Влияние жирных кислот на системные и подкожные цитокины (TNF4)

1. Общий

   Субъекты будут отобраны для участия в протоколе во время исследовательского визита 1 в соответствии с критериями включения и исключения. Впоследствии они будут случайным образом распределены для получения непрерывной внутривенной инфузии 0,9% физиологического раствора или липидно-гепаринового раствора (Интралипид 20%, 40 мл/ч, Фрезениус Каби плюс гепарин 250 ЕД/ч, ИММУНО Бакстер АГ) в течение 28 часов во время учебных визитов. V2 и V3. Во время исследовательского визита 3 субъекты, которые впервые получили 0,9% физиологический раствор во время предыдущего визита, получат внутривенно 20% интралипид и наоборот.

2. Процедуры посещения

   2.1. День просмотра (посещение 1)

   Добровольцы получат общую информацию об исследовании и подпишут письменное информированное согласие. Каждый субъект получит номер присвоения в соответствии с последовательностью включения. Физический осмотр и забор крови должны быть выполнены, и данные будут записаны в форму отчета о болезни (CRF) следующим образом:

   • Критерии включения/исключения
   • Демографические данные, история болезни и сопутствующие лекарства
   • Физикальное обследование
   • Жизненно важные признаки
   • Масса тела и рост, индекс массы тела (ИМТ), окружность талии и бедер и соотношение талии и бедер
   • Анализ крови, гематокрит, гемоглобин, С-реактивный белок, свободные жирные кислоты, холестерин, триглицериды, натрий, калий, кальций
   • Тест на беременность для женщин детородного возраста.

   2.2. Учебный день (посещение 2 и 3)

   Во время каждого исследовательского визита субъекты должны прибывать в 7:00 утра в ZMF (Центр медицинских исследований, Медицинский университет Граца) после 12-часового ночного голодания. Тест на беременность для женщин детородного возраста будет проводиться утром каждого дня исследования. Два коротких полиэтиленовых катетера будут вставлены в локтевые вены обеих рук. Первая венозная канюля будет использоваться исключительно для забора крови, а руку поместят в терморегулируемый бокс (Hot-Box), который будет поддерживаться при температуре 50°C в течение всего периода исследования. Вторая венозная канюля будет использоваться для инфузии физиологического раствора или липидно-гепаринового раствора и инулина.

   В 8:00 начинают инфузию физиологического раствора или раствора интралипидов. В то же время будет начата непрерывная инфузия инулина с помощью шприцевого инфузионного насоса с болюсной дозой 50 мг/кг и будет поддерживаться непрерывная скорость 0,250 x клиренс креатинина мг/мин до конца периода исследования.

   В 11:00 катетеры OFM будут вставлены в околопупочную область каждого субъекта. Во избежание значительных задержек при взятии проб из подкожной клетчатки приводящая петля для катетера будет предварительно заполнена раствором перфузата. Восемь миллилитров стерильного изотонического раствора (изотон ELO MEL, Fresenius Kabi, Австрия), обычно используемого в виде внутривенной инфузии, с добавлением 2,0 мл аутологичной сыворотки, предварительно отобранной у каждого добровольца и приготовленной в условиях строгой стерильности, будут использоваться в качестве перфузата для катетеров OFM. . Перистальтические насосы начнут работать в 00:00 для переливания перфузионных растворов со скоростью перфузии (режим двухтактного) 1 мкл/мин до 00:00 следующего дня. Образцы выделений из подкожной клетчатки будут собираться через равные промежутки времени, и параллельно будет выполняться забор венозной крови.

   Субъекты будут поддерживаться в условиях голодания в течение всего периода исследования. Они должны оставаться в помещениях исследовательского центра в течение четырех часов после завершения процедур исследования. В это время они получат полноценный обед и будут взяты дополнительные образцы крови для определения уровня глюкозы в крови и АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время). Нормальные значения должны быть обеспечены, прежде чем добровольцам будет разрешено уйти.

3. Измерения

3.1. Цитокины

Концентрации цитокинов будут измерять в образцах выделений и сыворотки с использованием мультиплексного проточного цитометрического анализа ELISA на основе шариков (система LUMINEX®100s, Luminex Corporation, Техас, США). Этим методом будут доступны следующие субстраты:

• С-реактивный белок
• Интерлейкин 6 (ИЛ-6)
• Интерлейкин 10 (ИЛ-10)
• CCL2/MCP-1
• Серпин Э1/ПАИ-1
• Фактор некроза опухоли альфа (ФНО-альфа)
• адипонектин

3.2. инсулин

Концентрация инсулина в образцах выделений и плазмы будет измеряться Исследовательской лабораторией Joanneum с использованием твердофазного двухцентрового ИФА (Mercodia, Уппсала, Швеция).

3.3. инулин

Инулин будет измеряться исследовательской лабораторией Joanneum с использованием полностью ферментативного метода.

3.4. Глюкоза

Концентрация глюкозы в образцах артериализованной крови будет измеряться в двух повторностях с использованием двух анализаторов глюкозы Beckman 2 (Beckman Instruments Inc., Фуллертон, Калифорния).

3.5. Неэтерифицированные жирные кислоты (NEFA)

Концентрации NEFA будут измеряться в плазме с использованием колориметрического и ферментативного методов.