Urothelium Tissue Engineering ved hjælp af biopsier fra transurethral resektion af prostata (IMOPU)
Urothelium Tissue Engineering ved hjælp af blæreslimhinde fra transurethral resektion af prostata
Forskellige kliniske tilstande kan kræve urinblæreforstørrelse eller -erstatning. Vævsmanipuleret blære er blevet klinisk evalueret, men anbefales ikke på grund af forskellige bivirkninger. Der er således en reel interesse for udvikling af regenerativ tilgang med innovative stilladser og celletransplantation.
Efterforskerne foreslår brugen af urotheliale celler opnået ved trans-urethral resektion af prostata eller blære (TURP) for at opnå et vævsmanipuleret urothelium i forbindelse med forskellige stilladser.
Studieoversigt
Status
Intervention / Behandling
Detaljeret beskrivelse
Blærebiopsier vil blive opnået under cystoskopi, konserveret i dyrkningsmedium (DMEM®), fordøjet ved dispase og sået på kollagenbelagt kulturstøtte. Keratinocyt Serum Free Medium (KSFM) vil blive brugt til spredning. Mikroskopi, immunhistokemi, RNA-ekstraktion, omvendt transkription og kvantitativ polymerasekædereaktion (RT-qPCR) vil blive udført under passager. Cellekulturbetingelser vil blive optimeret for at forbedre proliferation og undgå tab af differentiering. Efterforskerne vil udvikle stilladser baseret på natriumalginathydrogeler efterfulgt af frysetørring for at generere porøse svampe (ved -20°C og -80°C). Dyrkede celler vil blive associeret med disse originale stilladser og til andre stilladser, for eksempel alginathydrogeler eller Collagen Cell Carrier (CCC), dyrket i 28 dage og analyseret. Histologisk og immunhistologisk udseende af cellulariserede stilladser vil blive sammenlignet for at vurdere effektiviteten af hvert stillads til vævsmanipulation i urothelium.
Cellulariserede stilladser vil blive undersøgt in vitro (transepitelial elektrisk modstand, impermeabilitet, evne til at blive syet, resistens over for urin) og in vivo i ektopisk placering (subkutan placering i nøgne mus) eller i ortotopisk placering (blæreforstørrelse hos små dyr).
Undersøgelsestype
Tilmelding (Forventet)
Kontakter og lokationer
Studiekontakt
- Navn: Nicolas Berte, Dr
- Telefonnummer: 00333673004195
- E-mail: n.berte@chru-nancy.fr
Undersøgelse Kontakt Backup
- Navn: Jean-Louis Lemelle, PHD
- Telefonnummer: 0033383154729
- E-mail: jl.lemelle@chru-nancy.fr
Deltagelseskriterier
Berettigelseskriterier
Aldre berettiget til at studere
Tager imod sunde frivillige
Køn, der er berettiget til at studere
Prøveudtagningsmetode
Studiebefolkning
Beskrivelse
Inklusionskriterier:
- Patient, der har behov for en transurethral resektion af prostata (TURP)
- Vægt af prostata (bedømt ved ultralyd) større end eller lig med 30 gram
- Tilslutning til et socialt sikringssystem
- Patient over myndig alder
- Patient modtager fuldstændig information om forskningsorganisation uden modstand mod brugen af biologiske prøver
Ekskluderingskriterier:
- Patient, for hvem der ikke realiseres TURP under endoskopisk procedure
- Patient, for hvem der ikke er foretaget resektion på blærehalsen
- Patient med prostatavægt estimeret under 30 gram
- Patient, der modsatte sig realiseringen af undersøgelsen
Studieplan
Hvordan er undersøgelsen tilrettelagt?
Design detaljer
- Observationsmodeller: Andet
- Tidsperspektiver: Fremadrettet
Hvad måler undersøgelsen?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Histologisk analyse af biopsi.
Tidsramme: 6 måneder
|
Histologisk analyse med standardfarvning vil vurdere levedygtigheden af urothelium.
Tegn på nekrose (ulcerationer, ødelæggelse af urothelium struktur) vil blive noteret.
|
6 måneder
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Immunhistologisk analyse af biopsi.
Tidsramme: 6 måneder
|
Immunohistologisk analyse ved hjælp af specifikke antistoffer vil lokalisere urothelium (Keratin, Uroplakin), den glatte muskel (Smooth muscle actin), prostatakirtlen (Prostataspecifikt antigen).
|
6 måneder
|
|
RT-qPCR analyse af biopsi.
