Międzyregionalne badanie rentowności gruźlicy i porozumienie w sprawie testów biologicznych (TBVISA)

Kiedy pacjenci z gruźlicą płuc (TB) są hospitalizowani w celu diagnozy i leczenia, konieczne są środki izolacyjne, aby zapobiec przeniesieniu. Zaleca się utrzymanie izolacji do czasu, gdy pacjenci nie będą już zakaźni, co stwierdza się, gdy posiewy próbek z układu oddechowego staną się ujemne (konwersja hodowli). Po podaniu antybiotyków średni czas do konwersji hodowli wynosi jeden miesiąc dla pacjentów z gruźlicą lekowrażliwą, ale 5%-30% przypadków wymaga więcej niż dwóch miesięcy, a nawet do 6 miesięcy w przypadku gruźlicy wieloopornej (MDR).

Badanie mikroskopowe prątków w próbkach oddechowych jest głównie stosowane jako marker zastępczy, ale ponieważ barwienie prątków nie pozwala na odróżnienie żywych od martwych prątków, interpretacja pozytywnych rozmazów jest myląca. Po 1-2 miesiącach leczenia prątki można uznać za martwe, gdy są jeszcze żywe, w związku z czym błędnie przerywa się izolację. I odwrotnie, pałeczki można uznać za zdolne do życia, jeśli zostały już zabite przez leczenie, a pacjenci niewłaściwie trzymani w izolacji.

Aby przezwyciężyć mylące wyniki, podjęto próby opracowania biomarkerów żywotności dla Mycobacterium tuberculosis (Mtb), czynnika wywołującego gruźlicę. Badania z wykorzystaniem RNA lub DNA dały przekonujące wyniki, ale ich koszt jest nieosiągalny w większości części świata. Te z sondami fluoresceinowymi są najłatwiejsze, ale badania wykazały albo sprzeczne wyniki, albo były oceniane tylko przez krótki okres czasu po rozpoczęciu terapii.

W związku z tym oceniliśmy barwienie fluorescencyjne zdolne do odróżnienia martwych prątków od żywych, które było wcześniej stosowane do wykrywania przemysłowych patogenów środowiskowych — test żywotności bakterii Live/Dead® BacLight™ (Invitrogen, Biocentric, Francja). Krótko mówiąc, test pozwala na wizualizację bakterii za pomocą barwników fluorescencyjnych SYTO-9 i jodku propidyny (PI), które wiążą się z DNA, ale penetrują specyficznie błonę cytoplazmatyczną: SYTO-9 przenika do wszystkich pałeczek, żywych lub nie, podczas gdy PI przenika tylko do komórki z uszkodzoną błoną. W konsekwencji żywe bakterie są nieprzepuszczalne dla PI i fluoryzują tylko dlatego, że SYTO-9 wydaje się zielony pod mikroskopem fluorescencyjnym, podczas gdy martwe bakterie są oznaczane przez oba barwniki fluorescencyjne i wydają się czerwone.

W pierwszej kolejności dostosowaliśmy zestaw do mykobakteriologii i oceniliśmy w doświadczeniach in vitro zgodność testu z wynikami hodowli. Następnie wykazaliśmy w prospektywnym badaniu obserwacyjnym jego dokładność przewidywania wyników hodowli u pacjentów poddawanych terapii przeciwgruźliczej: test żywotności prawidłowo przewidywał wszystkie próbki dodatnie w hodowli w ciągu pierwszych dwóch miesięcy po leczeniu.

Celem niniejszego badania jest potwierdzenie w badaniu wieloośrodkowym przydatności naszego testu żywotności w dużej kohorcie leczonych pacjentów z gruźlicą płuc z pozytywnym rozmazem oraz ustalenie, czy test może pomóc lekarzom w zaprzestaniu stosowania środków izolacyjnych w warunkach szpitalnych.

Ponieważ test jest szybki (poniżej 1 godziny na test w porównaniu z medianą 23 dni na posiew) i łatwy do wykonania, byłoby przydatne, aby pomóc lekarzom w utrzymaniu izolacji w warunkach klinicznych, unikając zbędnych posiewów. Ponieważ test jest również tani (<1 € za odczynniki), kwestia ta może być szczególnie cenna w krajach o ograniczonych zasobach i gdzie kultury są niedostępne.