Estudio Interregional de Viabilidad de la Tuberculosis y Acuerdo sobre Pruebas Biológicas (TBVISA)

Cuando los pacientes con tuberculosis (TB) pulmonar son hospitalizados para diagnóstico y tratamiento, las medidas de aislamiento son obligatorias para prevenir la transmisión. Las recomendaciones son mantener el aislamiento hasta que los pacientes ya no sean infecciosos, lo que se determina cuando los cultivos de muestras respiratorias se vuelven negativos (conversión de cultivo). Después de la administración de antibióticos, el tiempo promedio para la conversión del cultivo es de un mes para los pacientes con TB sensible a los medicamentos, pero entre el 5 % y el 30 % de los casos requieren más de dos meses y se pueden requerir hasta 6 meses para la TB multirresistente (MDR).

El examen microscópico de bacilos en muestras respiratorias se usa principalmente como marcador sustituto, pero debido a que la tinción de bacilos no diferencia a los bacilos vivos de los muertos, la interpretación de los frotis positivos es engañosa. Después de 1-2 meses de tratamiento, los bacilos pueden considerarse muertos mientras aún están vivos y, por lo tanto, se suspenden erróneamente las medidas de aislamiento. Por el contrario, los bacilos pueden considerarse viables mientras ya hayan sido eliminados por el tratamiento y los pacientes se mantengan en un aislamiento inadecuado.

Para superar los resultados engañosos, se han hecho intentos para desarrollar biomarcadores de viabilidad para Mycobacterium tuberculosis (Mtb), el agente de la tuberculosis. Los estudios que utilizan ARN o ADN dieron resultados convincentes, pero su costo no es asequible en la mayor parte del mundo. Los que utilizan sondas de fluoresceína son los más fáciles, pero los estudios han mostrado resultados contradictorios o se han evaluado solo durante un breve período de tiempo después del inicio de la terapia.

Por lo tanto, evaluamos una tinción fluorescente capaz de diferenciar bacilos muertos de vivos, que se utilizó anteriormente para la detección de patógenos ambientales industriales: la prueba de viabilidad bacteriana Live/Dead® BacLight™ (Invitrogen, Biocentric, Francia). Brevemente, la prueba permite visualizar las bacterias utilizando colorantes fluorescentes SYTO-9 y yoduro de propidio (PI), que se unen al ADN pero penetran específicamente en la membrana citoplasmática: SYTO-9 penetra en todos los bacilos, sean viables o no, mientras que el PI penetra solo en Células con membrana dañada. En consecuencia, las bacterias viables son impermeables al PI y solo emiten fluorescencia debido a que SYTO-9 aparece verde bajo el microscopio fluorescente, mientras que las bacterias muertas están marcadas con tintes fluorescentes y aparecen rojas.

Primero adaptamos el kit a la micobacteriología y evaluamos, en experimentos in vitro, la concordancia de la prueba con los resultados del cultivo. Luego, demostramos en un estudio prospectivo observacional su precisión para predecir resultados de cultivo en pacientes sometidos a terapia antituberculosa: la prueba de viabilidad predijo correctamente todas las muestras con cultivo positivo en los primeros dos meses después del tratamiento.

El objetivo del presente estudio es confirmar en un estudio multicéntrico la utilidad de nuestra prueba de viabilidad en una gran cohorte de pacientes con tuberculosis pulmonar con baciloscopía positiva en tratamiento y determinar si la prueba podría ayudar a los médicos a interrumpir las medidas de aislamiento en el ámbito hospitalario.

Dado que la prueba es rápida (menos de 1 h para la prueba frente a una mediana de 23 días para el cultivo) y fácil de realizar, sería útil ayudar a los médicos a mantener el aislamiento en entornos clínicos y evitar cultivos innecesarios. Dado que la prueba también es barata (<1 € para los reactivos), este problema podría ser particularmente valioso en países con recursos limitados y donde los cultivos no están disponibles.