Stent colónico y diseminación de células tumorales

1. Reclutamiento de pacientes:

   Los pacientes serán reclutados de la División de Cirugía Colorrectal, Departamento de Cirugía de la Universidad de Hong Kong, durante un período de 12 a 18 meses. Nuestra institución es un centro de referencia terciario para pacientes con cáncer colorrectal en Hong Kong. Se obtendrá el consentimiento informado de los pacientes una vez cumplidos los criterios de inclusión.

   El estudio planea reclutar a 25 pacientes en el grupo de stent colónico para compararlos con 15 pacientes en el grupo de control.

   Criterios de inclusión:

   Grupo de colocación de stent colónico

   1. Pacientes con cáncer colorrectal obstructivo que requieren la colocación de stent colónico como tratamiento
   2. Edad > 18 años y es capaz de dar su consentimiento informado
   3. Se obtuvo el consentimiento informado para la extracción de sangre.

   Grupo de control

   1. Pacientes con cáncer colorrectal que se someten a una colonoscopia sin colocación de stent
   2. Edad > 18 años y es capaz de dar su consentimiento informado
   3. Se obtuvo el consentimiento informado para la extracción de sangre.
2. Recolección de sangre y examen de células tumorales circulantes

Se recolectarán alrededor de 10 ml de sangre con EDTA para su examen antes del procedimiento (colonoscopía de stent o colonoscopia en el grupo de control) y la recolección de sangre se repetirá diariamente durante 3 días después del procedimiento. La sangre se enviará al laboratorio para su procesamiento dentro de las 2 horas posteriores a la extracción. Se detectarán células tumorales circulantes, que se caracterizan por CD45- (para excluir células hematopoyéticas), CD326+ (para marcar células epiteliales), CK18+ y CK19+ (para marcar células intestinales), es decir, células que expresan CD45-CD326+CK18/19+. por clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS).

Por cada ml de sangre, se agregará 1 ml de FCM Lysing solution y se dejará incubar durante 5 minutos para lisar los glóbulos rojos, seguido de centrifugación a 1000 RPM durante 5 minutos. A continuación, se aspirará el sobrenadante y el sedimento se resuspenderá en aproximadamente 1 ml de PBS 1X frío. Se agregarán 10 µl del anticuerpo apropiado a los tubos, se agitarán con vórtex y se incubarán durante 15 minutos en la oscuridad y a temperatura ambiente. Después de la incubación, las células se lavarán con PBS y luego se incubarán con el segundo anticuerpo. El proceso se repite hasta que los 4 anticuerpos se hayan marcado en las células. A continuación, las células se analizarán en una máquina FACS (MoFlo, Beckman Coulter).