Estudo Inter-Regional de Viabilidade da Tuberculose e Acordo sobre Testes Biológicos (TBVISA)

Quando pacientes com tuberculose pulmonar (TB) são internados para diagnóstico e tratamento, medidas de isolamento são obrigatórias para prevenir a transmissão. As recomendações são para manter o isolamento até que os pacientes não sejam mais infecciosos, o que é verificado quando as culturas de amostras respiratórias tornam-se negativas (conversão de cultura). Após a administração de antibióticos, o tempo médio de conversão da cultura é de um mês para pacientes com TB suscetível a medicamentos, mas 5% a 30% dos casos requerem mais de dois meses e até 6 meses podem ser necessários para TB multirresistente (MDR).

O exame microscópico de bacilos em amostras respiratórias é usado principalmente como um marcador substituto, mas como a coloração de bacilos não diferencia bacilos vivos de mortos, a interpretação de esfregaços positivos é enganosa. Após 1-2 meses de tratamento, os bacilos podem ser considerados mortos enquanto ainda estão vivos e as medidas de isolamento são interrompidas erroneamente. Por outro lado, os bacilos podem ser considerados viáveis ​​quando já foram mortos pelo tratamento e os pacientes mantidos em isolamento inadequado.

Para superar os resultados enganosos, foram feitas tentativas para desenvolver biomarcadores de viabilidade para Mycobacterium tuberculosis (Mtb), o agente da tuberculose. Estudos usando RNA ou DNA deram resultados convincentes, mas seu custo não é acessível na maior parte do mundo. Aqueles que usam sondas de fluoresceína são mais fáceis, mas os estudos mostraram resultados conflitantes ou foram avaliados apenas por um curto período de tempo após o início da terapia.

Assim, avaliamos uma coloração fluorescente capaz de diferenciar bacilos mortos de vivos, anteriormente utilizada para detecção de patógenos ambientais industriais - o teste de viabilidade bacteriana Live/Dead® BacLight™ (Invitrogen, Biocentric, França). Resumidamente, o teste permite a visualização da bactéria por meio dos corantes fluorescentes SYTO-9 e iodeto de propídio (PI), que se ligam ao DNA, mas penetram especificamente na membrana citoplasmática: o SYTO-9 penetra em todos os bacilos, viáveis ​​ou não, enquanto o PI penetra apenas em células com membrana danificada. Consequentemente, as bactérias viáveis ​​são impermeáveis ​​ao PI e apenas fluorescem devido ao SYTO-9 aparecer em verde sob o microscópio fluorescente, enquanto as bactérias mortas são marcadas por ambos os corantes fluorescentes e aparecem em vermelho.

Primeiramente adaptamos o kit para micobacteriologia e avaliamos, em experimentos in vitro, a concordância do teste com os resultados da cultura. Então, mostramos em um estudo prospectivo observacional sua acurácia para prever resultados de cultura em pacientes submetidos à terapia antituberculosa: o teste de viabilidade previu corretamente todas as amostras positivas de cultura nos primeiros dois meses após o tratamento.

O objetivo do presente estudo é confirmar em um estudo multicêntrico a utilidade de nosso teste de viabilidade em grande coorte de pacientes com baciloscopia positiva em tratamento de tuberculose pulmonar e determinar se o teste pode ajudar os médicos a descontinuar as medidas de isolamento em ambiente hospitalar.

Como o teste é rápido (menos de 1 h para o teste versus uma média de 23 dias para cultura) e fácil de realizar, seria útil ajudar os médicos a manter o isolamento em ambientes clínicos, evitando culturas desnecessárias. Uma vez que o teste também é barato (<1 € para reagentes), esta questão pode ser particularmente valiosa em países com recursos limitados e onde as culturas não estão disponíveis.