Badanie MAGE-3/Melan-A/gp 100/NA17 i rhIL-12 z/bez niskiej dawki IL-2 w czerniaku z przerzutami

W oparciu o powyższe wyniki badań przedklinicznych i fazy I, wyłoniła się logiczna strategia dotycząca szczepionki przeciwko czerniakowi drugiej generacji. Przeprowadzone zostanie randomizowane badanie fazy II z udziałem pacjentów z czerniakiem z przerzutami. Najpierw pacjenci zostaną poddani typowaniu HLA; Pacjenci HLA-A2-dodatni będą kwalifikować się do badań przesiewowych. Jeśli to możliwe, każdy pacjent zostanie poddany biopsji guza w celu przesiewowego wykrycia ekspresji MAGE-3, Melan-A, gplOO i NAI 7 przy użyciu RT-PCR i immunohistochemii, w celu określenia, czy limfocyty T są obecne w zmianie chorobowej, w celu zmierzenia genu cytokiny ekspresji za pomocą RT-PCR i przeprowadzenia analizy macierzy genów. Ponadto komórki krwi będą analizowane pod kątem niektórych parametrów funkcji limfocytów T.

Pacjenci zostaną losowo przydzieleni do kohort A (bez IL-2) lub B (z niską dawką IL-2). W celu leczenia krew obwodowa zostanie pobrana i frakcjonowana przez wirowanie w gradiencie gęstości w celu wyizolowania PBMC jako źródła APC. PBMC zostaną podzielone na cztery pule, z których każda będzie inkubowana z jednym z następujących peptydów: MAGE-3, Melan-A, gp 100 lub Ni 7A. Komórki obciążone peptydem zostaną następnie przemyte i ponownie połączone w pojedynczą zawiesinę w PBS i napromieniowane śmiertelnie. Około 120 x 106 komórek poddanych pulsowi zostanie wstrzykniętych podskórnie w miejsce w pobliżu węzła chłonnego, które nie jest uważane za związane z guzem. Podanie podskórne zostało wybrane ze względu na bezpieczeństwo, skuteczność w modelu przedklinicznym oraz cel polegający na dotarciu szczepionki do drenującego węzła chłonnego. rhIL-12 (4 μg prosta dawka) zostanie następnie podana podskórnie w pobliżu miejsca podania szczepionki w dniach 1, 3 i 5 każdego cyklu. Ta dawka i schemat okazały się skuteczne w naszym badaniu I fazy. Połowie pacjentów (kohorta B) IL-2 (prosta dawka I MU) będzie podawana podskórnie codziennie, w dniach 7-18. Ponowna immunizacja wraz z rhIL-12, a następnie IL-2 (jeśli została wyznaczona) zostanie przeprowadzona w odstępach 3 tygodniowych, jak w cyklu I.

W dniu 1 każdego cyklu krew obwodowa zostanie pobrana w celu zmierzenia produkcji IFN-y swoistej dla peptydu. Przed leczeniem i co 3 cykle zostaną zebrane PBMC w celu ilościowego określenia limfocytów T CD8 specyficznych dla peptydu za pomocą analizy metodą cytometrii przepływowej z tetramerami peptydu/HLA-A2, a dowody na odpowiedź molekularną zostaną ocenione przez wykonanie RT-PCR. dla antygenów czerniaka w próbkach krwi obwodowej. Ponadto przed leczeniem, po pierwszych 3 cyklach iw momencie zakończenia badania zostanie przeprowadzona biopsja guza w celu oceny odpowiedzi immunologicznej w mikrośrodowisku guza, w tym analiza macierzy genów. Mamy nadzieję, że badania te odkryją przyczynę braku odpowiedzi klinicznej u pacjentów z guzami resztkowymi. Odpowiedź kliniczna zostanie oceniona jako wynik drugorzędny.