결핵 생존 가능성 지역 간 연구 및 생물학적 테스트에 대한 합의 (TBVISA)

폐결핵(TB) 환자가 진단 및 치료를 위해 입원할 때 전파 방지를 위해 격리 조치가 의무화된다. 권장 사항은 환자가 더 이상 감염되지 않을 때까지 격리를 유지하는 것이며, 이는 호흡기 검체의 배양이 음성이 될 때 확인됩니다(배양 전환). 항생제 투여 후 배양 전환까지 걸리는 시간은 약제감수성결핵 환자의 경우 평균 1개월이지만 5~30%의 경우 2개월 이상, 다제내성결핵의 경우 6개월까지 소요될 수 있다.

호흡기 검체에서 간균의 현미경 검사는 주로 대리 마커로 사용되지만 간균 염색은 살아있는 간균과 죽은 간균을 구별하지 못하기 때문에 양성 도말의 해석은 오해의 소지가 있습니다. 치료 1~2개월 후, 간균은 살아있는 동안 죽은 것으로 간주될 수 있으므로 격리 조치가 잘못 중단됩니다. 반대로, 간균은 치료에 의해 이미 죽었고 환자가 부적절하게 격리되어 있는 동안 생존 가능한 것으로 간주될 수 있습니다.

오해의 소지가 있는 결과를 극복하기 위해 결핵의 병원체인 Mycobacterium tuberculosis(Mtb)에 대한 생존 바이오마커를 개발하려는 시도가 있었습니다. RNA 또는 DNA를 사용한 연구는 설득력 있는 결과를 제공했지만 세계 대부분의 지역에서 비용이 저렴하지 않습니다. 플루오레세인 프로브를 사용하는 것이 가장 쉽지만 연구 결과가 상충되거나 치료 시작 후 짧은 기간 동안만 평가되었습니다.

따라서 우리는 이전에 산업 환경 병원체의 검출에 사용되었던 살아있는 것과 죽은 간균을 구별할 수 있는 형광 염색인 Live/Dead® BacLight™ Bacterial viability test(Invitrogen, Biocentric, France)를 평가했습니다. 간단히 말해서, 테스트는 DNA에 결합하지만 특히 세포질 막에 침투하는 SYTO-9 및 프로피디움오다이드(PI) 형광 염료를 사용하여 박테리아를 시각화할 수 있도록 허용합니다. SYTO-9는 생존 여부에 관계없이 모든 간균에 침투하는 반면 PI는 막이 손상된 세포. 결과적으로 생존 가능한 박테리아는 PI에 불투과성이며 형광 현미경 하에서 녹색으로 나타나는 SYTO-9로 인해 형광을 발하는 반면, 죽은 박테리아는 형광 염료로 표시되어 빨간색으로 나타납니다.

우리는 먼저 키트를 마이코박테리아학에 적용하고 체외 실험에서 테스트와 배양 결과의 일치성을 평가했습니다. 그런 다음 우리는 관찰 전향적 연구에서 항결핵 치료를 받는 환자의 배양 결과를 예측하는 정확성을 보여주었습니다. 생존력 테스트는 치료 후 첫 2개월 동안 모든 배양 양성 샘플을 정확하게 예측했습니다.

현재 연구의 목적은 치료 중인 스미어 양성 폐결핵 환자의 대규모 코호트에서 생존 테스트의 유용성을 다중심 연구에서 확인하고 테스트가 의사가 병원 환경에서 격리 조치를 중단하는 데 도움이 될 수 있는지 확인하는 것입니다.

검사가 빠르고(검사의 경우 1시간 미만, 배양의 경우 중앙값 23일) 수행하기 쉽기 때문에 의사가 불필요한 배양을 피하면서 임상 환경에서 격리를 유지하는 데 도움이 될 것입니다. 테스트 비용도 저렴하기 때문에(시약의 경우 <1 €) 이 문제는 자원이 제한되어 있고 문화를 사용할 수 없는 국가에서 특히 유용할 수 있습니다.