Interregionaal onderzoek naar levensvatbaarheid tuberculose en akkoord over biologische tests (TBVISA)

Wanneer patiënten met longtuberculose (tbc) voor diagnose en behandeling in het ziekenhuis worden opgenomen, zijn isolatiemaatregelen verplicht om overdracht te voorkomen. Aanbevelingen zijn om isolatie te handhaven totdat patiënten niet meer besmettelijk zijn, wat wordt vastgesteld wanneer kweken van respiratoire monsters negatief worden (kweekconversie). Na toediening van antibiotica is de gemiddelde tijd tot kweekconversie één maand voor patiënten met geneesmiddelgevoelige tbc, maar in 5%-30% van de gevallen is meer dan twee maanden nodig en tot 6 maanden kan nodig zijn voor multiresistente (MDR)-tbc.

Microscopisch onderzoek van bacillen in ademhalingsmonsters wordt voornamelijk gebruikt als surrogaatmarker, maar omdat bacillenkleuring geen onderscheid maakt tussen levende en dode bacillen, is de interpretatie van positieve uitstrijkjes misleidend. Na 1-2 maanden behandeling kunnen bacillen als dood worden beschouwd terwijl ze nog in leven zijn en worden isolatiemaatregelen dus ten onrechte stopgezet. Omgekeerd kunnen bacillen als levensvatbaar worden beschouwd terwijl ze al door de behandeling zijn gedood en patiënten onvoldoende geïsoleerd zijn gehouden.

Om de misleidende resultaten te ondervangen, zijn er pogingen ondernomen om biomarkers voor levensvatbaarheid te ontwikkelen voor Mycobacterium tuberculosis (Mtb), het agens van tuberculose. Studies met RNA of DNA leverden overtuigende resultaten op, maar de kosten ervan zijn in het grootste deel van de wereld niet betaalbaar. Degenen die fluoresceïne-sondes gebruiken, zijn het gemakkelijkst, maar studies hebben tegenstrijdige resultaten opgeleverd of zijn slechts gedurende een korte periode na aanvang van de therapie geëvalueerd.

Zo evalueerden we een fluorescerende kleuring die dode bacillen van levend kan onderscheiden, die eerder werd gebruikt voor de detectie van industriële omgevingspathogenen - de Live/Dead® BacLight™ Bacteriële levensvatbaarheidstest (Invitrogen, Biocentric, Frankrijk). Kortom, de test maakt het mogelijk om de bacteriën te visualiseren met behulp van SYTO-9 en propidiumiodide (PI) fluorescerende kleurstoffen, die beide binden aan DNA maar specifiek het cytoplasmamembraan binnendringen: SYTO-9 dringt door alle bacillen, levensvatbaar of niet, terwijl de PI alleen doordringt in cellen met beschadigd membraan. Bijgevolg zijn de levensvatbare bacteriën ondoordringbaar voor PI en fluoresceren ze alleen doordat SYTO-9 groen lijkt onder de fluorescentiemicroscoop, terwijl dode bacteriën worden gemarkeerd door beide fluorescerende kleurstoffen en rood lijken.

We hebben eerst de kit aangepast aan de mycobacteriologie en in in vitro-experimenten de concordantie van de test met de kweekresultaten beoordeeld. Vervolgens hebben we in een observationeel prospectief onderzoek aangetoond dat het nauwkeurig is om kweekresultaten te voorspellen bij patiënten die antituberculeuze therapie ondergaan: de levensvatbaarheidstest voorspelde correct alle kweekpositieve monsters in de eerste twee maanden na de behandeling.

Het doel van de huidige studie is om in een multicentrische studie het nut van onze levensvatbaarheidstest te bevestigen in een groot cohort van uitstrijkje-positieve longtuberculosepatiënten die worden behandeld en om te bepalen of de test artsen zou kunnen helpen om isolatiemaatregelen in ziekenhuisomgevingen stop te zetten.

Aangezien de test snel is (minder dan 1 uur voor de test versus een mediaan van 23 dagen voor kweek) en gemakkelijk uit te voeren, zou het nuttig zijn om artsen te helpen isolatie in klinische omgevingen te behouden en onnodige kweken te vermijden. Aangezien de test ook goedkoop is (<1 € voor reagentia), kan dit probleem bijzonder waardevol zijn in landen met beperkte middelen en waar culturen niet beschikbaar zijn.