Identificação de novos biomarcadores para enteropatia ambiental em crianças usando uma abordagem baseada em evidências (EE)

Título do protocolo:

Identificação de novos biomarcadores para enteropatia ambiental em crianças usando uma abordagem baseada em evidências

Fundo

A desnutrição infantil é um grande problema nos países do terceiro mundo. Um dos principais mecanismos por trás da desnutrição infantil é que o consumo de alimentos de baixa qualidade e infecções gastrointestinais (GI) frequentes danificam a mucosa intestinal das crianças. Os intestinos, portanto, não são capazes de absorver os nutrientes disponíveis e também não funcionam como uma barreira eficaz contra a translocação da flora GI para a circulação sistêmica. Os recursos energéticos limitados disponíveis para a criança são desviados para superar esses desafios inflamatórios em detrimento do crescimento normal. Este distúrbio dos intestinos (enteropatia) é chamado Enteropatia Ambiental (EE). Como a EE é considerada um precursor da desnutrição crônica, a detecção precoce da EE com o uso de biomarcadores no sangue, na urina ou nas fezes nos permitirá prever precocemente a desnutrição crônica em crianças. O objetivo desta pesquisa é identificar biomarcadores para EE.

Objetivos

1. Testar novos biomarcadores candidatos de EE em uma coorte de crianças de 6 a 15 meses de idade em um distrito rural no Paquistão.
2. Estudar as características histopatológicas da mucosa do intestino delgado de crianças com desnutrição moderada a grave da coorte A do estudo e correlacionar os achados com os biomarcadores estudados no objetivo 1.
3. Estudar as características histopatológicas da mucosa do intestino delgado de crianças (bem nutridas ou desnutridas) submetidas a endoscopia digestiva alta para qualquer indicação clínica, por ex. recuperação de corpo estranho, avaliação de sangramento UGI etc., (coorte B) e correlacionar os achados com os biomarcadores de sangue, urina e fezes estudados no objetivo 1.
4. Identificar novos biomarcadores candidatos para EE por meio do estudo da expressão de mRNA na mucosa do intestino delgado de crianças com e sem EE para ampla gama de proteínas envolvidas na inflamação, disfunção hormonal, sistema imunológico e estrutura e função das junções apertadas.

Métodos

Em uma coorte de crianças já acompanhadas quanto ao crescimento e infecções desde o nascimento para o estudo RESPAK em Matiari, Sindh (Coorte A), os investigadores coletarão sangue, urina e fezes aos 6 e 9 meses de idade e testarão biomarcadores, incluindo GLP-2 , Claudin 3, CRP, Reg 1, perfil de citocinas séricas, perfil de aminoácidos plasmáticos, Neopterin e Mieloperoxidase. Esses biomarcadores serão correlacionados com substitutos clínicos de EE, incluindo o escore Z de altura para a idade (HAZ) e o escore Z de peso para a idade (WAZ) de crianças aos 6, 9, 12 e 15 meses de idade, e a mudança no HAZ e WAZ pontuações entre 6, 9, 12 e 15 meses de idade Os investigadores identificarão 20-30 crianças dentro da coorte A que são moderadamente ou gravemente desnutridas e têm história de diarreia frequente ou prolongada aos 10-11 meses de idade, cujo diagnóstico permanece desconhecido apesar de uma avaliação não invasiva abrangente e que não respondem à primeira linha de intervenções nutricionais. Essas crianças serão submetidas à endoscopia digestiva alta na Universidade Aga Khan, de acordo com as diretrizes da Sociedade Americana de Gastroenterologistas (ASGE) para a avaliação de crianças com ITF e diarreia frequente ou prolongada associada(1). As biópsias duodenais obtidas através das endoscopias serão usadas para coloração H&E (padrão de tratamento para diagnosticar doença celíaca, outras causas inflamatórias e autoimunes de enteropatia), bem como pesquisa de EE, incluindo estudo de inflamação, disfunção hormonal e mau funcionamento das junções apertadas em AKU, Universidade de Chicago e Universidade da Virgínia.

Em uma coorte separada de crianças (Coorte B) de 6 a 24 meses de idade que se apresentam aos nossos gastroenterologistas pediátricos colaboradores na Universidade Aga Khan ou no Hospital Infantil de Lahore para endoscopia UGI para qualquer indicação apropriada, biópsias duodenais adicionais e amostras de sangue/urina/fezes serão coletados após consentimento informado. O trabalho feito nessas crianças será como descrito acima.

O RNA será extraído de todo o espécime de biópsia obtido, e os alvos de mRNA que são diferencialmente expressos em crianças com e sem EE serão identificados, para que suas proteínas downstream possam ser identificadas e testadas como biomarcadores candidatos para EE no futuro.

Efeitos adversos

A obtenção de sangue, urina e fezes da criança aos 6 e 9 meses de idade causará desconforto à criança, embora seja improvável qualquer evento adverso grave resultante desses procedimentos. Para indivíduos que não respondem à reabilitação nutricional e nos quais a primeira linha de investigação diagnóstica não é reveladora, a investigação avançada será oferecida de acordo com as diretrizes da ASGE, que incluem endoscopia UGI em casos selecionados. Embora raros, os riscos da endoscopia incluem complicações relacionadas à anestesia geral, perfuração, sangramento e infecção.

Problemas éticos

Além da questão da invasão de privacidade e coleta de sangue, urina e fezes, o maior desafio ético na coorte A é a realização de endoscopia digestiva alta em algumas crianças nas quais a causa da desnutrição não é clara, apesar das investigações e intervenções de primeira linha. Os investigadores acham que essas endoscopias são do interesse dessas crianças, uma vez que a ASGE as recomenda como parte da avaliação em crianças que não conseguem se desenvolver e apresentam sintomas gastrointestinais, como diarreia crônica ou recorrente. As endoscopias podem ajudar a identificar causas inflamatórias, infecciosas ou autoimunes tratáveis ​​de déficit de crescimento nessas crianças.

Os investigadores estão coletando biópsias adicionais para pesquisa durante as endoscopias. Os riscos associados à endoscopia são principalmente com anestesia e procedimento. Fazer biópsias adicionais é relativamente seguro, pois a mucosa GI é um dos órgãos de cicatrização mais rápida do corpo e, essencialmente, nenhum sinal residual da biópsia é deixado após 24 horas do procedimento. As endoscopias no AKU e no hospital infantil serão realizadas por gastroenterologistas pediátricos especializados. No entanto, os investigadores estão bem equipados para lidar com qualquer complicação que possa surgir.

Na coorte B, os investigadores estão fazendo biópsias adicionais de crianças que já estão passando por endoscopias UGI para uma indicação apropriada não relacionada a este estudo. O único risco adicional para os indivíduos da coorte B é a realização de biópsias adicionais, que devem ser mínimas conforme explicado acima.