Interregionale Studie zur Lebensfähigkeit von Tuberkulose und Vereinbarung über biologische Tests (TBVISA)

Wenn Patienten mit Lungentuberkulose (TB) zur Diagnose und Behandlung ins Krankenhaus eingeliefert werden, sind Isolationsmaßnahmen zwingend erforderlich, um eine Übertragung zu verhindern. Es wird empfohlen, die Isolation aufrechtzuerhalten, bis die Patienten nicht mehr infektiös sind. Dies wird festgestellt, wenn die Kulturen von Atemwegsproben negativ werden (Kulturumwandlung). Nach der Verabreichung von Antibiotika beträgt die durchschnittliche Zeit bis zur Kulturumwandlung bei Patienten mit medikamentenempfindlicher Tuberkulose einen Monat, bei 5–30 % der Fälle sind jedoch mehr als zwei Monate erforderlich, und bei multiresistenter (MDR)-TB können bis zu 6 Monate erforderlich sein.

Die mikroskopische Untersuchung von Bazillen in Atemwegsproben wird hauptsächlich als Ersatzmarker verwendet. Da die Bazillenfärbung jedoch keine Unterscheidung zwischen lebenden und toten Bazillen ermöglicht, ist die Interpretation positiver Abstriche irreführend. Nach 1–2 Monaten Behandlung können die Bakterien bereits zu Lebzeiten als tot betrachtet werden und die Isolationsmaßnahmen werden daher fälschlicherweise abgebrochen. Umgekehrt können Bakterien als lebensfähig angesehen werden, wenn sie durch die Behandlung bereits abgetötet wurden und Patienten nur unzureichend isoliert gehalten wurden.

Um die irreführenden Ergebnisse auszuräumen, wurden Versuche unternommen, Lebensfähigkeitsbiomarker für Mycobacterium tuberculosis (Mtb), den Erreger der Tuberkulose, zu entwickeln. Studien mit RNA oder DNA lieferten überzeugende Ergebnisse, ihre Kosten sind jedoch in den meisten Teilen der Welt nicht erschwinglich. Die Verwendung von Fluorescein-Sonden ist am einfachsten, aber Studien haben entweder widersprüchliche Ergebnisse gezeigt oder wurden nur für einen kurzen Zeitraum nach Beginn der Therapie ausgewertet.

Daher haben wir eine Fluoreszenzfärbung evaluiert, die in der Lage ist, tote von lebenden Bazillen zu unterscheiden, die zuvor zum Nachweis von industriellen Umweltpathogenen verwendet wurde – den Live/Dead® BacLight™ Bakterienlebensfähigkeitstest (Invitrogen, Biocentric, Frankreich). Kurz gesagt ermöglicht der Test die Visualisierung der Bakterien mithilfe der Fluoreszenzfarbstoffe SYTO-9 und Propidiumiodid (PI), die beide an DNA binden, aber spezifisch in die Zytoplasmamembran eindringen: SYTO-9 durchdringt alle Bakterien, ob lebensfähig oder nicht, während PI nur in diese eindringt Zellen mit beschädigter Membran. Folglich sind die lebensfähigen Bakterien für PI undurchlässig und fluoreszieren nur, weil SYTO-9 unter dem Fluoreszenzmikroskop grün erscheint, während tote Bakterien durch beide Fluoreszenzfarbstoffe markiert sind und rot erscheinen.

Wir haben das Kit zunächst an die Mykobakteriologie angepasst und in In-vitro-Experimenten die Übereinstimmung des Tests mit den Kulturergebnissen beurteilt. Dann haben wir in einer prospektiven Beobachtungsstudie gezeigt, dass es bei der Vorhersage von Kulturergebnissen bei Patienten, die sich einer Antituberkulose-Therapie unterziehen, genau ist: Der Lebensfähigkeitstest hat alle kulturpositiven Proben in den ersten zwei Monaten nach der Behandlung korrekt vorhergesagt.

Das Ziel der vorliegenden Studie besteht darin, in einer multizentrischen Studie den Nutzen unseres Lebensfähigkeitstests in einer großen Kohorte von Patienten mit abstrichpositiver Lungentuberkulose in Behandlung zu bestätigen und festzustellen, ob der Test Ärzten dabei helfen könnte, Isolationsmaßnahmen im Krankenhausumfeld abzubrechen.

Da der Test schnell (weniger als 1 Stunde für den Test gegenüber durchschnittlich 23 Tagen für die Kultur) und einfach durchzuführen ist, wäre es hilfreich, Ärzte dabei zu unterstützen, die Isolation im klinischen Umfeld aufrechtzuerhalten und gleichzeitig unnötige Kulturen zu vermeiden. Da der Test zudem günstig ist (<1 € für Reagenzien), könnte dieses Problem in Ländern mit begrenzten Ressourcen und in denen keine Kulturen verfügbar sind, besonders wertvoll sein.