Bronchiectasia krónikus obstruktív tüdőbetegségben (COPD) szenvedő betegeknél: A profilaxis szerepe

A VIZSGÁLAT CÉLJA

Az előzőekben leírtak szerint a kutatási program céljai a következők:

• a bronchiectasia prevalenciájának meghatározása krónikus obstruktív tüdőbetegségben szenvedő betegeknél.
• A bronchiectasis betegek azonosítása után értékeljük ezen alcsoport patofiziológiai vonatkozásait, mikrobiológiai és gyulladásos jellemzőit, összehasonlítva a nem bronchiectasisos betegekkel.
• Végül a kutatás foglalkozik az inhalációs szteroidokkal és antibiotikumokkal végzett hosszú távú kezelések hatásaival a betegség természetes történetére és patofiziológiai következményeire. Ebből a célból a tanulmány két részre oszlik. Az I. szekcióban 400 COPD-s beteget vesznek fel. Ezeknél a betegeknél a bronchiectasis prevalenciáját CT spirál szkennelés segítségével kívánjuk felmérni. A bakteriális kolonizációt valós idejű PCR és ELIspot technikával, a légúti gyulladást pedig non-invazív módszerrel (kilégzési kondenzátum) is kimutatjuk, összehasonlítva a bronchiectasisban szenvedő és nem szenvedő betegeket.

Bronchiectasisban szenvedő COPD-s betegek:

Ebben a populációban a különböző "profilaxisok", azaz a makrolidok és az inhalációs szteroidok hatását fogjuk tanulmányozni.

A javasolt beavatkozások részletei STABIL COPD A beteg reggelente jelentkezik a klinikán, és írásos beleegyezését adja. A látogatás során a kórelőzményt rögzítik, és az alanyok fizikális vizsgálaton és tüdőfunkciós vizsgálaton esnek át a kiindulási és a 200 mcg szalbutamol után. CT-vizsgálatot, kilélegzett levegő kondenzátumot és a vénapunkciót is elvégzik. Köpetmintákat vesznek a bakteriális kolonizáció értékeléséhez.

Légzési vizsgálat:

A tüdőfunkciós vizsgálatot Fleish No. 3 fűtött pneumotachográf segítségével végzik el; a pletizmográfiás méréseket, a mellkasi gáztérfogatot (TGV), a maradék térfogatot (RV), a teljes tüdőkapacitást (TLC) egy test pletizmográf (Werner Gut, Basel, Svájc) segítségével értékelik, állandó térfogatú (850 liter) elektronikus BTPS kompenzációval. . A DLCO meghatározása megtörténik.

CT-vizsgálat Az összes elvégzett többszeletű CT (MSCT) vizsgálatot központilag elemzi az UO 4 . A következő protokollt kell követni

1. MSCT inspirációban TLC-n 1 mm-es szelettel 10 + 3 kilégzési szeletben RV-nél három előre meghatározott szinten (aortaív, légcső carina, jobb bazális közös véna)
2. Műszaki paraméterek: 120 kV, 220 mA, szűrőcsont, FOV mindkét tüdővel, tüdőparenchima ablak (-600/1600 HU)
3. Az összes CT-t CD-re mentjük. Két radiológus ugyanazt a CT-t elemzi, minden eltérést konszenzussal oldanak meg

A bronchiectasis diagnózisát és értékelését Webb et al. (1):

Az értékelés lebenyenként történik, beleértve a lingulát is (összes lebeny = 6)

1. bronchiectasis kiterjesztése lebeny alapon: 0, 1 (a lebeny < 25%-a), 2 (25-50%), 3 (>50%) - MAX TOT 18
2. a bronchiectasis súlyossága és fajtája és félkvantitatív, összehasonlítva az átmérőt a szomszédos artéria átmérőjével: 0, 1 (a hörgő átmérője megegyezik az artéria átmérőjének 100-200%-ával), 2 (200-300%), 3 (> 300%) - MAX. TOT 18
3. A hörgőfalak vastagsága: 0, 1 (vastagság < 50% artériaátmérő), 2 (50-100%), 3 (a lumen vagy a hidro-levegő szint teljes eltüntetése) - MAX TOT 18
4. Emfizéma értékelése (vizuális pontszám három szinten (inspiráció) (aortaív, carina, véna)
5. A levegő becsapódásának értékelése a lejáratkor (idem)
6. Bullae
7. Köszörült üvegfelületek (bővítés vizuális pontszámmal)
8. bronchiolitis: elterjedt hely, lebeny érintettsége, súlyossága (0,1,2,3)
9. A tüdőartéria átmérője (kóros, ha > 2,9 cm)
10. Más funkciók

