結核菌生存率に関する地域間研究と生物学的検査に関する合意 (TBVISA)

肺結核 (TB) 患者が診断と治療のために入院する場合、感染を防ぐために隔離措置が必須です。 患者の感染力がなくなるまで隔離を維持することが推奨されており、これは呼吸器検体の培養が陰性になったときに確認されます（培養転換）。 抗生物質の投与後、薬剤感受性結核患者の場合、培養変換までの平均期間は 1 か月ですが、5% ～ 30% の症例では 2 か月以上を要し、多剤耐性 (MDR) 結核の場合は最大 6 か月かかる場合があります。

呼吸器サンプル中の桿菌の顕微鏡検査は主に代用マーカーとして使用されますが、桿菌染色では生きている桿菌と死んだ桿菌を区別できないため、陽性スミアの解釈は誤解を招きます。 1～2 か月の治療後、桿菌はまだ生きているにもかかわらず死んだものとみなされるため、隔離措置が誤って中止されてしまいます。 逆に、桿菌は治療によってすでに死滅しており、患者が不十分に隔離されているにもかかわらず、生存しているとみなされる可能性があります。

誤解を招く結果を克服するために、結核の病原体である結核菌（Mtb）の生存率バイオマーカーを開発する試みがなされてきた。 RNA または DNA を使用した研究では説得力のある結果が得られましたが、その費用は世界のほとんどの地域で手頃な価格ではありません。 フルオレセインプローブを使用する方法が最も簡単ですが、研究では矛盾する結果が示されているか、治療開始後短期間しか評価されていません。

そこで、我々は、産業環境病原体の検出に以前に使用されていた、死んだ桿菌と生きた桿菌を区別できる蛍光染色、Live/Dead® BacLight™ 細菌生存率テスト (Invitrogen、Biocentric、フランス) を評価しました。 簡単に説明すると、このテストでは、SYTO-9 とヨウ化プロピジウム (PI) 蛍光色素を使用して細菌を視覚化できます。これらは両方とも DNA に結合しますが、細胞質膜に特異的に浸透します。SYTO-9 は、生存しているかどうかにかかわらず、すべての桿菌に浸透しますが、PI は一部の桿菌にのみ浸透します。膜が損傷した細胞。 その結果、生菌はPIを透過せず、蛍光顕微鏡下ではSYTO-9によって緑色に見えるため蛍光のみを発しますが、死菌は両方の蛍光色素でマークされ、赤色に見えます。

私たちはまずこのキットをマイコバクテリア学に適応させ、試験管内実験で培養結果との一致性を評価しました。 次に、我々は、観察的前向き研究で、抗結核療法を受けている患者の培養結果を予測する精度を示しました。生存率検査は、治療後最初の 2 か月間のすべての培養陽性サンプルを正確に予測しました。

本研究の目的は、治療中の塗抹陽性肺結核患者の大規模コホートにおける生存率検査の有用性を多施設共同研究で確認し、この検査が医師が病院内での隔離措置を中止するのに役立つかどうかを判断することである。

検査は迅速で（検査は 1 時間未満、培養は中央値 23 日）、実施が簡単であるため、医師が不必要な培養を避けながら臨床現場で隔離を維持するのに役立ちます。 この検査は安価（試薬代が 1 ユーロ未満）なので、この問題は、資源が限られており、培養物が利用できない国では特に価値があると考えられます。