Étude de MAGE-3/Melan-A/gp 100/NA17 et rhIL-12 avec/sans IL-2 à faible dose dans le mélanome métastatique

Sur la base des résultats précliniques et de phase I ci-dessus, une stratégie logique pour un vaccin contre le mélanome de deuxième génération a émergé. Une étude randomisée de phase II chez des patients atteints de mélanome métastatique sera entreprise. Les patients seront d'abord typés HLA; Les patients HLA-A2-positifs seront éligibles pour le dépistage. Lorsque cela est possible, chaque patient subira une biopsie tumorale pour dépister l'expression de MAGE-3, Melan-A, gplOO et NAI 7 en utilisant la RT-PCR et l'immunohistochimie, pour déterminer si les cellules T sont présentes dans la lésion, pour mesurer le gène de la cytokine expression par RT-PCR, et pour effectuer une analyse de matrice de gènes. De plus, les cellules sanguines seront analysées pour certains paramètres de la fonction des cellules T.

Les patients seront randomisés dans les cohortes A (sans IL-2) ou B (avec IL-2 à faible dose). Pour le traitement, le sang périphérique sera collecté et fractionné par centrifugation de densité pour isoler les PBMC comme source d'APC. Les PBMC seront divisés en quatre pools, dont chacun sera incubé avec l'un des peptides suivants : MAGE-3, Melan-A, gp 100 ou Ni 7A. Les cellules chargées de peptides seront ensuite lavées et recombinées en une seule suspension dans du PBS, et irradiées de manière létale. Environ 120 x 106 cellules pulsées seront injectées par voie sous-cutanée à un site proche d'un ganglion lymphatique qui ne semble pas être impliqué dans la tumeur. La voie sous-cutanée a été choisie pour des raisons de sécurité, d'efficacité dans le modèle préclinique et dans le but de cibler le vaccin sur un ganglion drainant. rhIL-12 (4 .tg dose droite) sera ensuite administré par voie sous-cutanée à côté du site vaccinal aux jours 1, 3 et 5 de chaque cycle. Cette dose et ce schéma se sont avérés efficaces dans notre étude de phase I. Chez la moitié des patients (cohorte B), l'IL-2 (dose directe I MU) sera administrée par voie sous-cutanée quotidiennement, les jours 7 à 18. La re-vaccination avec rhIL-12 suivie de IL-2 (si attribué) sera effectuée à des intervalles de 3 semaines comme dans le cycle I.

Le jour 1 de chaque cycle, du sang périphérique sera prélevé pour mesurer la production d'IFN-y spécifique du peptide. Avant le traitement et après tous les 3 cycles, les PBMC seront collectés pour quantifier les lymphocytes T CD8 spécifiques du peptide par analyse cytométrique en flux avec des tétramères peptide/HLA-A2, et les preuves d'une réponse moléculaire seront évaluées en effectuant une RT-PCR. pour les antigènes de mélanome sur des échantillons de sang périphérique. De plus, avant le traitement, après les 3 premiers cycles et au moment de la fin de l'étude, une biopsie tumorale sera effectuée pour évaluer la réponse immunitaire dans le microenvironnement tumoral, y compris l'analyse du réseau de gènes. On espère que ces études permettront de découvrir la raison de l'absence de réponse clinique chez les patients atteints de tumeurs résiduelles. La réponse clinique sera évaluée comme résultat secondaire.