Meziregionální studie životaschopnosti tuberkulózy a dohoda o biologických testech (TBVISA)

Když jsou pacienti s plicní tuberkulózou (TBC) hospitalizováni kvůli diagnóze a léčbě, jsou povinná izolační opatření, aby se zabránilo přenosu. Doporučuje se udržovat izolaci, dokud pacienti přestanou být infekční, což se zjistí, když se kultivace respiračních vzorků stanou negativními (konverze kultury). Po podání antibiotik je průměrná doba do kultivační konverze jeden měsíc u pacientů s TBC citlivou na léky, ale 5 %–30 % případů vyžaduje více než dva měsíce a až 6 měsíců může být vyžadováno u multirezistentní (MDR)-TB.

Mikroskopické vyšetření bacilů ve vzorcích dýchacích cest se používá hlavně jako zástupný marker, ale protože barvení bacilů nerozlišuje živé od mrtvých bacilů, je interpretace pozitivních nátěrů zavádějící. Po 1-2 měsících léčby mohou být bacily považovány za mrtvé, dokud jsou ještě živé, a izolační opatření jsou tak chybně ukončena. Naopak, bacily mohou být považovány za životaschopné, zatímco již byly usmrceny léčbou a pacienti drženi nedostatečně v izolaci.

K překonání zavádějících výsledků byly učiněny pokusy vyvinout biomarkery životaschopnosti pro Mycobacterium tuberculosis (Mtb), původce tuberkulózy. Studie využívající RNA nebo DNA poskytly přesvědčivé výsledky, ale jejich cena není ve většině částí světa dostupná. Nejjednodušší jsou ty, které používají fluoresceinové sondy, ale studie ukázaly buď protichůdné výsledky, nebo byly hodnoceny pouze po krátkou dobu po zahájení terapie.

Hodnotili jsme tedy fluorescenční barvení schopné odlišit mrtvé bacily od živých, které bylo dříve používáno pro detekci průmyslových patogenů životního prostředí – test životaschopnosti bakterií Live/Dead® BacLight™ (Invitrogen, Biocentric, Francie). Stručně řečeno, test umožňuje vizualizaci bakterií pomocí fluorescenčních barviv SYTO-9 a propidiumjodid (PI), které se obě vážou na DNA, ale pronikají specificky cytoplazmatickou membránou: SYTO-9 proniká všemi bacily, ať už životaschopnými, nebo ne, zatímco PI proniká pouze do buňky s poškozenou membránou. V důsledku toho jsou životaschopné bakterie pro PI nepropustné a fluoreskují pouze díky tomu, že SYTO-9 se pod fluorescenčním mikroskopem jeví zeleně, zatímco mrtvé bakterie jsou označeny oběma fluorescenčními barvivy a vypadají červeně.

Nejprve jsme přizpůsobili soupravu mykobakteriologii a v experimentech in vitro jsme hodnotili shodu testu s výsledky kultivace. Poté jsme v observační prospektivní studii prokázali její přesnost předpovídat výsledky kultivace u pacientů podstupujících antituberkulózní léčbu: test viability správně predikoval všechny kultivační pozitivní vzorky v prvních dvou měsících po léčbě.

Cílem této studie je potvrdit v multicentrické studii užitečnost našeho testu životaschopnosti u velké kohorty pacientů s plicní tuberkulózou s pozitivním stěrem, kteří jsou léčeni, a určit, zda by test mohl pomoci lékařům přerušit izolační opatření v nemocničním prostředí.

Vzhledem k tomu, že test je rychlý (méně než 1 h pro test oproti mediánu 23 dnů pro kultivaci) a snadno proveditelný, bylo by užitečné pomoci lékařům udržet izolaci v klinických podmínkách a zároveň se vyhnout zbytečným kultivacím. Vzhledem k tomu, že test je také levný (< 1 € pro činidla), může být tento problém zvláště cenný v zemích s omezenými zdroji a tam, kde nejsou dostupné kultury.