Bronkiektasi hos patienter med kronisk obstruktiv lungesygdom (KOL): Rolle af profylakse

UNDERSØGELSENS MÅL

Som tidligere beskrevet er formålet med forskningsprogrammet følgende:

• definition af forekomst af bronkiektasi hos patienter ramt af kronisk obstruktiv lungesygdom.
• Efter identifikation af bronkiektasipatienter vil vi evaluere de patofysiologiske implikationer og mikrobiologiske og inflammatoriske træk ved denne undergruppe sammenlignet med ikke-bronkiektasipatienter.
• Endelig vil forskningen behandle virkningerne af langtidsbehandlinger med inhalerede steroider og antibiotika på sygdommens naturlige historie og deres patofysiologiske implikationer. Til disse formål vil undersøgelsen blive opdelt i to sektioner. I Ist-sektionen vil der blive rekrutteret 400 patienter med KOL. Hos disse patienter har vi til hensigt at vurdere forekomsten af ​​bronkiektasi ved hjælp af en CT-spiralscanning. Vi vil også opdage bakteriel kolonisering ved real-time PCR og ELIspot teknik, og luftvejsinflammation ved en ikke-invasiv metode (udåndet ånde kondensat), der sammenligner patienter med og uden bronkiektasi.

KOL-patienter med bronkiektasi:

I denne population vil vi studere effekten af ​​forskellige "profylakse", dvs. makrolider og inhalerede steroider.

Detaljer om de foreslåede interventioner STABIL KOL Patienten vil møde til klinikken om morgenen for tilmelding og give skriftligt informeret samtykke. Under besøget vil sygehistorien blive registreret, og forsøgspersonerne vil gennemgå en fysisk undersøgelse og lungefunktionstest ved baseline og efter salbutamol 200 mcg. Der vil også blive udført CT-scanning, udåndingskondensat og venopuncturen. Sputumprøver vil blive indhentet til vurdering af bakteriel kolonisering.

Respiratorisk vurdering:

Lungefunktionstestning vil blive udført ved hjælp af en Fleish nr. 3 opvarmet pneumotakograf; de plethysmografiske målinger, thoraxgasvolumen (TGV), restvolumen (RV), total lungekapacitet (TLC), vil blive vurderet ved hjælp af en kropsplethysmograf (Werner Gut, Basel, Schweiz) med elektronisk BTPS-kompensation ved et konstant volumen (850L) . DLCO-bestemmelse vil blive udført.

CT-scanning Al den udførte multislice CT (MSCT)-scanning vil blive analyseret centralt af UO 4 . Følgende protokol vil blive fulgt

1. MSCT i inspiration ved TLC med skive på 1 mm hver 10. + 3 ekspiratoriske skiver ved RV ved hjælp af tre forudbestemte niveauer (aortabue, tracheal carina, højre basal almindelig vene)
2. Tekniske parametre: 120 kV, 220 mA, filterknogle, FOV inklusive både lunge-, lungeparenkymvindue (-600/1600 HU)
3. Al CT vil blive gemt på CD-rom To radiologer vil analysere den samme CT, hver uoverensstemmelse vil blive løst ved konsensus

Diagnosen og evalueringen af ​​bronkiektasi vil blive udført ifølge Webb et al. (1):

Evalueringen vil blive udført lap for lap inklusive lingula (totale lapper = 6)

1. bronkiektasisforlængelse på lobar base: 0, 1 (< 25% af lappen), 2 (25-50%), 3 (>50%) - MAX TOT 18
2. sværhedsgrad og art af bronkiektasi og semi-kvantitativ, der sammenligner diameteren med den tilstødende arterie: 0, 1 (bronkial diameter lig med 100-200% arteriediameter), 2 (200-300%), 3 (> 300%) - MAX TOT 18
3. Tykkelse af bronkialvægge: 0, 1 (tykkelse < 50 % arteriediameter), 2 (50-100 %), 3 (fuldstændig udslettelse af lumen eller Hydro-air niveauer) - MAX TOT 18
4. Evaluering af emfysem (visuel score på tre niveauer (inspiration) (aortabue, carina, vene)
5. Evaluering af luftindfangning ved udløb (idem)
6. Bullae
7. Slibede glasområder (forlængelse ved visuel snit)
8. bronchiolitis: udbredt sted, lobar involvering, sværhedsgrad (0,1,2,3)
9. Pulmonal arteriediameter (patologisk hvis > 2,9 cm)
10. Andre funktioner

