Studio di MAGE-3/Melan-A/gp 100/NA17 e rhIL-12 con/senza IL-2 a basso dosaggio nel melanoma metastatico

Sulla base dei suddetti risultati preclinici e di fase I, è emersa una strategia logica per un vaccino contro il melanoma di seconda generazione. Verrà intrapreso uno studio randomizzato di fase II su pazienti con melanoma metastatico. I pazienti saranno prima tipizzati HLA; I pazienti HLA-A2 positivi saranno idonei per lo screening. Quando possibile, ogni paziente verrà sottoposto a biopsia tumorale per lo screening dell'espressione di MAGE-3, Melan-A, gplOO e NAI 7 mediante RT-PCR e immunoistochimica, per determinare se le cellule T sono presenti nella lesione, per misurare il gene delle citochine espressione mediante RT-PCR e per eseguire l'analisi dell'array genico. Inoltre, le cellule del sangue saranno analizzate per alcuni parametri della funzione delle cellule T.

I pazienti saranno randomizzati alle coorti A (senza IL-2) o B (con IL-2 a basso dosaggio). Per il trattamento, il sangue periferico sarà raccolto e frazionato mediante centrifugazione a densità per isolare le PBMC come fonte di APC. Le PBMC saranno divise in quattro pool, ognuno dei quali sarà incubato con uno dei seguenti peptidi: MAGE-3, Melan-A, gp 100 o Ni 7A. Le cellule cariche di peptidi verranno quindi lavate e ricombinate in un'unica sospensione in PBS e irradiate in modo letale. Saranno iniettate per via sottocutanea circa 120 x 106 cellule pulsate in un sito vicino a un linfonodo che non si pensa sia coinvolto con il tumore. La via sottocutanea è stata selezionata per motivi di sicurezza, efficacia nel modello preclinico e per l'obiettivo di indirizzare il vaccino a un linfonodo drenante. rhIL-12 (4.tg dose singola) verrà quindi somministrato per via sottocutanea adiacente al sito del vaccino nei giorni 1, 3 e 5 di ciascun ciclo. Questa dose e questo programma si sono rivelati efficaci nel nostro studio di fase I. In metà dei pazienti (coorte B), IL-2 (dose diretta I MU) verrà somministrata per via sottocutanea ogni giorno, giorni 7-18. La re-immunizzazione insieme a rhIL-12 seguita da IL-2 (se assegnata) verrà eseguita a intervalli di 3 settimane come nel ciclo I.

Il giorno 1 di ogni ciclo, il sangue periferico sarà raccolto per misurare la produzione di IFN-y peptide-specifico. Prima del trattamento e dopo ogni 3 cicli, le PBMC saranno raccolte per quantificare le cellule T CD8 specifiche del peptide mediante analisi citofluorimetrica con tetrameri peptide/HLA-A2, e l'evidenza di una risposta molecolare sarà valutata eseguendo RT-PCR. per gli antigeni del melanoma su campioni di sangue periferico. Inoltre, prima del trattamento, dopo i primi 3 cicli e al momento dell'interruzione dello studio, verrà eseguita una biopsia del tumore per valutare la risposta immunitaria nel microambiente tumorale, inclusa l'analisi del gene array. Si spera che questi studi scoprano il motivo della mancanza di risposta clinica nei pazienti con tumori residui. La risposta clinica sarà valutata come risultato secondario.