TuBerkuloosin elinkelpoisuuden alueiden välinen tutkimus ja sopimus biologisista testeistä (TBVISA)

Kun keuhkotuberkuloosipotilaita (TB) viedään sairaalaan diagnoosia ja hoitoa varten, eristystoimenpiteet ovat pakollisia tartunnan estämiseksi. Suosituksia on säilyttää eristäminen, kunnes potilaat eivät enää ole tarttuvia, mikä todetaan, kun hengitystienäytteiden viljelmistä tulee negatiivisia (viljelmän muuntaminen). Antibioottien annon jälkeen viljelyn siirtymiseen kuluu keskimäärin kuukausi lääkeherkkää tuberkuloosia sairastavilla potilailla, mutta 5–30 % tapauksista kestää yli kaksi kuukautta ja multiresistentti (MDR)-TB voi vaatia jopa 6 kuukautta.

Hengitysnäytteiden basillien mikroskooppista tutkimusta käytetään pääasiassa korvikemarkkerina, mutta koska basillivärjäys ei eroa elävänä kuolleista basilleista, on positiivisten sivelynäytteiden tulkinta harhaanjohtavaa. 1-2 kuukauden hoidon jälkeen basilleja voidaan pitää kuolleina, kun ne ovat vielä elossa, ja siten eristystoimenpiteet lopetetaan virheellisesti. Sitä vastoin basilleja voidaan pitää elinkelpoisina, vaikka ne on jo tapettu hoidossa ja potilaat on pidetty riittämättömästi eristyksissä.

Harhaanjohtavien tulosten voittamiseksi on yritetty kehittää elinkykyisiä biomarkkereita tuberkuloosin aiheuttajalle Mycobacterium tuberculosisille (Mtb). RNA:ta tai DNA:ta käyttävät tutkimukset antoivat vakuuttavia tuloksia, mutta niiden hinta ei ole kohtuuhintainen suurimmassa osassa maailmaa. Fluoreseiinikoettimia käyttävät ovat helpoimpia, mutta tutkimukset ovat osoittaneet joko ristiriitaisia ​​tuloksia tai niitä on arvioitu vain lyhyen ajan hoidon aloittamisen jälkeen.

Näin ollen arvioimme fluoresoivan värjäyksen, joka pystyy erottamaan kuolleet basillet elävistä ja jota käytettiin aiemmin teollisten ympäristöpatogeenien havaitsemiseen - Live/Dead® BacLight™ -bakteerien elinkelpoisuustestin (Invitrogen, Biocentric, Ranska). Lyhyesti sanottuna testi mahdollistaa bakteerien visualisoinnin käyttämällä SYTO-9:ää ja propidiumiodidi (PI) fluoresoivia väriaineita, jotka molemmat sitoutuvat DNA:han mutta tunkeutuvat spesifisesti sytoplasman kalvoon: SYTO-9 tunkeutuu kaikkiin basilleihin, joko eläviin tai ei, kun taas PI tunkeutuu vain solut, joiden kalvo on vaurioitunut. Näin ollen elävät bakteerit ovat PI:tä läpäisemättömiä ja vain fluoresoivat, koska SYTO-9 näyttää vihreältä fluoresoivassa mikroskoopissa, kun taas kuolleet bakteerit on merkitty molemmilla fluoresoivilla väriaineilla ja näyttävät punaisilta.

Ensin sovitimme pakkauksen mykobakteriologiaan ja arvioimme in vitro -kokeissa testin yhteensopivuuden viljelytulosten kanssa. Sitten osoitimme havainnoivassa prospektiivitutkimuksessa sen tarkkuuden ennustaa viljelytuloksia potilailla, jotka olivat saaneet tuberkuloosihoitoa: elinkelpoisuustesti ennusti oikein kaikki viljelypositiiviset näytteet kahden ensimmäisen kuukauden aikana hoidon jälkeen.

Tämän tutkimuksen tavoitteena on vahvistaa monikeskustutkimuksessa elinkelpoisuustestimme käyttökelpoisuus suuressa hoidossa olevien smear-positiivisten keuhkotuberkuloosipotilaiden kohortissa ja selvittää, voisiko testi auttaa lääkäreitä lopettamaan eristystoimenpiteet sairaalaympäristössä.

Koska testi on nopea (alle 1 tunti testissä vs. viljelyn mediaani 23 päivää) ja helppo suorittaa, olisi hyödyllistä auttaa lääkäreitä säilyttämään eristyneisyytensä kliinisissä olosuhteissa ja välttämään tarpeettomia viljelmiä. Koska testi on myös halpa (<1 € reagensseille), tämä ongelma voi olla erityisen arvokas maissa, joissa on rajalliset resurssit ja joissa viljelmiä ei ole saatavilla.