Udåndet ånde kondensat:

Udåndingskondensat vil blive opsamlet ved at bruge en kondensator, som muliggør ikke-invasiv opsamling af ikke-gasformige komponenter i udåndingsluften (EcoScreen, Jaeger, Tyskland). Forsøgspersoner trækker vejret gennem et mundstykke forbundet til indløbet i 8 minutter, mens de bærer en næseklemme. Mundstykket bruges også som spytfælde. Ca. 1 ml udåndingskondensat opsamles og opbevares ved -70°C. IL-6, IL-8, TNF-a og cysteinyl-leukotriener (cys-LT'er) vil blive målt ved specifikke enzymimmunoassays (EIA) (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI). Desuden vil proteomisk analyse blive udført på undergruppen af ​​patienter indskrevet af UO1 som tidligere rapporteret (2); kort fortalt vil der blive udført en-dimensionel og to-dimensionel elektroforese og til kvalitativ evaluering og massespektrometri analyse vil gelerne blive farvet med sølvnitrat, med eller uden glutaraldehyd i sensibiliseringstrinnet og formaldehyd i imprægneringsopløsningen. Spotvolumen vil blive beregnet ved hjælp af Image J 1,29x (W. Rasband, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland) for endimensionelle geler og med PDQUEST (Biorad, Hercules, Californien) for todimensionelle geler.

Serumprøver:

Serumalikvoter vil blive arrangeret i duplikat og opbevaret ved -20°C indtil analysetidspunktet. IL-6, IL-8, TNF-a og cysteinyl-leukotriener (cys-LT'er) vil blive målt ved specifikke enzymimmunoassays (EIA) (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI).

C-reaktivt protein og procalcitonin vil også blive målt.(3) UO 1 Ex-vivo Enzyme-Linked ImmunoSPOT (ELISPOT) assay er det mest følsomme værktøj til at detektere og kvantificere den antigenspecifikke T-celle respons og kan detektere og optælle T-celler, der producerer en eller flere cytokiner som reaktion på specifikke antigener . Denne teknik er allerede blevet brugt til at detektere et lavt antal antigenspecifikke T-celler i infektionssygdomme, med særlig vægt på intracellulære patogener såsom Mycobacterium tuberculosis. ELISPOT-teknikken er ved at blive en standardreference til overvågning af mange infektionssygdomme, herunder HIV-infektion, og bliver mere og mere brugt i avancerede kliniske immunologiske applikationer, såsom påvisning af en antigen-specifik T-celle-immunrespons på onkogen-peptider.

I forbindelse med det foreslåede projekt vil ELISPOT-teknologien blive brugt til at detektere tilstedeværelsen af ​​en systemisk (blod) og lokal (bronkoalveolær lavage) antigen-specifik respons ved hjælp af peptidpuljer af ikke-tuberkuløse mykobakterier og andre intracellulære bakterier (såsom Mycoplasma pneumoniae) ), bakterier (såsom Pseudomonas spp) og svampe (såsom Aspergillus-arter). ELISPOT-testene vil blive udført på prøver af fuldblod (efter Ficoll-separation af perifere mononukleære celler) og bronchoalveolære celler, der måler antallet af T-celler, der producerer interferon-gamma efter en inkubation natten over med de specifikke antigene peptidpuljer. (4-8)

Sputum samling:

En prøve af spontant sputum vil blive udtaget fra alle patienter. Alternativt vil induceret sputum ifølge Pizzichini et al (9) blive opsamlet. Sammenfattende opnås induceret sputum efter inhalation af hypertonisk saltvandsvand på 3 % i 20 minutter ved hjælp af en ultralydsforstøver (Ultraneb 2000; DeVilbiss Healthcare Inc, Somerset, PS, USA). Kun prøver af sputum grad IV eller V fra Murray-Washington klassifikation (10) vil blive behandlet. En opspytprøve vil blive frosset ved -70°C til bakteriel DNA-påvisning ved brug af PCR (kvalitativ analyse) og real-time PCR (kvantitativ analyse) teknikker.

Følgende bakterier vil blive påvist ved brug af standardprotokol i brug i UO1: H. influenzae, M. catarrhalis, S. pneumoniae, P.

aeruginosa, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae. En alikvot vil blive dyrket ved hjælp af standard mikrobiologiske teknikker. Patienter 400 patienter vil blive rekrutteret på UO 1,2,3 e 5. Al CT-scanning vil blive indsamlet og undersøgt ved UO 4. UO2 vil fungere som anden observatør på en dobbeltblind måde; enhver uoverensstemmelse vil blive løst ved konsensus.

En undergruppe af patienter med stabil KOL (n=15) og en undergruppe af patienter med KOL og bronkiektasi (n=15) vil gennemgå bronkoskopi med biopsiopsamling. Forsøgspersoner vil blive præmedicineret med atropin og bedøvet topisk med lidocain.

Bronkoskopi vil blive udført med et fleksibelt fiberoptisk bronkoskop. Bronchiale biopsier vil blive taget gennem bronkoskopet med standard pincet fra carina af basalsegmentet bronchus i højre underlap. Fra dette område vil der blive udtaget to prøver fra hver patient. De opnåede bronkiale biopsier vil blive forberedt til elektronisk og lysmikroskopianalyse (UO3 og UO 1).

Prøvestørrelse: vi kan forvente mindst 30 % forekomst af bronkiektasi, hvilket betyder, at 120 patienter skal inkluderes i undersøgelsens andet trin (11)

KOL-PATIENTER MED BRONKIEKTASIS:

I denne population vil vi studere effekten af ​​forskellige "profylakse", dvs. makrolid og inhalerede steroider. Befolkningen vil blive fulgt i 12 måneder.

Følgende procedure vil blive udført hver 3. måned og ved hver eksacerbation:

Klinisk vurdering, Udåndingskondensat, Serumprøvetagning, Sputumopsamling.

På biologiske prøver vil alle de tidligere beskrevne teknikker samt nyre- og leverfunktionstest (sikkerhed) blive udført.

Sputumkultur vil blive udført for at vurdere bakterieflora og resistensmønstre.

Design af undersøgelsen:

120 patienter vil blive randomiseret i 3 grupper (40 punkter) for at modtage:

1. Standard for pleje
2. azithromycin 500 mg OD 3 dage om ugen (mandag, onsdag, fredag) i 6 måneder og derefter inhalerede steroider (fluticason 500 ug bid) i 6 måneder
3. inhalerede steroider (fluticason 500 ug bid) i 6 måneder og derefter azithromycin 500 mg OD 3 dage om ugen (mandag, onsdag, fredag) i 6 måneder

Slutpunkter:

PRIMÆR

• effekter af behandlinger på bronkial inflammation parametre SEKUNDÆR
• effekter af behandlinger på eksacerbationshyppigheden
• virkninger af behandlinger på lungefunktionen

Prøvestørrelse:

Vi kan forvente en forskel på 40 % mellem behandlede og ikke-behandlede patienter for mindst én blandt TNFa, IL6, IL8 og cysteinyl-leukotriener. I dette tilfælde har vi brug for 35 behandlede patienter (for hver arm) og 35 ikke-behandlede patienter for en alfa-fejl på 0,05 og en beta på 0,1.