脂肪酸对全身和皮下细胞因子的影响 (TNF4)

1. 一般的

   根据纳入和排除标准，将选择受试者在研究访问 1 期间参与该方案。 随后，他们将被随机分配在研究访视的 28 小时内持续静脉输注 0.9% 生理盐水或脂质-肝素溶液（Intralipid 20%，40 ml/h，Fresenius Kabi 加肝素 250U/h，IMMUNO Baxter AG） V2 和 V3。 对于第 3 次研究访视，在上一次访视中首次接受 0.9% 生理盐水的受试者将静脉注射 20% 的脂肪乳，反之亦然。

2. 参观程序

   2.1.放映日（访问 1）

   志愿者将收到有关研究的总体信息并签署书面知情同意书。 每个受试者都会根据纳入顺序获得一个分配编号。 应进行体格检查和抽血，并将数据记录在病例报告表（CRF）中，具体如下：

   • 纳入/排除标准
   • 人口统计数据、病史和合并用药
   • 身体检查
   • 生命体征
   • 体重和身高、体重指数（BMI）、腰围和臀围以及腰臀比
   • 血细胞计数、血细胞比容、血红蛋白、C反应蛋白、游离脂肪酸、胆固醇、甘油三酯、钠、钾、钙
   • 对有生育能力的女性受试者进行妊娠试验。

   2.2.学习日（访问 2 和 3）

   在每次研究访问期间，受试者应在禁食 12 小时过夜后于早上 7:00 到达 ZMF（格拉茨医科大学医学研究中心）。 将在每个研究日的早晨对有生育能力的女性受试者进行妊娠试验。 将两根短的聚乙烯导管插入双臂的肘前静脉。 第一个静脉插管将专门用于血液采样，手臂将被放置在恒温箱（热箱）中，在整个研究期间保持 50°C 的温度。 第二个静脉插管将用于输注生理盐水或脂质-肝素溶液和菊粉。

   上午 8:00，将开始输注生理盐水或脂肪乳剂溶液。 在同一时间点，将开始通过注射器输注泵连续输注菊糖，推注剂量为 50mg/Kg，并维持在 0.250 x 肌酸酐清除率 mg/min 的连续速率，直至研究期结束。

   上午 11:00，OFM 导管将插入每个受试者的脐周区域。 为了防止从皮下组织取样的重要延迟，导管的传入回路将预先充满灌注溶液。 8 毫升无菌等渗溶液（ELO MEL isoton，Fresenius Kabi，奥地利）通常用作静脉输液，添加 2.0ml 先前从每位志愿者中提取并在直接无菌条件下制备的自体血清，将用作 OFM 导管的灌注溶液. 蠕动泵将在 12:00 AM 开始运行，以 1µl/min 的灌注速率（推拉模式）注入灌注溶液，直到第二天凌晨 12:00。 来自皮下组织的流出物样本将以规则的时间间隔收集并且静脉血样将平行进行。

   在整个研究期间，受试者将保持禁食状态。 研究程序结束后，他们应在研究中心设施内停留四个小时的观察期。 此时他们将接受完整的膳食，并抽取额外的血样以获取血糖和 aPTT（活化的部分凝血活酶时间）。 在允许志愿者离开之前，必须确保正常值。

3. 测量

3.1.细胞因子

将使用基于多重流式细胞术微珠的 ELISA 测定法（LUMINEX®100s 系统，美国德克萨斯州 Luminex 公司）测量流出物和血清样品中的细胞因子浓度。 此方法将访问以下基板：

• C反应蛋白
• 白细胞介素 6 (IL-6)
• 白细胞介素 10 (IL-10)
• CCL2/MCP-1
• 丝氨酸蛋白酶抑制剂 E1/PAI-1
• 肿瘤坏死因子 α (TNF-α)
• 脂联素

3.2.胰岛素

流出物和血浆样品中的胰岛素浓度将由 Joanneum 研究实验室使用固相两点 ELISA（Mercodia，乌普萨拉，瑞典）测量。

3.3.菊粉

菊粉将由 Joanneum 研究实验室使用完全酶法进行测量。

3.4.葡萄糖

使用两个 Beckman 葡萄糖分析仪 2 (Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA) 测量动脉血样中的葡萄糖浓度，一式两份。

3.5. 非酯化脂肪酸 (NEFA)

将使用比色法和酶促法测量血浆中的 NEFA 浓度。