Studio interregionale sulla vitalità della tubercolosi e accordo sui test biologici (TBVISA)

Quando i pazienti con tubercolosi polmonare (TBC) vengono ricoverati per la diagnosi e il trattamento, le misure di isolamento sono obbligatorie per prevenire la trasmissione. Le raccomandazioni sono di mantenere l'isolamento fino a quando i pazienti non sono più infettivi, il che viene accertato quando le colture dei campioni respiratori diventano negative (conversione delle colture). Dopo la somministrazione di antibiotici, il tempo medio per la conversione della coltura è di un mese per i pazienti con tubercolosi sensibile ai farmaci, ma il 5%-30% dei casi richiede più di due mesi e possono essere necessari fino a 6 mesi per la tubercolosi multiresistente (MDR).

L'esame microscopico dei bacilli nei campioni respiratori viene utilizzato principalmente come marcatore surrogato, ma poiché la colorazione dei bacilli non distingue i bacilli vivi da quelli morti, l'interpretazione degli strisci positivi è fuorviante. Dopo 1-2 mesi di trattamento, i bacilli possono essere considerati morti mentre sono ancora vivi e le misure di isolamento vengono quindi erroneamente sospese. Al contrario, i bacilli possono essere considerati vitali mentre sono già stati uccisi dal trattamento e i pazienti sono tenuti in isolamento inadeguato.

Per superare i risultati fuorvianti, sono stati fatti tentativi per sviluppare biomarcatori di vitalità per Mycobacterium tuberculosis (Mtb), l'agente della tubercolosi. Gli studi che utilizzano RNA o DNA hanno dato risultati convincenti ma il loro costo non è accessibile nella maggior parte del mondo. Quelli che utilizzano sonde di fluoresceina sono i più facili, ma gli studi hanno mostrato risultati contrastanti o sono stati valutati solo per un breve periodo di tempo dopo l'inizio della terapia.

Pertanto, abbiamo valutato una colorazione fluorescente in grado di differenziare i bacilli morti da quelli vivi, precedentemente utilizzata per il rilevamento di agenti patogeni ambientali industriali: il test di vitalità batterica Live/Dead® BacLight™ (Invitrogen, Biocentric, Francia). In breve, il test consente di visualizzare i batteri utilizzando i coloranti fluorescenti SYTO-9 e propidiodiumide (PI), che si legano entrambi al DNA ma penetrano specificamente nella membrana citoplasmatica: SYTO-9 penetra in tutti i bacilli, vitali o meno, mentre il PI penetra solo in cellule con membrana danneggiata. Di conseguenza, i batteri vitali sono impermeabili al PI e sono fluorescenti solo a causa del fatto che SYTO-9 appare verde al microscopio fluorescente, mentre i batteri morti sono contrassegnati da entrambi i coloranti fluorescenti e appaiono rossi.

Abbiamo prima adattato il kit alla micobatteriologia e valutato, in esperimenti in vitro, la concordanza del test con i risultati della coltura. Quindi, abbiamo dimostrato in uno studio prospettico osservazionale la sua accuratezza nel prevedere i risultati della coltura nei pazienti sottoposti a terapia antitubercolare: il test di vitalità ha predetto correttamente tutti i campioni positivi alla coltura nei primi due mesi dopo il trattamento.

L'obiettivo del presente studio è confermare in uno studio multicentrico l'utilità del nostro test di vitalità in un'ampia coorte di pazienti con tubercolosi polmonare positivi allo striscio in trattamento e determinare se il test potrebbe aiutare i medici a interrompere le misure di isolamento in ambiente ospedaliero.

Poiché il test è rapido (meno di 1 ora per il test contro una mediana di 23 giorni per la coltura) e facile da eseguire, sarebbe utile aiutare i medici a mantenere l'isolamento in ambito clinico evitando colture non necessarie. Poiché il test è anche economico (<1 € per i reagenti) questo problema potrebbe essere particolarmente utile nei paesi con risorse limitate e dove le colture non sono disponibili.