Tidsramme: 6 måneder
|
RT-qPCR-analyse vil måle ekspressionsniveauet (sammenlignet med husholdningsgenet RPLP0) af RNA, der er specifikt for urothelium (Keratin, Uroplakin), den glatte muskel (Smooth muscle actin), prostatakirtlen (Prostataspecifikt antigen).
Dette niveau vil blive sammenlignet med dyrkede urotelceller.
|
6 måneder
|
|
Fordøjelse af biopsien og kultur med tilpasset medium. Optimering af kulturforhold.
Tidsramme: 12 måneder
|
Biopsien vil blive fordøjet ved hjælp af dispase. Celler vil blive sået på kollagenbelagte understøtninger og dyrket ved hjælp af Keratinocyte Serum Free Medium (KSFM). Trypsinering vil blive udført ved sammenløb. RT-qPCR (ekspressionsniveau for hver specifik markør) vil blive realiseret ved hver passage for at vurdere udviklingen under dyrkning. |
12 måneder
|
|
Histologisk analyse af de dyrkede celler.
Tidsramme: 12 måneder
|
Dyrkede celler (resultat 4) vil blive analyseret i kontrastfasemikroskopi og med standard mikroskopifarvning for at vurdere deres morfologi, antallet af cellulære typer og deres udvikling gennem passager.
|
12 måneder
|
|
Immunocytologisk analyse af de dyrkede celler.
Tidsramme: 12 måneder
|
Dyrkede celler (udfald 4) vil blive analyseret i immunocytologi for at vurdere typen af celler (urothelial / glat muskulatur / prostata), ekspressionen og lokaliseringen af specifikke markører (udfald 2)
|
12 måneder
|
|
RT-qPCR-analyse af de dyrkede celler.
Tidsramme: 12 måneder
|
Dyrkede celler (resultat 4) vil blive analyseret i RT-qPCR ved hver passage for at vurdere udviklingen under dyrkning.
Ekspressionsniveauet (sammenlignet med husholdningsgenet RPLP0) af RNA, der er specifikt for urothelium (Keratin, Uroplakin), den glatte muskel (Smooth muscle actin), prostatakirtlen (Prostataspecifikt antigen) vil blive målt.
|
12 måneder
|
|
Udvikling af originalt alginat frysetørret stillads
Tidsramme: 12 måneder
|
Udvikling af et originalt stillads baseret på natriumalginathydrogeler, efterfulgt af frysetørring for at generere porøse svampe (ved -20°C og -80°C). Analyse af struktur, uigennemtrængelighed, evne til at blive syet.. |
12 måneder
|
|
Sammenslutning af de dyrkede celler med forskellige stilladser. Kultur af cellulariserede stilladser.
Tidsramme: 36 måneder
|
Tidligere dyrkede og analyserede celler vil blive forbundet med forskellige stilladser.
|
36 måneder
|
|
Histologisk analyse af cellulariserede stilladser
Tidsramme: 36 måneder
|
Efter association vil cellulariserede stilladser (resultat 9) blive dyrket i mindst 28 dage. Overlevelsesrate ved hjælp af MTT-assay vil blive udført. Histologisk analyse ved hjælp af standardfarver vil blive udført for at evaluere udseendet af det cellulariserede stillads, placeringen, udseendet og organiseringen af cellerne. |
36 måneder
|
|
Immunhistologisk analyse af cellulariserede stilladser
Tidsramme: 36 måneder
|
Efter association vil cellulariserede stilladser (resultat 9) blive dyrket i mindst 28 dage. Immunohistologisk analyse vil blive udført for at evaluere ekspressionen og placeringen af specifikke markører (resultat 2) |
36 måneder
|
|
RT-qPCR-analyse af cellulariserede stilladser
Tidsramme: 36 måneder
|
Efter association vil cellulariserede stilladser (resultat 9) blive dyrket i mindst 28 dage. RT-qPCR vil blive udført for at vurdere udvikling under dyrkning i 3-dimensionelle forhold. Ekspressionsniveauet (sammenlignet med husholdningsgenet RPLP0) af RNA, der er specifikt for urothelium (Keratin, Uroplakin), den glatte muskel (Smooth muscle actin), prostatakirtlen (Prostataspecifikt antigen) vil blive målt. |
36 måneder
|
|
Biofysisk analyse af cellulariserede stilladser
Tidsramme: 36 måneder
|
Efter association vil cellulariserede stilladser (resultat 9) blive dyrket i mindst 28 dage. Biofysisk analyse på cellulariserede stilladser vil blive udført:
|
36 måneder
|
|
Implantation af det cellulariserede stillads i nøgne mus
Tidsramme: 12 måneder
|
Cellulariserede stilladser vil blive implanteret på subkutan placering i nøgne mus.
