TuBerkulose-levedygtighed Tværregional undersøgelse og aftale om biologiske tests (TBVISA)

Når patienter med lungetuberkulose (TB) er indlagt til diagnose og behandling, er isolationsforanstaltninger obligatoriske for at forhindre smitte. Anbefalinger er at opretholde isolation, indtil patienterne ikke længere er smitsomme, hvilket konstateres, når kulturer af respiratoriske prøver bliver negative (kulturkonvertering). Efter administration af antibiotika er den gennemsnitlige tid til kulturkonvertering en måned for patienter med lægemiddelfølsom TB, men 5%-30% tilfælde kræver mere end to måneder og op til 6 måneder kan være påkrævet for multiresistent (MDR)-TB.

Mikroskopisk undersøgelse af baciller i luftvejsprøver bruges hovedsageligt som en surrogatmarkør, men fordi farvning af baciller ikke adskiller sig levende fra døde baciller, er fortolkningen af ​​positive udstrygninger misvisende. Efter 1-2 måneders behandling kan baciller betragtes som døde, mens de stadig er i live, og isolationstiltag er dermed fejlagtigt afbrudt. Omvendt kan baciller betragtes som levedygtige, mens de allerede er blevet dræbt af behandlingen, og patienter holdes utilstrækkeligt isoleret.

For at overvinde de vildledende resultater er der blevet gjort forsøg på at udvikle levedygtighedsbiomarkører for Mycobacterium tuberculosis (Mtb), tuberkulose-agenset. Undersøgelser med RNA eller DNA gav overbevisende resultater, men deres omkostninger er ikke overkommelige i det meste af verden. De, der bruger fluorescein-prober, er nemmest, men undersøgelser har vist enten modstridende resultater eller er kun blevet evalueret i en kort periode efter påbegyndelse af behandlingen.

Således evaluerede vi en fluorescerende farvning, der var i stand til at differentiere døde baciller fra levende, som tidligere blev brugt til påvisning af industrielle miljøpatogener - Live/Dead® BacLight™ bakteriel levedygtighedstest (Invitrogen, Biocentric, Frankrig). Kort fortalt giver testen mulighed for at visualisere bakterierne ved hjælp af SYTO-9 og propidiumiodid (PI) fluorescerende farvestoffer, som både binder til DNA, men penetrerer specifikt cytoplasmatisk membran: SYTO-9 trænger ind i alle baciller, enten levedygtige eller ej, hvorimod PI kun trænger ind i celler med beskadiget membran. Følgelig er de levedygtige bakterier uigennemtrængelige for PI og kun fluorescerede på grund af SYTO-9, der fremstår grønt under det fluorescerende mikroskop, hvorimod døde bakterier er mærket af både fluorescerende farvestoffer og fremstår røde.

Vi tilpassede først kittet til mykobakteriologi og vurderede, i in vitro-eksperimenter, testens overensstemmelse med dyrkningsresultaterne. Derefter viste vi i en observationel prospektiv undersøgelse dens nøjagtighed til at forudsige dyrkningsresultater hos patienter, der gennemgår antituberkuløs terapi: levedygtighedstesten forudsagde korrekt alle kultur-positive prøver i de første to måneder efter behandling.

Formålet med denne undersøgelse er i en multicentrisk undersøgelse at bekræfte anvendeligheden af ​​vores levedygtighedstest i en stor gruppe af smear-positive lungetuberkulosepatienter under behandling og at afgøre, om testen kan hjælpe læger med at afbryde isolationsforanstaltninger på hospitalsmiljøer.

Da testen er hurtig (mindre end 1 time for testen versus en median på 23 dage for dyrkning) og nem at udføre, ville det være nyttigt at hjælpe læger med at opretholde isolation i kliniske omgivelser og samtidig undgå unødvendige kulturer. Da testen også er billig (<1 € for reagenser), kan dette problem være særligt værdifuldt i lande med begrænsede ressourcer, og hvor kulturer ikke er tilgængelige.