Kilélegzett levegő kondenzátum:

A kilélegzett lehelet kondenzátumát kondenzátorral gyűjtik össze, amely lehetővé teszi a kilégzési levegő nem gáznemű összetevőinek non-invazív összegyűjtését (EcoScreen, Jaeger, Németország). Az alanyok a bemenethez csatlakoztatott szájrészen keresztül lélegzik 8 percig, miközben orrcsipet viselnek. A fúvókát nyálcsapdaként is használják. Körülbelül 1 ml levegős kondenzátumot gyűjtünk össze, és -70 °C-on tároljuk. Az IL-6, IL-8, TNF-a és a ciszteinil-leukotriének (cys-LTs) specifikus enzim-immunoassay-vel (EIA) (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI). Ezenkívül proteomikai analízist végeznek az UO1-be bevont betegek azon alcsoportján, amint azt korábban közöltük (2); röviden egy- és kétdimenziós elektroforézist végeznek, és kvalitatív értékeléshez és tömegspektrometriás analízishez a géleket ezüst-nitráttal festik meg, glutáraldehiddel vagy anélkül az érzékenyítési lépésben és formaldehiddel az impregnáló oldatban. A szpot térfogatát a J kép 1,29x (W. Rasband, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland) az egydimenziós gélekhez és a PDQUEST-tel (Biorad, Hercules, California) a kétdimenziós gélekhez.

Szérumminták:

A szérum alikvot részeket két párhuzamosban rendezzük el, és -20 °C-on tároljuk az elemzés időpontjáig. Az IL-6, IL-8, TNF-a és a ciszteinil-leukotriének (cys-LT) mennyiségét specifikus enzim immunoassay-vel (EIA) mérik (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI).

A C-reaktív fehérjét és a prokalcitonint is mérni fogják.(3) UO 1 Az ex vivo enzimhez kötött immunoSPOT (ELISPOT) vizsgálat a legérzékenyebb eszköz az antigén-specifikus T-sejt válasz kimutatására és mennyiségi meghatározására, valamint képes kimutatni és számba venni azokat a T-sejteket, amelyek egy vagy több citokint termelnek specifikus antigénekre válaszul. . Ezt a technikát már alkalmazták kis számú antigén-specifikus T-sejt kimutatására fertőző betegségekben, különös tekintettel az intracelluláris kórokozókra, például a Mycobacterium tuberculosisra. Az ELISPOT technika számos fertőző betegség, köztük a HIV-fertőzés monitorozásának standard referenciajává válik, és egyre inkább alkalmazzák a fejlett klinikai immunológiai alkalmazásokban, például az onkogén peptidekre adott antigén-specifikus T-sejtes immunválasz kimutatásában.

A javasolt projekt keretében az ELISPOT technológiát szisztémás (vér) és lokális (bronchoalveoláris mosás) antigén-specifikus válasz jelenlétének kimutatására használják nem tuberkulózisos mikobaktériumok és más intracelluláris baktériumok (például Mycoplasma pneumoniae) peptidkészleteinek felhasználásával. ), baktériumok (például Pseudomonas spp) és gombák (például Aspergillus fajok). Az ELISPOT-teszteket teljes vérmintákon (a perifériás mononukleáris sejtek Ficoll-elválasztása után) és bronchoalveoláris sejteken végzik el, megmérve az interferon-gamma-t termelő T-sejtek számát egy éjszakán át tartó inkubációt követően a specifikus antigén peptidkészletekkel. (4-8)

Köpetgyűjtés:

