结肠支架和肿瘤细胞播散

1. 患者招募：

   患者将从香港大学外科大肠外科招募，为期 12 至 18 个月。 我们的机构是香港大肠癌患者的三级转介中心。 符合纳入标准后，将征得患者的知情同意。

   该研究计划在结肠支架置入组中招募 25 名患者，以与对照组中的 15 名患者进行比较。

   纳入标准：

   结肠支架组

   1. 需要结肠支架置入术治疗的梗阻性结直肠癌患者
   2. 年龄 > 18 岁并能够给予知情同意
   3. 获得采血知情同意书

   控制组

   1. 结肠镜检查未置入支架的结直肠癌患者
   2. 年龄 > 18 岁并能够给予知情同意
   3. 获得采血知情同意书
2. 循环肿瘤细胞采血及检查

术前将采集约10ml EDTA血液进行检查（对照组为结肠镜支架置入术或结肠镜检查），术后3天每天重复采血。 血液将在抽取后 2 小时内送至实验室进行处理。 循环肿瘤细胞，特征为CD45-（排除造血细胞）、CD326+（标记上皮细胞）、CK18+和CK19+（标记肠细胞），即表达CD45-CD326+CK18/19+的细胞通过荧光激活细胞分选（FACS）。

对于每毫升血液，将添加 1 毫升 FCM 裂解溶液并孵育 5 分钟以裂解红细胞，然后以 1000 RPM 离心 5 分钟。 然后吸出上清液，将沉淀重悬于约 1 ml 冷的 1X PBS 中。将 10 µl 合适的抗体加入试管中，涡旋振荡并在黑暗和室温下孵育 15 小时。 孵育后，细胞将用 PBS 洗涤，然后与二抗孵育。 重复该过程，直到所有 4 种抗体都被标记到细胞上。 然后将在 FACS 机器（MoFlo，Beckman Coulter）上分析细胞。