慢性阻塞性肺疾病 (COPD) 患者的支气管扩张症：预防的作用

研究目的

如前所述，研究计划的目标如下：

• 慢性阻塞性肺病患者支气管扩张患病率的定义。
• 在确定支气管扩张患者后，我们将评估该亚组与非支气管扩张患者相比的病理生理学意义、微生物学和炎症特征。
• 最后，该研究将解决长期吸入类固醇和抗生素治疗对疾病自然史的影响及其病理生理学意义。 为此，本研究将分为两个部分。 在 Ist 部分，将招募 400 名 COPD 患者。 在这些患者中，我们打算使用 CT 螺旋扫描评估支气管扩张的患病率。 我们还将通过实时 PCR 和 ELIspot 技术检测细菌定植，并通过非侵入性方法（呼出气冷凝物）比较有和没有支气管扩张的患者的气道炎症。

COPD合并支气管扩张患者：

在这个人群中，我们将研究不同“预防”的效果，即大环内酯和吸入类固醇。

拟议的干预措施的详细信息 稳定期慢性阻塞性肺病 患者将在早上到诊所进行登记，并提供书面知情同意书。 在就诊期间，将记录病史，受试者将在基线和沙丁胺醇 200 mcg 后进行身体检查和肺功能测试。 还将进行 CT 扫描、呼出气冷凝液和静脉穿刺。 将获得痰样本用于细菌定植评估。

呼吸评估：

将使用 Fleish No. 3 加热呼吸速度描记器进行肺功能测试；体积描记器测量、胸腔气体体积 (TGV)、残余体积 (RV)、总肺活量 (TLC) 将使用身体体积描记器（Werner Gut，Basle，Switzerland）进行评估，并在恒定体积（850L）下进行电子 BTPS 补偿. 将执行 DLCO 测定。

CT 扫描 所有执行的多层 CT (MSCT) 扫描都将由 UO 4 集中分析。 将遵循以下协议

1. MSCT 在 TLC 吸气时使用三个预定水平（主动脉弓、气管隆突、右基底总静脉）在 RV 每 10 + 3 个呼气切片切片 1 mm
2. 技术参数：120 kV，220 mA，滤骨，FOV包括双肺，肺实质窗（-600/1600 HU）
3. 所有 CT 将保存在 CD ROM 上 两位放射科医生将分析同一张 CT，任何差异将通过协商一致解决

支气管扩张的诊断和评估将根据 Webb 等人进行。 (1):

评估将逐叶进行，包括舌叶（总叶 = 6）

1. 肺叶底部的支气管扩张：0、1（< 25% 的肺叶）、2 (25-50%)、3 (>50%) - MAX TOT 18
2. 支气管扩张的严重程度和种类以及半定量，将直径与邻近动脉的直径进行比较：0、1（支气管直径等于 100-200% 动脉直径）、2 (200-300%)、3 (> 300%) - 最大 TOT 18
3. 支气管壁厚度：0、1（厚度 < 动脉直径的 50%）、2（50-100%）、3（管腔完全消失或水气水平）- MAX TOT 18
4. 肺气肿的评估（三个层面的视觉评分（灵感）（主动脉弓、隆突、静脉）
5. 呼气时空气滞留的评估（同上）
6. 大疱
7. 磨砂玻璃区域（通过视觉分数扩展）
8. 毛细支气管炎：流行部位、肺叶受累、严重程度（0、1、2、3）
9. 肺动脉直径（如果 > 2.9 cm 则为病理学）
10. 其他特性

呼出气冷凝物：

将使用冷凝器收集呼出的呼吸冷凝液，该冷凝器允许非侵入性地收集呼气中的非气态成分（EcoScreen，Jaeger，德国）。 受试者戴上鼻夹时，通过连接到进气口的喉舌进行潮汐式呼吸 8 分钟。 咬嘴也用作唾液收集器。 收集大约 1 ml 的呼吸冷凝液并储存在 -70°C。 IL-6、IL-8、TNF-α 和半胱氨酰-白三烯 (cys-LT) 将通过特异性酶免疫测定 (EIA)（Cayman Chemical，密歇根州安阿伯市）。 此外，如前所述 (2)，将对 UO1 招募的患者子集进行蛋白质组学分析；简而言之，将进行一维和二维电泳，并且为了定性评估和质谱分析，凝胶将用硝酸银染色，在敏化步骤中使用或不使用戊二醛，在浸渍溶液中使用甲醛。 将使用 Image J 1.29x (W. Rasband, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland) 用于一维凝胶，PDQUEST (Biorad, Hercules, California) 用于二维凝胶。