Minden betegtől mintát vesznek a spontán köpetből. Alternatív megoldásként Pizzichini és munkatársai (9) szerint indukált köpet is összegyűjtjük. Összefoglalva, az indukált köpet 3%-os hipertóniás sós víz 20 perces ultrahangos porlasztóval történő inhalálása után (Ultraneb 2000; DeVilbiss Healthcare Inc., Somerset, PS, USA) képződik. Csak a Murray-Washington IV. vagy V. fokú köpetminták. besorolás (10) kerül feldolgozásra. A köpetmintát -70 °C-on lefagyasztják a bakteriális DNS kimutatásához PCR (kvalitatív elemzés) és valós idejű PCR (kvantitatív elemzés) technikák alkalmazásával.

Az UO1-ben használt standard protokollal a következő baktériumokat mutatják ki: H. influenzae, M. catarrhalis, S. pneumoniae, P.

aeruginosa, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae. Egy alikvot részt standard mikrobiológiai technikákkal tenyésztenek ki. Betegek 400 beteget vesznek fel az UO 1,2,3 e 5-ben. Az összes CT-vizsgálatot összegyűjtik és megvizsgálják az UO 4-ben. Az UO2 kettős vak módszerrel második megfigyelőként fog szolgálni; minden eltérést konszenzussal oldanak meg.

A stabil COPD-ben szenvedő betegek egy alcsoportját (n=15), valamint a COPD-ben és bronchiectasisban szenvedő betegek egy alcsoportját (n=15) biopsziás gyűjtéssel hörgőszkópiával végzik. Az alanyokat atropinnal premedikálják, és helyileg lidokainnal érzéstelenítik.

A bronchoszkópiát rugalmas fiberopticus bronchoszkóppal végezzük. A hörgőbiopsziát a bronchoszkópon keresztül standard csipesszel veszik a jobb alsó lebeny hörgő bazális szegmensének carinájából. Erről a területről minden betegből két mintát vesznek. A kapott bronchiális biopsziákat elektronikus és fénymikroszkópos elemzéshez (UO3 és UO 1) készítik elő.

Mintanagyság: legalább 30%-os bronchiectasis prevalenciával számolhatunk, ami azt jelenti, hogy 120 beteget vonnak be a vizsgálat második lépésébe (11)

Bronchiektázisban szenvedő COPD-BETEGEK:

Ebben a populációban a különböző „profilaxis”, azaz a makrolid és az inhalációs szteroidok hatását vizsgáljuk. A lakosságot 12 hónapig követik nyomon.

A következő eljárást 3 havonta és minden exacerbáció esetén hajtják végre:

Klinikai értékelés, Kilélegzett levegő kondenzátum, Szérum mintavétel, Köpetgyűjtés.

A biológiai mintákon az összes korábban leírt technikát, valamint a vese- és májfunkciós vizsgálatokat (biztonsági) elvégzik.

Köpettenyésztést végeznek a baktériumflóra és a rezisztencia mintázatának felmérésére.

A tanulmány kialakítása:

120 beteget véletlenszerűen 3 csoportba osztanak (40 pont), hogy megkapják:

1. Az ellátás színvonala
2. Azitromicin 500 mg OD heti 3 napon (hétfőn, szerdán, pénteken) 6 hónapig, majd inhalációs szteroidok (flutikazon 500 ug naponta kétszer) 6 hónapon keresztül
3. inhalációs szteroidok (500 ug naponta kétszer flutikazon) 6 hónapig, majd 500 mg azitromicin OD heti 3 napon (hétfőn, szerdán, pénteken) 6 hónapon keresztül

Végpontok:

ELSŐDLEGES

• kezelések hatása a hörgőgyulladás paramétereire MÁSODLAGOS
• a kezelések hatása az exacerbációk gyakoriságára
• a kezelések hatása a tüdőfunkcióra

Minta nagysága:

A TNFa, IL6, IL8 és ciszteinil-leukotriének közül legalább egy esetében 40%-os különbségre számíthatunk a kezelt és a nem kezelt betegek között. Ebben az esetben 35 kezelt betegre (mindegyik karra) és 35 nem kezelt betegre van szükségünk a 0,05-ös alfa-hibához és a 0,1-es béta-értékhez.