주변 전자기 방사선에 대한 새로운 장치의 검증

연구에 등록된 정상적인 건강한 남성은 장치를 사용하기 전에 정액 표본을 제공하도록 요청받을 것입니다. 샘플은 최소 48-72시간의 금욕으로 생산됩니다. 또한 피험자는 가짜 Qi-Shield 또는 Qi-Shield 장치를 맹목적으로 할당하고 8주 동안 장치를 사용하도록 지시합니다. 피험자는 0, 4 및 8주 간격으로 정액 샘플을 제공합니다. .

그룹 1 연구 대상자는 모조 Qi-Shield 장치를 제공받는 반면 그룹 2 연구 대상자는 실제 Qi-Shield 장치를 제공받습니다. 각 사용자에게는 여행 중에 장치를 보관할 수 있는 작은 휴대용 가방이 제공됩니다. 참가자는 제조업체 지침에 따라 8주 동안 장치를 3미터 범위 내에 두는 것이 좋습니다.

정액 분석 모든 표본은 48-72시간의 금욕 후 남성학 실험실에서 자위행위로 채취됩니다. 샘플은 추가 처리 전에 37C에서 15-20분 동안 완전히 액화되도록 허용됩니다. 완전한 액화 후, 자동 LensHooke™X1 PRO 정액 품질 분석기(Bonraybio Co., Ltd)를 사용하여 정액 분석을 수행하여 정자 농도 및 운동성, 진행성 운동성을 결정합니다(Agarwal et al., 2019). 운동성이 <25%인 경우 생존력은 에오신-니그로신 염색으로 결정됩니다. 생 정액의 도말은 WHO, 5판 가이드라인에 설명된 엄격한 기준에 따라 정자 형태를 평가하기 위해 Diff-Quik 키트(Baxter Healthcare Corporation, Inc., McGaw Park, IL)로 염색됩니다.

백혈구 측정 사정액의 원형 세포 농도가 >1 X 백만/mL이거나 고전력 필드당 >5 원형 세포인 경우, 샘플은 백혈구정자증(예: >1 X 백만 백혈구/mL)에 대해 테스트됩니다. 이것은 퍼옥시다제 또는 Endtz 테스트에 의해 확인됩니다.

산화 환원 전위 측정 ORP는 환원제(또는 항산화제)에서 산화제로의 전자 이동을 측정합니다. ORP는 밀리볼트(mV) 단위로 측정됩니다. 현재 연구에서 ORP는 새로운 갈바노스타트 기반 기술인 MiOXSYS 시스템(Aytu Bioscience, Englewood, CO)을 사용하여 측정됩니다. 간단히 말해 30µL의 액화 정액이 MiOXSYS 센서에 로드됩니다. 센서가 MiOXSYS 분석기에 삽입됩니다. 정적 ORP(sORP)는 mV로 측정되며 생물학적 시스템에서 총 산화제와 환원제 사이의 기존 균형을 통합 측정한 것입니다. 데이터는 정자 농도로 정규화됩니다. ORP는 mV/백만 정자/mL로 표시됩니다.

DNA 단편화 DNA 단편화는 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제-매개 dUTP 닉-엔드 라벨링 분석(TUNEL 분석)을 통해 평가될 것이다. 간단히 말해서, 2백만 개의 정자를 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척하고 3.7% 파라포름알데히드에 재현탁합니다. 각 공여자에 대해 총 2개의 분취량(A 및 B)이 사용되며, 하나는 ORP 측정용이고 다른 하나는 정자 DNA 단편화 측정용입니다. 이들은 4C에서 30-60분 동안 얼음 위에 놓입니다. 이후 파라포름알데히드를 제거하기 위해 정자를 다시 세척한 후 70% 얼음처럼 차가운 에탄올에 재현탁하여 분석 시점까지 -20C에 보관한다.