Inkubation in vivo vil blive udført i mindst 28 dage.
Analyse (histologi, immunhistologi, RT-qPCR) vil blive udført efter 28 dages inkubation for at vurdere cellernes overlevelse og opførselen af det cellulariserede stillads in vivo.
Tegn på nekrose, neoangiogenese og inflammation vil blive noteret.
|
12 måneder
|
|
Histologisk analyse af implanterede stilladser
Tidsramme: 12 måneder
|
Histologisk analyse vil blive udført efter 28 dages inkubation på implanterede stilladser (Resultat 14) for at evaluere udseendet af det cellulariserede stillads, placeringen, udseendet og organiseringen af cellerne. Overlevelsesrate ved hjælp af MTT-assay vil blive udført. Tegn på fibrose vil blive bemærket. |
12 måneder
|
|
Immunhistologisk analyse af implanterede stilladser
Tidsramme: 12 måneder
|
Histologisk analyse vil blive udført efter 28 dages inkubation på implanterede stilladser (resultat 14) for at evaluere Immunohistologisk analyse vil blive udført for at evaluere ekspression og placering af specifikke markører (resultat 2)
|
12 måneder
|
|
RT-qPCR-analyse af implanterede stilladser
Tidsramme: 12 måneder
|
RT-qPCR-analyse vil blive udført efter 28 dages inkubation på implanterede stilladser (resultat 14) for at vurdere udviklingen under in vivo-betingelser.
Ekspressionsniveauet (sammenlignet med husholdningsgenet RPLP0) af RNA, der er specifikt for urothelium (Keratin, Uroplakin), den glatte muskel (Smooth muscle actin), prostatakirtlen (Prostataspecifikt antigen) vil blive målt.
|
12 måneder
|
Samarbejdspartnere og efterforskere
Sponsor
Publikationer og nyttige links
Generelle publikationer
- Adamowicz J, Kowalczyk T, Drewa T. Tissue engineering of urinary bladder - current state of art and future perspectives. Cent European J Urol. 2013;66(2):202-6. doi: 10.5173/ceju.2013.02.art23. Epub 2013 Aug 13.
- Lam Van Ba O, Aharony S, Loutochin O, Corcos J. Bladder tissue engineering: a literature review. Adv Drug Deliv Rev. 2015 Mar;82-83:31-7. doi: 10.1016/j.addr.2014.11.013. Epub 2014 Nov 14.
- Garthwaite M, Hinley J, Cross W, Warwick RM, Ambrose A, Hardaker H, Eardley I, Southgate J. Use of donor bladder tissues for in vitro research. BJU Int. 2014 Jan;113(1):160-6. doi: 10.1111/bju.12285.
- Baker SC, Shabir S, Southgate J. Biomimetic urothelial tissue models for the in vitro evaluation of barrier physiology and bladder drug efficacy. Mol Pharm. 2014 Jul 7;11(7):1964-70. doi: 10.1021/mp500065m. Epub 2014 Apr 17.
Datoer for undersøgelser
Studer store datoer
Studiestart (Forventet)
Primær færdiggørelse (Forventet)
Studieafslutning (Forventet)
Datoer for studieregistrering
Først indsendt
Først indsendt, der opfyldte QC-kriterier
Først opslået (Faktiske)
Opdateringer af undersøgelsesjournaler
Sidste opdatering sendt (Faktiske)
Sidste opdatering indsendt, der opfyldte kvalitetskontrolkriterier
Sidst verificeret
Mere information
Begreber relateret til denne undersøgelse
Yderligere relevante MeSH-vilkår
Andre undersøgelses-id-numre
- PSS2017/IMOPU-BERTE/MS
Plan for individuelle deltagerdata (IPD)
Planlægger du at dele individuelle deltagerdata (IPD)?
IPD-planbeskrivelse
Lægemiddel- og udstyrsoplysninger, undersøgelsesdokumenter
Studerer et amerikansk FDA-reguleret lægemiddelprodukt
Studerer et amerikansk FDA-reguleret enhedsprodukt
produkt fremstillet i og eksporteret fra U.S.A.
Disse oplysninger blev hentet direkte fra webstedet clinicaltrials.gov uden ændringer. Hvis du har nogen anmodninger om at ændre, fjerne eller opdatere dine undersøgelsesoplysninger, bedes du kontakte register@clinicaltrials.gov. Så snart en ændring er implementeret på clinicaltrials.gov, vil denne også blive opdateret automatisk på vores hjemmeside .