prazo: 12 meses
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A análise RT-qPCR será realizada após 28 dias de incubação em andaimes implantados (resultado 14) para avaliar a evolução durante as condições in vivo.
Será medido o nível de expressão (em comparação com o gene housekeeping RPLP0) do RNA específico do urotélio (Queratina, Uroplakin), do músculo liso (Actina do músculo liso), da glândula prostática (Antígeno específico da próstata).
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12 meses
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Adamowicz J, Kowalczyk T, Drewa T. Tissue engineering of urinary bladder - current state of art and future perspectives. Cent European J Urol. 2013;66(2):202-6. doi: 10.5173/ceju.2013.02.art23. Epub 2013 Aug 13.
- Lam Van Ba O, Aharony S, Loutochin O, Corcos J. Bladder tissue engineering: a literature review. Adv Drug Deliv Rev. 2015 Mar;82-83:31-7. doi: 10.1016/j.addr.2014.11.013. Epub 2014 Nov 14.
- Garthwaite M, Hinley J, Cross W, Warwick RM, Ambrose A, Hardaker H, Eardley I, Southgate J. Use of donor bladder tissues for in vitro research. BJU Int. 2014 Jan;113(1):160-6. doi: 10.1111/bju.12285.
- Baker SC, Shabir S, Southgate J. Biomimetic urothelial tissue models for the in vitro evaluation of barrier physiology and bladder drug efficacy. Mol Pharm. 2014 Jul 7;11(7):1964-70. doi: 10.1021/mp500065m. Epub 2014 Apr 17.
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Antecipado)
Conclusão Primária (Antecipado)
Conclusão do estudo (Antecipado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- PSS2017/IMOPU-BERTE/MS
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Descrição do plano IPD
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
produto fabricado e exportado dos EUA
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