De invloed van vetzuren op systemische en subcutane cytokines (TNF4)

1. Algemeen

   Onderwerpen worden geselecteerd om deel te nemen aan het protocol tijdens studiebezoek 1 volgens de in- en exclusiecriteria. Vervolgens zullen ze willekeurig worden toegewezen om continu een intraveneus infuus van 0,9% zoutoplossing of een lipide-heparine-oplossing (Intralipid 20%, 40 ml/uur, Fresenius Kabi plus Heparine 250 U/uur, IMMUNO Baxter AG) te krijgen gedurende 28 uur tijdens studiebezoeken V2 en V3. Voor studiebezoek 3 krijgen proefpersonen die tijdens het vorige bezoek voor het eerst 0,9% zoutoplossing kregen, intraveneus Intralipid 20% en vice versa.

2. Bezoek Procedures

   2.1. Screeningsdag (Bezoek 1)

   Vrijwilligers ontvangen algemene informatie over het onderzoek en ondertekenen de schriftelijke geïnformeerde toestemming. Elk onderwerp krijgt een opdrachtnummer volgens de inclusievolgorde. Lichamelijk onderzoek en bloedafname worden uitgevoerd en de gegevens worden als volgt vastgelegd in het Case Report Form (CRF):

   • In-/uitsluitingscriteria
   • Demografische gegevens, medische geschiedenis en gelijktijdige medicatie
   • Fysiek onderzoek
   • Vitale functies
   • Lichaamsgewicht en -lengte, Body mass index (BMI), taille- en heupomtrek en taille-tot-heupverhouding
   • Bloedbeeld, hematocriet, hemoglobine, C-reactief proteïne, vrije vetzuren, cholesterol, triglyceriden, natrium, kalium, calcium
   • Zwangerschapstest voor vrouwelijke proefpersonen die zwanger kunnen worden.

   2.2. Studiedag (Bezoek 2 en 3)

   Tijdens elk studiebezoek arriveren de proefpersonen om 7.00 uur in het ZMF (Centrum voor Medisch Onderzoek, Medische Universiteit Graz) na een nachtelijke vastenperiode van 12 uur. Een zwangerschapstest voor vrouwelijke proefpersonen die zwanger kunnen worden, wordt in de ochtend van elke studiedag uitgevoerd. Twee korte polyethyleen katheters worden ingebracht in antecubitale aderen van beide armen. Een eerste veneuze canule zal uitsluitend worden gebruikt voor bloedafname en de arm zal in een thermisch gereguleerde box (Hot-Box) worden geplaatst om gedurende de hele studieperiode op een temperatuur van 50°C te worden gehouden. De tweede veneuze canule wordt gebruikt voor infusie van zoutoplossing of lipide-heparine-oplossing en inuline.

   Om 8.00 uur wordt gestart met de infusie van zoutoplossing of Intralipid-oplossing. Op hetzelfde tijdstip wordt een continu infuus van inuline via een infuuspomp met een injectiespuit gestart met een bolus van 50 mg/kg en dit wordt gehandhaafd op een continue snelheid van 0,250 x creatinineklaring mg/min, tot het einde van de onderzoeksperiode.

   Om 11:00 uur worden OFM-katheters ingebracht in het periumbilicale gebied van elk onderwerp. Om belangrijke vertragingen bij het bemonsteren van subcutaan weefsel te voorkomen, wordt de afferente lus voor de katheter vooraf gevuld met de perfusaatoplossing. Acht milliliter van een steriele isotone oplossing (ELO MEL isoton, Fresenius Kabi, Oostenrijk) die gewoonlijk wordt gebruikt als intraveneuze infusie, aangevuld met 2,0 ml autoloog serum dat eerder van elke vrijwilliger is afgenomen en bereid onder zuivere steriele omstandigheden, zal worden gebruikt als de perfusaatoplossing voor de OFM-katheters . Peristaltische pompen beginnen om 12:00 uur te werken om de perfusaatoplossingen te infunderen met een perfusiesnelheid (push-pull-modus) van 1 µl/min tot 12:00 uur de volgende dag. Effluentmonsters van onderhuids weefsel zullen op regelmatige tijdsintervallen worden verzameld en veneuze bloedmonsters zullen parallel worden uitgevoerd.

   De proefpersonen zullen gedurende de gehele studieperiode onder nuchtere omstandigheden worden gehouden. Ze blijven in de faciliteiten van het onderzoekscentrum gedurende een observatieperiode van vier uur nadat de studieprocedures zijn voltooid. Op dat moment krijgen ze een volledige maaltijd en worden er extra bloedmonsters afgenomen om toegang te krijgen tot bloedglucose en aPTT (geactiveerde partiële tromboplastinetijd). Normale waarden moeten worden gegarandeerd voordat de vrijwilligers mogen vertrekken.

3. Afmetingen

3.1. Cytokinen

Cytokineconcentraties zullen worden gemeten in effluent- en serummonsters met behulp van een multiplexed flowcytometrische op korrels gebaseerde ELISA-assay (LUMINEX®100s System, Luminex Corporation, Texas, VS). De volgende substraten zijn toegankelijk via deze methode:

• C-reactief eiwit
• Interleukine 6 (IL-6)
• Interleukine 10 (IL-10)
• CCL2/MCP-1
• Serpin E1/PAI-1
• Tumornecrosefactor-alfa (TNF-alfa)
• Adiponectine

3.2. Insuline

Insulineconcentraties in effluent- en plasmamonsters zullen worden gemeten door Joanneum Research Laboratory met behulp van solid-phase two-site ELISA (Mercodia, Uppsala, Zweden).

3.3. Inuline

Inuline zal worden gemeten door Joanneum Research Laboratory, met behulp van een volledig enzymatische methode.

3.4. Glucose

De glucoseconcentratie in arteriële bloedmonsters zal in tweevoud worden gemeten met behulp van twee Beckman Glucose Analyzer 2 (Beckman Instruments Inc., Fullerton, CA).

3.5. Niet-veresterde vetzuren (NEFA)

NEFA-concentraties zullen worden gemeten in plasma met behulp van een colorimetrische en enzymatische methode.