血清样本：

血清等分试样一式两份并储存在 - 20°C 直至分析时间。 IL-6、IL-8、TNF-α 和半胱氨酰-白三烯 (cys-LT) 将通过特异性酶免疫测定 (EIA)（Cayman Chemical, Ann Arbor, MI）测量。

还将测量 C 反应蛋白和降钙素原。 (3) UO 1 体外酶联免疫斑点 (ELISPOT) 测定是检测和量化抗原特异性 T 细胞反应的最灵敏工具，可以检测和计数产生一种或多种细胞因子以响应特定抗原的 T 细胞. 该技术已被用于检测感染性疾病中少量的抗原特异性 T 细胞，特别是细胞内病原体，如结核分枝杆菌。 ELISPOT 技术正在成为监测包括 HIV 感染在内的许多传染病的标准参考，并且越来越多地用于高级临床免疫学应用，例如检测对癌基因肽的抗原特异性 T 细胞免疫反应。

在拟议项目的背景下，ELISPOT 技术将用于使用非结核分枝杆菌和其他细胞内细菌（如肺炎支原体）的肽库检测全身（血液）和局部（支气管肺泡灌洗）抗原特异性反应的存在)、细菌（如假单胞菌属）和真菌（如曲霉属）。 ELISPOT 测试将对全血样本（在 Ficoll 分离外周单核细胞后）和支气管肺泡细胞样本进行，测量在与特定抗原肽池孵育过夜后产生干扰素-γ 的 T 细胞数量。 (4-8)

痰液采集：

将从所有患者获得自发痰样本。 或者根据 Pizzichini 等人 (9) 收集诱导痰。 总之，诱导痰是在使用超声波雾化器（Ultraneb 2000；DeVilbiss Healthcare Inc，Somerset，PS，USA）吸入 3% 的高渗盐水 20 分钟后获得的。只有 Murray-Washington 的 IV 或 V 度痰样本将处理分类 (10)。 痰液样本将在 -70°C 下冷冻，用于使用 PCR（定性分析）和实时 PCR（定量分析）技术检测细菌 DNA。

将使用 UO1 中使用的标准方案检测以下细菌：流感嗜血杆菌、卡他莫拉氏菌、肺炎链球菌、肺炎链球菌

铜绿假单胞菌、肺炎支原体、肺炎衣原体。 将使用标准微生物技术培养等分试样 患者 将在 UO 1、2、3 e 5 招募 400 名患者。 所有 CT 扫描都将在 UO 4 收集和检查。UO2 将以双盲方式作为第二观察员；任何分歧都将通过协商一致解决。

一组患有稳定 COPD 的患者 (n=15) 和一组患有 COPD 和支气管扩张的患者 (n=15) 将接受支气管镜检查和活组织检查。 受试者将预先服用阿托品并用利多卡因局部麻醉。

支气管镜检查将使用可弯曲的纤维支气管镜进行。 支气管活检将通过支气管镜用标准镊子从右下叶基底段支气管的隆突处进行。 从这个区域，每个患者将获得两个标本。 获得的支气管活检将准备用于电子和光学显微镜分析（UO3 和 UO 1）。

样本量：我们预计支气管扩张症的患病率至少为 30%，这意味着研究的第二步将包括 120 名患者 (11)

患有支气管扩张症的慢性阻塞性肺病患者：

在这个人群中，我们将研究不同“预防”的效果，即大环内酯和吸入类固醇。 人口将被跟踪 12 个月。

以下程序将每 3 个月在每次恶化时执行：

临床评估、呼出气冷凝液、血清采样、痰液采集。

将对生物样本执行所有先前描述的技术以及肾功能和肝功能测试（安全性）。

将进行痰培养以评估细菌菌群和耐药模式。

研究设计：

120 名患者将被随机分为 3 组（40 名患者）接受：

1. 护理标准
2. 阿奇霉素 500 mg OD，每周 3 天（周一、周三、周五），持续 6 个月，然后吸入类固醇（氟替卡松 500 ug bid），持续 6 个月
3. 吸入类固醇（氟替卡松 500 ug bid）6 个月，然后每周 3 天（周一、周三、周五）阿奇霉素 500 mg OD，持续 6 个月

终点：

基本的

• 治疗对支气管炎症参数的影响 次要
• 治疗对加重频率的影响
• 治疗对肺功能的影响

样本量：

对于 TNFα、IL6、IL8 和半胱氨酰-白三烯中的至少一种，我们可以预期治疗和未治疗患者之间有 40% 的差异。 在这种情况下，我们需要 35 名接受治疗的患者（每只手臂）和 35 名未接受治疗的患者，α 误差为 0.05，β 为 0.1。