정자 DNA 단편화는 Apo-DirectTM 키트(Pharmingen, San Diego, CA)와 함께 TUNEL 분석을 사용하여 평가됩니다. 제조업체가 제공한 양성 및 음성 키트 컨트롤과 과산화수소 컨트롤로 처리하여 준비된 양성 테스트가 각 실행에 포함됩니다. 에탄올을 제거하기 위해 PBS로 두 번째 세척한 후 정자 알갱이를 37C에서 60분 동안 새로 준비한 염색 용액 50 μL에 재현탁합니다. 염색 용액에는 말단 데옥시트랜스퍼라제(TdT) 효소, TdT 반응 완충액, 플루오레세인 이소티오시네이트 태그 데옥시우리딘 삼인산 뉴클레오티드(FITC-dUTP) 및 증류수가 포함되어 있습니다. 모든 표본을 추가로 헹굼 완충액으로 세척하고 0.5mL의 요오드화 프로피듐/RNase 용액에 재현탁하고 30분 동안 배양한 다음 유세포 분석을 수행합니다.

BD C6 Acuri 세포측정 분석: 표지된 정자의 모든 형광 신호는 유동 세포측정기 BD Accuri 유동 세포측정기(Becton Dickinson, San Jose, CA)로 분석됩니다. 약 10,000개의 정자가 각 분석에 대해 <100 세포/초의 느린 유속으로 검사됩니다. 레이저 여기는 20mW에서 고체 청색 상태 레이저에 의해 공급되는 488nm의 2개 파장과 14.7mW 다이오드 적색 레이저에 의해 구동되는 640nm에서 제공됩니다. 녹색 형광(480-530nm)은 FL-1 채널에서 측정되고 적색 형광(640nm)은 FL-2 채널에서 측정됩니다. 양성 세포(TUNEL-양성)의 백분율은 유세포 분석기 소프트웨어를 사용하여 계산됩니다.

Proteomic 분석 각 그룹에서 수집된 개별 샘플은 백혈구를 특이적으로 제거하기 위해 65% 퍼콜 구배를 받게 됩니다. 정액 샘플은 PBS로 세 번 세척됩니다. 상청액이 제거되면 정자는 단백분해효소 억제제 칵테일이 포함된 RIPA(radio-immunoprecipitation assay) 용해 완충액에 용해됩니다. 정자가 완전히 용해된 후 BCA(bicinchoninic acid) 키트를 사용하여 단백질 농도를 결정하고 SDS-Page 1D 겔 전기영동을 사용하여 동량의 단백질을 분획합니다. 분리된 밴드는 단일 쿠마시 블루 스테인드 1D 젤에서 절단되어 분석됩니다. 밴드는 트립신으로 세척, 환원, 알킬화 및 소화됩니다. 다이제스트는 모세관 컬럼 LC-탠덤 MS 및 인간 참조 서열 데이터베이스에 대해 검색된 CID 스펙트럼으로 분리됩니다.

기능적 주석 및 강화 분석은 GO Term Finder, GO Term Mapper, UniProt, STRAP(Software Tools for Researching Annotations of Proteins), Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery(DAVID)와 같이 공개적으로 이용 가능한 생물정보학 주석 도구 및 데이터베이스를 사용하여 수행됩니다. (http://david.niaid.nih.gov) 및 Ingenuity® Systems의 IPA(Ingenuity Pathway Analysis)와 같은 독점 소프트웨어 패키지는 proteomic에서 파생된 많은 단백질 목록에 대한 합의 기반의 포괄적인 기능 컨텍스트를 얻는 데 사용됩니다. 공부하다. 데이터는 알려지고 예측된 단백질-단백질 상호 작용의 생물학적 데이터베이스 및 웹 리소스인 STRING(상호작용 유전자/단백질 검색 도구)의 대상이 됩니다. 이것은 생식 기능과 관련된 중요한 단백질을 식별하는 데 도움이 될 것입니다.

데이터 분석 모든 데이터는 MedCalc 소프트웨어(V. 17.8; MedCalc 소프트웨어, Ostend, 벨기에). 분포가 정규이면 대응 t-검정이 사용됩니다. 반면 Wilcoxon 부호 순위 테스트는 정규 분포를 따르지 않는 매개변수에 사용됩니다. 각 실험에 대해 20개의 샘플을 기반으로 하는 쌍체 T-검정 비교의 경우 변동 계수가 20% 이하인 매개변수에 대해 검정력이 90% 이상이어야 합니다.