Criopreservação de Oócitos: O Impacto da Criopreservação no Fuso Meiótico e Mitocôndrias de Oócitos Humanos. (WCFC)

A criopreservação de oócitos (OC) tem ampla aplicação no campo da endocrinologia reprodutiva para o manejo de problemas clínicos em pacientes férteis e inférteis. Por exemplo, mulheres jovens férteis que são diagnosticadas com malignidades podem congelar seus oócitos antes de iniciar radiação potencialmente tóxica ou terapia química contra o câncer, o que pode torná-los estéreis.

Usando a tecnologia OC, estabelecemos um banco de oócitos congelados usando doadores de óvulos saudáveis ​​e compensados ​​que foram pré-selecionados usando os critérios da FDA. Após um período de quarentena apropriado, os oócitos podem ser descongelados e oferecidos a mulheres com diagnóstico de insuficiência ovariana prematura ou diminuição da reserva ovariana. Esta aplicação de OC já se mostrou promissora ao eliminar as complicações logísticas e clínicas associadas à doação tradicional de oócitos usando oócitos frescos de doadoras.

Do ponto de vista social, a criopreservação de oócitos excedentes em um ciclo de fertilização in vitro pode remover algumas das objeções sociais e morais que cercam a criopreservação de embriões. Atualmente, nossa taxa de gravidez de oócitos congelados (56%) é equivalente à nossa taxa de gravidez de embriões congelados (45%). Os pacientes que completaram suas famílias acham mais fácil descartar oócitos do que embriões.

Finalmente, as mulheres que fazem uma escolha pessoal para retardar a gravidez podem ter a opção de preservar seus ovócitos com potencial para uso posterior.

As duas técnicas distintas atualmente utilizadas para a criopreservação de oócitos são: 1) congelamento controlado e 2) vitrificação. O congelamento controlado compartilha algumas semelhanças com a tecnologia básica empregada para a criopreservação de embriões em quase todos os programas de fertilização in vitro. A técnica envolve o congelamento lento de embriões em soluções crioprotetoras, muitas vezes combinadas com um freezer controlado por computador para regular as mudanças de temperatura. Tentativas de melhorar nossa compreensão da criobiologia oocitária têm sido principalmente empíricas usando tentativa e erro. Apenas uma experiência limitada foi adquirida pela adoção de modelos científicos capazes de prever o efeito do estresse "crio" imposto aos oócitos usando vários métodos de congelamento (Fuller e Paynter, 2004; Paynter, 2005). Na ausência de estudos adequadamente desenhados, os avanços na experiência clínica com o congelamento de oócitos têm sido muito limitados. Um dos maiores obstáculos para a implementação do congelamento de oócitos foi a incapacidade de alcançar altas taxas de sobrevivência reprodutíveis devido a um importante efeito nas organelas intracelulares. Por exemplo, devido à sua sensibilidade a baixas temperaturas, o fuso da metáfase II sempre foi considerado suscetível a alterações estruturais que potencialmente podem interferir na segregação cromossômica normal na meiose II. Além disso, o papel essencial das mitocôndrias na função celular normal, na fertilização e no desenvolvimento inicial do embrião já foi descrito anteriormente (Jones et al., 2004).

Nosso protocolo de congelamento-descongelamento modificado, recentemente desenvolvido, mostrou consistentemente altas taxas de recuperação, levando ao otimismo de que o armazenamento de oócitos poderia finalmente se tornar disponível na prática clínica. Mas resta demonstrar que a excelente sobrevida pós-descongelamento coincide com integridade celular e competência de desenvolvimento inalterada. Portanto, antes de recomendar a adoção da criopreservação de oócitos, um de nossos objetivos é documentar o possível efeito da criopreservação no fuso meiótico e nos níveis mitocondriais. Um objetivo importante do nosso estudo é avaliar a viabilidade pós-descongelamento e a integridade da organela dos oócitos usando: 1) uma técnica conservadora [análise PolScope do fuso meiótico] e 2) uma técnica não conservadora [análise por microscopia de fluorescência do fuso meiótico e mitocôndrias] usando nosso protocolo de criopreservação de oócitos.

O desenvolvimento contínuo da tecnologia de congelamento está ocorrendo rapidamente. Pode-se prever que, em um futuro próximo, o congelamento de óvulos se tornará tão bem-sucedido quanto a criopreservação de embriões. Finalmente, à medida que mais experiência clínica com o congelamento de óvulos se acumula, dados de resultados aceitáveis ​​determinarão o futuro do congelamento de óvulos. Até lá, a criopreservação de ovócitos deve ser utilizada em casos clínicos cuidadosamente selecionados, com plena divulgação ao paciente quanto aos riscos e limitadas taxas de sucesso.